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含表皮干细胞组织工程皮肤的构建研究被引量：8: 2007年; 目的用表皮干细胞和成纤维细胞作为种子细胞研制一种增殖能力强的具有表皮、真皮的组织工程化人工复合皮肤。方法从幼儿包皮中分离表皮干细胞，用胶原Ⅳ纯化、富集表皮干细胞，接种在3T3细胞滋养层上，将体外传代培养的表皮干细胞和真皮成纤维细胞分别接种在经冷冻干燥及戊二醛交联的Ⅰ型胶原基质网架的两侧，在液面下培养3周后，改为气-液界面培养，构建含表皮干细胞的复合皮肤，并进行组织学、免疫组织化学及电镜观察。结果表皮干细胞呈克隆状生长，G0/G1期细胞和a6^briCD71^dim细胞百分率明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），实验组K19免疫细胞化学染色呈阳性，对照组呈阴性。光镜下观察可见体外培养的含表皮干细胞的人工复合皮肤，具有表皮和真皮，表皮层由基底至浅层可见3—5层细胞，角蛋白免疫组化染色阳性。结论表皮干细胞种植于胶原海绵膜上，可生成全层组织工程皮肤，具备了同正常皮肤类似的结构，表明其具有在体外分化成表皮的能力。; 胡葵葵戴育成李剑雷英袁敬东李洁吴琼; 关键词：表皮干细胞

皮肤干细胞的研究进展被引量：7: 2004年; 皮肤干细胞具有无限增殖及多向分化潜能的特性 ,是皮肤组织工程理想的种子细胞。但关于皮肤干细胞定位、来源、分离纯化方法以及分子标志等尚有争议。; 胡葵葵胡琼华戴育成; 关键词：干细胞皮肤组织毛囊增殖能力

利用胶原构建皮肤组织工程支架的研究被引量：9: 2005年; 目的利用胶原海绵膜构建皮肤组织工程支架.方法从大鼠鼠尾肌腱中提取胶原.胶原和6-硫酸软骨素冷冻干燥,重度脱水及戊二醛交联后制得胶原海绵膜.将其行扫描电镜观察;并埋藏在Balb/c小鼠皮下,术后定期取出观察组织学变化.将成纤维细胞种植于该支架上.结果构建的支架孔径均匀,孔径在50～100 μm;具有良好的组织相容性,并逐渐降解.成纤维细胞于其上生长良好.结论该支架适合成纤维细胞生长,可作为组织工程皮肤的支架.; 胡葵葵戴育成袁敬东; 关键词：胶原成纤维细胞小鼠

组织工程活性真皮的构建研究被引量：7: 2006年; 目的探讨用脱细胞真皮(ADM)、胶原海绵膜(SCM)、胶原凝胶构建活性真皮的可行性。方法从幼儿包皮中纯化、扩增成纤维细胞(Fb),将其分别种植于ADM、胶原凝胶、SCM上,观察细胞增殖及支架收缩等情况。结果Fb在ADM上不能成活;在SCM上增殖良好,人工真皮收缩不明显;在胶原凝胶中增殖活跃,但人工真皮收缩明显。结论利用SCM构建的人工真皮,是一种较理想的活性真皮。; 胡葵葵戴育成袁敬东; 关键词：胶原成纤维细胞脱细胞基质

利用胶原海绵膜构建人工真皮的研究被引量：6: 2004年; 目的 :探讨利用胶原海绵膜构建人工真皮的可行性 .方法 :从大鼠鼠尾肌腱中提取胶原 .胶原和 6 -硫酸软骨素冷冻干燥 ,重度脱水及戊二醛交联后制得胶原海绵膜 .将其行扫描电镜观察 ;并埋藏在Balb/c小鼠皮下 ,术后定期取出观察组织学变化 .将成纤维细胞种植于该支架上 .结果 :构建的支架孔径均匀 ,孔径在 5 0～ 10 0um .具有良好的组织相容性 ,并逐渐降解 .成纤维细胞于其上生长良好 .结论 :该支架适合成纤维细胞生长 ,可作为组织工程皮肤的支架 .; 胡葵葵胡琼华戴育成; 关键词：胶原成纤维细胞

