国家自然科学基金(30901327)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 稳定表达人CD14细胞系Hela-CD14的建立
- 2012年
- 目的:建立稳定表达人CD14分子的Hela-CD14细胞系,为研究CD14分子及CD14相关性疾病提供研究材料。方法:以人CD14mRNA为模板,通过RT-PCR法扩增CD14基因,T-A克隆后测序核实CD14基因序列。通过EcoRⅠ/XbaⅠ双酶切和体外连接法将人CD14基因连接到真核表达载体pcDNA 3.1(+)中,通过转化、克隆得到阳性重组质粒pcDNA 3.1(+)/CD14。将pcDNA 3.1(+)/CD14转染人宫颈癌Hela细胞,经G418筛选、定量PCR(qPCR)和免疫荧光检测CD14基因和蛋白的表达,筛选出稳定表达人CD14阳性的Hela-CD14细胞系。结果:测序显示,扩增到的人CD14基因序列正确,双酶切质粒结果表明,CD14基因成功克隆到pcDNA 3.1(+)载体中;免疫荧光结果显示,人CD14主要以膜蛋白形式在Hela细胞上成功表达。结论:本研究建立了稳定的以膜蛋白形式表达人CD14抗原的细胞系Hela-CD14。
- 宁铂涛宋华杨世隆徐卫群汤永民
- 关键词：转染逆转录聚合酶链反应
