国家自然科学基金(30770463)
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- 自我剪接内含子结构与剪接的关系
- 2009年
- 自我剪接内含子是指具有催化活性的RNA分子,可介导自身的剪切和两侧外显子的连接。自我剪接内含子包括Ⅰ型内含子和Ⅱ型内含子两类,主要存在于原生生物、真菌、藻类、植物细胞器以及细菌和古细菌(Ⅱ型内含子)基因组中。尽管核苷酸序列保守性很低,但两类自我剪接内含子均能分别形成不同的保守二级结构,且它们都可通过两步连续的转酯反应完成剪接。但由于其结构存在较大差异,导致其剪接机制也各不相同。对其结构与剪接关系的深入研究将有助于进一步探索自我剪接内含子在生物体内的功能、起源和进化。
- 张相萍林瑛屈艾孟清
- 关键词:ORF剪接
- The Function of Group Ⅱ Intron D Ⅳ a Region in Protist
- This paper is to study the function of DIVa in groupⅡintron cloned from T.erythraeum dnaNgene.We used maturase...
- 张相萍刘相钦孟清
- 文献传递
- 基于卡那霉素抗性建立的研究Ⅰ类内含子结构与功能关系的系统
- 2011年
- Ⅰ类内含子(group I intron)是研究RNAs结构与功能关系的理想元件,在解释RNA折叠理论、催化机制等方面起着重要作用;对其结构与功能关系的研究也因此成为一个非常重要的课题.本研究建立了一个基于卡那霉素抗性进行Ⅰ类内含子结构与功能关系研究系统,将源于海洋蓝细菌Nostoc punctiforme(Npu)核糖核酸还原酶基因(ribonucleotide reductase,Rir)中的1个Ⅰ类内含子插入到pDrive质粒的卡那霉素抗性基因(kanamycin resistance gene,KanR)内构建得pKR12质粒并转化大肠杆菌(E.coli).只有内含子剪接的阳性克隆才能生成KanR蛋白并在Kan抗性平板上生长.结果显示,pKR12转入E.coli后不能在Kan抗性平板上生长,RT-PCR检测仅可见前体带,表明插入到KanR中的Npu Rir内含子没有发生剪接.随后通过易错PCR建立内含子的随机突变库并用Kan抗性筛选进行定向演化,产生有剪接活性的内含子突变体,RT-PCR检测显示剪接发生.由于内含子剪接活性的改变可通过Kan抗性变化在LB平板上得以反映,因此该系统有望成为简单快速地研究Ⅰ类内含子结构与功能关系的有利工具.
- 殷伟林瑛孟清
- 关键词:卡那霉素抗性
- 细菌Ⅱ组内含子(GroupⅡ intron)的转移机制
- 2009年
- 约14年前在真核生物中发现的Ⅱ组内含子不仅具有催化功能,而且是可移动的逆转录元件。近年来研究发现细菌中也有可移动的Ⅱ组内含子,它们能够逆转录归巢进入同源无内含子的等位基因位点或者逆转录转座进入非等位基因位点。本文试图从细菌Ⅱ组内含子编码蛋白的活性功能域的组成与Ⅱ组内含子转移发生途径之间的联系,综述已知细菌Ⅱ组内含子主要的移动机制。同时,依据作者多年来研究海洋蓝细菌Ⅱ组内含子编码蛋白对Ⅱ组内含子剪接机理的结果,探讨了海洋蓝细菌Ⅱ组内含子是否会发生转移以及可能的转移方式,探讨了Ⅱ组内含子在生物基因组中发生转移的生物学意义。
- 齐丹孟清