脐血间充质干细胞分离培养的理论研究与应用被引量：9: 2007年; 目的:间充质干细胞具有多向分化潜能,在一定的实验条件控制下可分化为骨、软骨、肌肉、神经、肝和内皮等多种细胞,本文在于进一步综合分析脐血间充质干细胞的优化分离培养条件。资料来源:应用计算机检索Medline、PubMed数据库1980-01/2006-12期间有关脐血间充质干细胞分离培养的文献,检索词“mesenchymal stem cells,human umbilical cord blood(HUCB),isolation,culture”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索CNKI,万方数据库1990-01/2006-12期间相关文献,限定文章语言种类为中文,检索词“间充质干细胞,脐血,分离,培养”。并手工查阅相关书籍。资料选择:检索有关脐血间充质干细胞分离培养的综述和实验论据,参考综合各文献中脐血间充质干细胞培养的方法条件,选择比较典型和比较新颖的文献进行综合。资料提炼:共检索到79篇有关脐血间充质干细胞分离纯化、培养扩增的文献,纳入30篇。资料综合:国内外有大量的实验证实,间充质干细胞具有肯定的支持造血功能,而且在一定实验条件控制下可分化为骨、软骨、脂肪、肌腱、肌肉、神经、基质、肝、内皮等多种细胞。脐血来源间充质干细胞具有低免疫原性等很多优点已成为干细胞研究领域的热点,目前分离培养间充质干细胞的方法多样,日趋成熟,但仍存在许多不足,需进一步探索间充质干细胞的分离纯化技术。结论:目前已经建立了多种脐血间充质干细胞分离纯化培养扩增的方法,为其在细胞工程和组织工程的应用提供了基础。; 蔡琼霞熊华锋胡葵葵张继平李洁李蜀光贺文风; 关键词：脐血间充质干细胞

表皮干细胞活性复合皮肤修复裸鼠全层皮肤缺损被引量：5: 2006年; 目的用表皮干细胞和成纤维细胞作为种子细胞,研制一种增殖能力强具有表皮、真皮的组织工程化人工复合皮肤。方法从幼儿包皮中分离表皮干细胞,用胶原Ⅳ纯化、富集表皮干细胞,接种在3T3细胞滋养层上,将体外传代培养的表皮干细胞和真皮成纤维细胞分别接种在经冷冻干燥及戊二醛交联的Ⅰ型胶原基质网架的两侧,在液面下培养2周后,改为气-液界面培养,构建复合皮肤,移植到裸鼠全层皮肤缺损处,以表皮细胞胶原海绵复合皮肤和无细胞接种的胶原海绵膜作为对照。术后进行大体观察,在第7、14、21天取材行组织学、免疫组织化学及电镜观察。结果用表皮干细胞构建的复合人工皮肤增殖能力强,新生的皮肤瘢痕轻,形态满意,创面愈合的速度和质量均优于对照组。结论在胶原海绵上用表皮干细胞构建的复合人工皮肤增殖能力强,较好地解决了种子细胞的老化问题,可望成为一种较为理想的皮肤替代物。; 胡葵葵戴育成李剑袁敬东李洁吴琼; 关键词：表皮干细胞创面愈合

人表皮干细胞的体外分离与培养被引量：8: 2006年; 目的探索人表皮干细胞(ep iderm a l stem ce lls,ESC s)的分离方法和培养体系。方法用Ⅳ型胶原纯化、富集ESC s,将黏附细胞(实验组)和未黏附细胞(对照组)分别接种在Ⅳ型胶原基质(实验组为A1,对照组为A2)和3T 3细胞滋养层(实验照组为B1,对照组为B2),培养体系为:低糖无钙DM EM培养基(添加10%胎牛血清、表皮生长因子10μg/L、氯化钙0.05 mm o l/L、氢化可的松0.8 m g/L),观察细胞能否呈克隆状生长,用流式细胞仪和免疫细胞化学染色,对ECSs周期和表型进行分析。结果实验组细胞呈克隆状生长,G0/G1期细胞和α6briCD71d im细胞百分率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),实验组角蛋白19免疫细胞化学染色呈阳性,对照组呈阴性。结论人ESC s可通过Ⅳ型胶原快速黏附分选,并可在适当的培养体系里扩增。; 胡葵葵戴育成李剑袁敬东李洁吴琼; 关键词：表皮干细胞细胞培养细胞分离体外研究

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国家自然科学基金(30360106)

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