国家自然科学基金(39770689)
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
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- 相关机构：第二军医大学中国人民解放军第88医院医学部更多>>
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- 重组人单核细胞趋化蛋白-1在大肠杆菌中表达的优化
- 2001年
- 目的 :优化重组人单核细胞趋化蛋白 - 1(rhu MCP- 1)在大肠杆菌 DE3中的表达 ,生产 rhu MCP- 1。 方法 :应用 NBS15 L T.DR发酵罐 ,研究了诱导时不同的 p H值、温度、搅拌速率、通气量和异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)浓度对表达的影响 ,并利用正交设计对发酵条件进行优化。 结果 :正交试验表明溶氧条件对 rhu MCP- 1表达水平的影响较显著 ,其中搅拌速率和通气量为最大的影响因素 ,搅拌速率为 30 0 r/ m in和通气量 10 L / min时 ,表达水平最高 ,重组蛋白的含量可达 40 %以上。 结论 :本实验为该工程菌的中试提供了最佳的表达诱导条件 。
- 苗红郭葆玉杨旭袁鹏群
- 关键词：单核细胞趋化蛋白-1重组融合蛋白质类大肠杆菌基因表达
- 人单核细胞趋化蛋白1基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2000年
- 目的：克隆表达具有重要生物功能的人单核细胞趋化蛋白１（ｈｕＭＣＰ－１）。方法：从人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中提取 ｐｏｌｙ（Ａ）~＋ ＲＮＡ，用 ＲＴ－ＰＣＲ法扩增出 ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ。将 ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ插入融合表达载体 ｐＧＥＸＩＮ， １ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后获得高效表达。结果： Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证明与 ｈｕＭＣＰ－１单克隆抗体有明显交叉反应。结论：ｈｕＭＣＰ－１基因的克隆并表达成功为今后的实验室和临床研究提供了有用的材料。
- 王汉涛郭葆玉屠岳王元和张淑英孟荣贵
- 关键词：基因克隆单核细胞趋化蛋白
- 克隆人胸腺素α原cDNA及RNA二级结构分析和带Xa因子的融合表达被引量：11
- 2000年
- 目的：克隆表达具有重要生物功能的胸腺素α原ｃＤＮＡ（ｈｕｍ ａｎ ｐｒｏｔｈｙｍ ｏｓｉｎα， ｈｕＰＴＭＡα）。方法：从健康中国人ＰＢＭＣｐｏｌｙ（Ａ）＋ ＲＮＡ中采用ＲＴ－ＰＣＲ法克隆ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ，并作ＲＮＡ二级结构分析。结果：克隆出长度为３００ ｂｐ，编码１００ 个氨基酸的ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ，经氨基酸序列分析发现在３７～４１ 位缺失Ａｓｎ３７ －Ｇｌｙ３８ －Ａｓｎ３９ －Ａｌａ４０－Ｇｌｕ４１ 和６５～６８ 位缺失Ｇｌｕ６５－Ｇｌｕ６６ －Ｇｌｕ６７ －Ｇｌｕ６８ ，与国际基因库连接检索证明是与ｈｕＰＴＭＡα有８６．４％ 同源性的一个新亚型，融合表达蛋白的相对分子质量为３．７×１０４，有促进ＩＦＮ和ＴＮＦ产生的生物学活性。结论：本研究克隆的ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ是中国人中新发现的一个多态型基因序列，它的克隆并表达成功为今后该基因的免疫功能研究及中国人基因型研究分析提供了有用的材料。
- 郭葆玉余建国张淑英道书艳苗红邱磊
- 关键词：胸腺素Α原RNA克隆CDNA
- 人CCR55′侧翼调控序列克隆测定及基序分析被引量：2
- 2000年
- 目的 :克隆人 CCR5 5′侧翼调控序列及其基序分析。方法 :设计单引物 ,利用单向多循环 PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化人 CCR5 5′侧翼调控序列基因组 DNA,PCR产物作为序列分析模板。 结果 :得到长为 1.5 kb的人 CCR5 5′侧翼调控序列基因组 DNA序列 ,并对该区域的基序进行了分析。结论 :该方法适合于基因组 DNA,特别是逆向扩增一些读框区 5′侧翼调控序列。
- 郭葆玉张淑英余建国道书艳卞广兴
- 关键词：CCR5克隆
