辽宁省教育厅高等学校科学研究项目(L2010335)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关领域：生物学更多>>
- 海藻糖合成酶基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2012年
- 目的克隆海藻糖合成酶(Trehalose synthase,Tres)基因,并在大肠杆菌中表达重组酶。方法以长白山温泉Thermus thermophilus SH-110基因组DNA为模板,PCR扩增Tres基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-Tres,转化E.coli BL21(DE3),分别采用IPTG和乳糖诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和薄层色谱(Thin layer chromatography,TLC)分析。结果重组表达质粒pET-30a(+)-Tres经双酶切及测序证实构建正确;IPTG和乳糖均能诱导重组蛋白的表达,且乳糖诱导的蛋白表达量较高;表达的重组酶Tres相对分子质量约为110 000,可与鼠抗6×His单克隆抗体特异性结合;粗酶液的酶活力为8 760 U/μg,是野生菌酶活的10倍;重组酶水解麦芽糖产物经TLC分析证实,其具有较强的海藻糖合成酶活性。结论已成功在大肠杆菌中表达了重组Tres,为大规模生产海藻糖奠定了基础。
- 尚宏丽顾英付莉张挺
- 关键词：海藻糖合成酶克隆原核细胞基因表达
- 响应面法优化海藻糖合酶产菌的发酵条件被引量：1
- 2012年
- 为了优化响应面法海藻糖合酶产生菌pET-30a(+)/TreS的发酵培养基,用Plackett-Burman设计法评价发酵培养基的8个成分对海藻糖合酶的影响,然后用最陡爬坡实验确定重要成分在中心复合设计中的取值变化范围,最后用中心复合设计响应面法求出了重要成分的最佳浓度。结果表明:麦芽糖、蛋白胨和牛肉膏对海藻糖合酶酶活力影响显著(P<0.05),是重要成分,其最佳浓度分别为:麦芽糖22.07 g/L、蛋白胨5.46 g/L、牛肉膏2.16 g/L。优化后的培养基酶活力达到0.826 U/mL,比基础发酵培养基培养重组菌的酶活力提高了2倍。说明数理统计实验设计及分析的方法成功地用于了海藻糖合酶基因工程菌pET-30a(+)/TreS的发酵培养基优化,为工业化发酵生产海藻糖合酶奠定了理论基础。
- 顾英宋玉坤尚宏丽
- 关键词：海藻糖合酶基因工程菌发酵条件响应面分析法
