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上海市科委重大科技攻关项目(12391901900)

作品数：7 被引量：12H指数：2
相关作者：刘成倩易建中李红王静陈磊更多>>
相关机构：上海市农业科学院上海海洋大学更多>>
发文基金：上海市科委重大科技攻关项目更多>>
相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 7篇中文期刊文章

领域

  • 6篇农业科学
  • 1篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 5篇病毒
  • 2篇疫苗
  • 2篇原核表达
  • 2篇基因
  • 1篇毒株
  • 1篇疫病
  • 1篇疫苗研制
  • 1篇荧光
  • 1篇原核表达载体
  • 1篇圆环病毒
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇真核表达载体
  • 1篇质粒
  • 1篇人畜
  • 1篇人畜共患
  • 1篇人畜共患病
  • 1篇启动子
  • 1篇重组蛋白
  • 1篇重组质粒

机构

  • 7篇上海市农业科...
  • 6篇上海海洋大学

作者

  • 7篇李红
  • 7篇易建中
  • 7篇刘成倩
  • 5篇陈磊
  • 5篇王静
  • 3篇孙晓云
  • 1篇陈斌
  • 1篇范兴琼
  • 1篇毛慧

传媒

  • 5篇上海农业学报
  • 1篇上海畜牧兽医...
  • 1篇中国畜牧兽医

年份

  • 1篇2018
  • 1篇2017
  • 1篇2016
  • 2篇2015
  • 2篇2014
共 7 条 记 录，以下是 1-7
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排序方式：
西尼罗河热诊断技术与疫苗研究进展被引量：3
2015年
西尼罗河热（West Nile Fever，WNF）是由西尼河病毒（West Nile Virus，WNV）引起的一种人畜共患病。WNV属于黄病毒科黄病毒属，为一种单链RNA病毒，经蚊子传播，可引起人类发病，也可引起马、鸟类、猫等动物发病。1937年该病毒在西尼罗河地区的乌干达被发现，因此而得名。此病毒由最初只在非洲地区流行到后来跨越到欧洲、亚洲，直到1999年美国纽约出现人感染事件，引起了世界的广泛关注。2002年此病毒肆虐美洲，约有4000多人在44州遭受感染，284人因此而丧生。
刘成倩李红易建中毛慧王静陈磊孙晓云
关键词：西尼罗河热黄病毒科疫苗VIRUS人畜共患病RNA病毒
在昆虫细胞中表达西尼罗河病毒prM+E蛋白
2018年
采用PCR技术扩增prM+E基因,将其插入到供体质粒pFast-Bac1中得到重组质粒Pfast-Bac1-W-PE,之后转化大肠杆菌DH10-Bac,构建包含西尼罗河病毒prM+E基因的重组杆状病毒,然后感染正常的sf9细胞,收集感染不同时间段的细胞及上层培养基。结果表明:在感染后的第1天目的基因就得到了转录,同时有少量的重组杆状病毒释放到培养基中;SDS-PAGE和Western-Blot检测结果显示,在43.0ku与66.0ku条带之间,感染细胞裂解液较正常细胞的裂解液多出一条带,该蛋白为WNV完整的E蛋白,而且这一差异蛋白能与WNV兔多抗反应。
刘成倩李红陈斌易建中
关键词：西尼罗河病毒杆状病毒表达系统
新城疫病毒Lasota株基因组全长cDNA的构建与序列分析
2015年
将Lasota病毒RNA反转录为cDNA,按照GenBank上公布的Lasota基因组序列(AF 077761)设计了5对引物进行全基因组的扩增(RT-PCR),并将各个片段连于克隆载体pMD_(18)-T,获得高拷贝的基因序列,然后通过酶切连接将测序正确的各个片段连接到pET-30a载体。PCR分片段扩增、酶切鉴定及测序结果表明,所构建的Lasota全基因组cDNA基因序列正确,连入载体的位置与预期完全一致。
于宗幸刘成倩李红范兴琼陈磊王静易建中
关键词：新城疫病毒LASOTA毒株CDNART-PCR重组质粒
猪圆环病毒2型Rep基因真核表达载体的构建和免疫原性分析
2016年
根据GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列设计并合成1对特异性引物,进行PCR扩增,从PCV2突变株中扩增出PCV2 Rep基因,对PCR扩增产物清洁后进行双酶切,连接到pEGFP-C1载体上,转化到大肠杆菌DHSα感受态细胞中,经PCR筛选和测序后鉴定出正确的重组基因,完成真核表达载体的构建。将重组质粒转染到PK15细胞中,收取病毒液抽提DNA,PCR检测到Rep基因,证明转染是成功的。进行间接免疫荧光试验,可以检测Rep基因在PK15细胞中的表达,试验结果很好的验证了Rep基因的免疫原性。这为进一步研究PCV2的生物学活性及PCV2新型疫苗奠定了坚实的基础。
王静刘成倩李红易建中于宗幸陈磊孙晓云
关键词：猪圆环病毒2型真核表达载体间接免疫荧光
人工合成高效启动子用于基因治疗及疫苗研制
2017年
为了制备可用于基因治疗载体构建及疫苗研制的启动子,根据高效启动子的特点,人工合成了一段特异启动子(SEP)序列,通过酶切连接将其插入到含有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1载体内,得到一新的启动子ESP,借助转染试剂Lipofectamine^(TM)2000将其和pEGFP-C1质粒转入BHK21细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况。结果显示:含有启动子ESP序列的pEGFP-ESP-C1荧光蛋白表达量明显高于pEGFP-C1,而且表达稳定。结果提示启动子ESP可以用于基因治疗载体的构建,将导入的基因在细胞内的表达水平提高,为基因治疗的最后成功打下基础。
刘成倩李红易建中孙晓云
关键词：启动子基因治疗疫苗研制
猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因原核表达载体的构建与表达被引量：2
2014年
根据GenBank上已公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计1对引物,用RT-PCR方法扩增出去除部分疏水区的PRRSV-M基因,并将其克隆到原核表达载体PET-30a上,得到重组质粒PET-30a-M。将重组质粒转化大肠杆菌transetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳及Western blot分析,显示重组蛋白分子量约1 5.7 kD,且此蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。
刘成倩王静于宗幸李红易建中陈磊
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因原核表达重组蛋白
鸡干扰素-α基因原核表达载体的构建及高效表达被引量：7
2014年
干扰素(IFN)-α因其具有很强的抗病毒活性而备受关注。本研究根据GenBank上公布的鸡IFN-α核酸序列设计1对引物,用PCR方法扩增出鸡IFN-α基因,并将其克隆到原核表达载体pET-32a及pET-30a-DsbA上,得到重组质粒pET-32a-IFN-α及pET-30a-DsbA-IFN-α。将重组质粒转化大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞,经SDS-PAGE电泳及Western blotting分析,结果表明pET-30a-DsbA-IFN-α表达量较高,表达的融合蛋白分子质量约40.4ku,表达产物主要以包涵体形式存在,且表达的融合蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。
刘成倩王静李红于宗幸易建中陈磊
关键词：干扰素-A原核表达
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