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U1snRNA嵌合体核酶的抗丙型肝炎病毒作用被引量：1: 2004年; 目的鉴定特异性抗丙型肝炎病毒(HCV)核酶与具有细胞核靶向性的U1 snRNA组成的嵌合体在体外切割HCV RNA的活性。方法通过聚合酶链反应及克隆的方法用HCV特异性核酶(Rz)序列取代质粒pBSIISK+U1(含有人类野生型U1 snRNA基因全序)中U1 snRNA第三个茎环结构,重组质粒命名为pBSIISK+(U1-Rz)。再将pBSIISK+(U1-Rz)中核酶与U1 snRNA组成的嵌合体基因正向克隆于pGEM-T载体T7启动子的下游,重组质粒命名为pGEM-(U1-Rz)。质粒pGEM-(U1-Rz)和pGEM-Rz[含有与pGEM-(U1-Rz)相同的核酶序列]体外转录后,转录产物与靶RNAs在一定条件下进行切割反应,电泳后放射自显影。结果 U1 snRNA嵌合体核酶构建成功。嵌合体核酶与核酶对靶RNAs均有切割活性,且二者的切割活性相似。随着时间的延长和工具酶体积比的增加切割效率增加。结论特异性抗HCV核酶与U1嵌合体在体外具有良好的特异性催化切割活性。; 田梅梅王峰牛俊奇王美霞; 关键词：RNA基因丙型肝炎病毒毒作用 T7启动子 T载体工具酶

复方丹参对门脉高压症大鼠血流动力学的影响被引量：12: 2006年; 目的:探讨复方丹参对门脉血流动力学的影响。方法:用四氯化碳(CCl4)复合致病因子复制60只Wistar大鼠肝硬化模型,将其中56只成功制模大鼠随机均分为4组:复方丹参3、10及15 d组以及对照组,分别给予复方丹参(5 mL.kg-1.d-1)3、10及15 d和同剂量生理盐水15 d。分别于给药结束后检测门静脉血流量、肠系膜上动脉血流量、门静脉压力、腹主动脉压。结果:与生理盐水对照组比较,复方丹参3、10及15 d组的门静脉压力、门静脉血流量、肠系膜上动脉血流量、腹主动脉压力均呈梯度性降低(P<0.05),复方丹参15d组较3 d组和10 d组上述指标下降明显(P<0.05),复方丹参3 d和10 d组,血流动力学指标变化差异无显著性(P>0.05)。结论:复方丹参能降低血流量和门静脉压力,并且延长丹参用药时间则更有效地降低血流量和门静脉压力。; 刘星鲍万国牛俊奇丁云录; 关键词：丹参注射液门脉高压血流动力学

U1小核核糖核酸嵌合体核酶细胞内抑制丙型肝炎病毒表达的研究被引量：4: 2006年; 目的观察以U1小核核糖核酸为靶向基因构建的嵌合体核酶在细胞内抑制丙型肝炎病毒 (HCV)表达的作用。方法通过聚合酶链反应及克隆连接反应,将针对HCV核心区的特异性核酶序列代替了U1小核RNA的部分区域,构建出嵌合体核酶的真核表达载体;将其与带有荧光素酶报告基因的靶基因共转染Huh7细胞系,通过western blot及发光检测仪来判定抑制效率并与相同序列核酶的效率进行比较。结果 U1-嵌合体核酶构建成功;共转染结果显示核酶及嵌合体核酶对HCV表达均有抑制作用,但以嵌合体核酶的效率为高。结论以U1小核核糖核酸作为核酶载体可以增加核酶在细胞内的切割活性。; 王美霞金清龙潘煜王峰牛俊奇; 关键词：基因疗法

丙型肝炎病毒特异性锤头样核酶体外转录及切割活性的初步研究被引量：1: 2004年; 目的　研究针对丙型肝炎病毒 (HCV)特异性锤头样核酶 (Rz)的体外转录及切割活性。方法　设计 3种锤头样核酶 :Rz1、Rz2 分别作用于HCVRNA 5′ 非编码区 (5′ NCR)上核酸序列 136～16 0、313～ 337,Rz3 作用于核心 (C)区上核酸序列 373～ 388。为区别于反义核酸的封闭作用 ,设计在Rz3 的催化环上存在点变异 (G取代A)的变异核酶Rzm用作对照。体外转录出靶HCVRNA和核酶RNA ,在一定条件下 ,将3 2 P标记的靶HCVRNA与核酶RNA按不同浓度比例进行切割反应 ,电泳后放射自显影 ,通过同位素扫描成像分析仪分析来评价核酶切割效率。结果　除Rzm外 ,在生理温度下 ,3种核酶均有活性 ,并随核酶浓度增加而提高 ;核酶切割靶位点距HCV起始密码子近切割效率高。结论　设计并观察到体外具有HCV特异性切割活性的锤头样核酶。; 华瑞牛俊奇王峰; 关键词：丙型肝炎病毒体外转录

以U_1小核核糖核酸为靶向基因构建HCV特异性嵌合体核酶被引量：2: 2004年; 目的 :以人类 U1 小核核糖核酸为载体 ,构建特异性嵌合体核酶 ,以期用于 HCV感染的基因治疗。方法 :将 HCV特异性核酶序列设计为引物序列一部分 ,以人类 U1 小核核糖核酸为模板 ,经 PCR法及 2次克隆得到嵌合体 ,使核酶序列替代 U1 结构中第 3个茎 -环。结果 :经测序证实新建质粒中确实有核酶序列且替代了第 3个茎 -环。结论 :以 U1 小核核糖核酸为靶向基因可以构建出 HCV特异的 U1; 王美霞牛俊奇王峰; 关键词：基因疗法聚合酶链反应

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国家自然科学基金(30070692)