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安徽省人才开发资金资助项目(20052040)

作品数：4 被引量：4H指数：1
相关作者：何晓东沈佐君李道静张永娟孙利更多>>
相关机构：安徽医科大学附属省立医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省人才开发资金资助项目更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生

主题

  • 4篇细胞
  • 2篇细胞株
  • 2篇耐药
  • 2篇基因
  • 2篇氨甲蝶呤
  • 2篇MTX
  • 2篇A549细胞
  • 2篇A549细胞...
  • 1篇电泳
  • 1篇对映
  • 1篇对映体
  • 1篇叶酸
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光定量
  • 1篇实时荧光
  • 1篇实时荧光定量
  • 1篇实时荧光定量...
  • 1篇髓细胞
  • 1篇肿瘤
  • 1篇肿瘤细胞

机构

  • 4篇安徽医科大学...

作者

  • 2篇沈佐君
  • 2篇何晓东
  • 1篇朱园园
  • 1篇许维东
  • 1篇孙余婕
  • 1篇李明
  • 1篇董林
  • 1篇吴剑锋
  • 1篇张白银
  • 1篇陶绍能
  • 1篇刘锐
  • 1篇孙利
  • 1篇张永娟
  • 1篇李道静

传媒

  • 2篇中华检验医学...
  • 1篇国际检验医学...
  • 1篇实用检验医师...

年份

  • 1篇2013
  • 1篇2011
  • 1篇2009
  • 1篇2007
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
氨甲蝶呤耐药细胞内整体DNA甲基化水平检测方法的建立及其应用被引量：1
2009年
目的建立一种简便快速检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法，以用于临床甲基化诊断。方法采用高效毛细管电泳技术，以pH9．6的48mmol／L碳酸氢钠溶液[含60mmoL／L十二烷基硫酸钠（SDS）]为分离缓冲液，检测波长为256nm，在20kV电压下，0．7psi压力进样时间5s，对2’-脱氧胞苷（dC）、5-甲基-2’-脱氧胞苷（mdC）、2’-脱氧腺苷（dA）、2’-脱氧胸苷（dT）、2’-脱氧鸟苷（dG）5种物质进行分离。在此基础上检测氨甲蝶呤（MTX）诱导的肺癌A549耐药细胞株内整体DNA甲基化水平。结果通过不断优化分离缓冲液中SDS浓度（40、60、80mmol／L）、pH值（9．4、9．6、9．8）、分离电压（15、17、19、20、22kV）、进样时间（5、10、15、20、30S）和毛细管温度（15、20、25、30℃），建立高效毛细管电泳检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法，可在10min内实现dC、mdC、dA、dT、dG的完全分离，其日内变异系数（CV）〈0．2％，日间CV〈2％，最低检出限为2μmol／L。检测肺癌A549亲本细胞甲基化水平为（4．80±0．52）％；而不同浓度（15、30、40μmol／L）MTX诱导耐药A549细胞株的甲基化水平分别为（4．20±0．44）％、（3．70±0．36）％、（3．10±0．35）％。结论建立高效毛细管电泳检测整体DNA甲基化水平的方法具有高效、快速、简单、灵敏的特点；MTX耐药细胞株内整体DNA甲基化水平随着耐药浓度的增加明显降低。
李明胡世莲何晓东陶绍能董林朱园园吴剑锋沈佐君
关键词：氨甲蝶呤DNA甲基化电泳
肿瘤细胞对氨甲蝶呤耐药相关酶基因组学的研究
2007年
肿瘤细胞对化疗药物氨甲蝶呤易获得耐受性，其耐受的机制很多。近年来，随着人们对其在基因水平研究的逐渐深入，发现氨甲蝶呤在代谢途径中主要的二氢叶酸还原酶和叶酰聚谷氨酸合成酶编码基因突变是引起耐受的主要原因，它们已经成为当今研究的热点。现综合近年来相关的文献报道，从基因组学和其相关氨基酸突变的角度阐述肿瘤细胞获得性耐药的生化机制。
金鑫（综述）沈佐君（审校）
关键词：氨甲蝶呤二氢叶酸还原酶
MTX对映体耐药A549细胞株中EGFR基因mRNA的表达分析
2013年
【摘要】目的探讨表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR）在氨甲喋呤（methotrexate，MTX）对映体L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX耐药A549细胞株中的表达。方法采用RT-PCR方法测定肺癌A549敏感细胞株和15p,moUL、35p,mol／L、55p,mol／L的L-（＋）-MTX和D-（-）-MTXA549耐药细胞株中EGFRmRNA表达情况。结果15μmol／L、35μmol／L、55μmol／LL-（＋）-MTXA549耐药细胞株中EGFR基因表达的mRNA相对含量分别为肺癌A549敏感细胞株的（1．55±0．26）倍、（1．86±0．13）倍、（1．20~0．05）倍。RT—PCR结果显示，A549敏感细胞株和L-（＋）-MTX各浓度A549耐药株均扩增出315bp条带，有EGFR基因表达，而3种浓度的D-（-）-MTX耐药细胞株中EGFR基因不表达。结论MTX诱导耐药后A549细胞株中EGFRmRNA发生变化，且在3种浓度两种对映体细胞株间具有明显的手性差异，MTX可能通过改变EGFR基因启动子的甲基化状态，影响EGFR的表达。
张勇银沈佐君何晓东孙余婕张永娟
关键词：氨甲喋呤对映体反转录聚合酶链反应
实时荧光定量PCR法检测MTX对映体耐药A549细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGSmRNA的表达被引量：3
2011年
目的建立实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞中FPGSmRNA表达的方法，研究MTX对映体[L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX]耐药细胞株中FPGS的基因表达差异，并用于观察白血病患者MTX治疗耐药前后FPGSmRNA表达水平的变化。方法用SYBRGreenI为荧光染料，以β—actin作参照，建立检测FPGSmRNA的实时荧光定量PCR方法。根据Ct值、标准曲线相关系数、斜率、重复性曲线、熔解曲线、扩增效率曲线等进行方法学评价。并用该方法检测MTX对映体耐药细胞株及应用MTX耐药的14例白血病患者骨髓细胞中FPGSmRNA的表达。结果建立的标准曲线ct值与模板浓度有良好的线性关系，FPGS和β-actin标准曲线相关系数分别为0．9968和0．9987，斜率分别为-3．595和-3．740，批内CV为1．27％-2．95％，批间CV为3．82％；熔解曲线均呈单个特异峰，扩增效率相似（斜率为0．0217）；L．（＋）-MTX耐药细胞和D．（-）-MTX耐药细胞中FPGSmRNA相对含量分别为（3．51±0．66）和（0．16±0．01），A549亲本细胞（S）中FPGSmRNA相对含量为（1．00±0．31），差异有统计学意义（F=64．45，P〈0．01）；L-（＋）-MTX耐药细胞和D．（-）-MTX耐药细胞间FPGSmRNA相对含量差异有统计学意义（q=9．29，P〈0．01）。白血病患者应用MTX治疗耐药后，FPGSmRNA表达水平为（0．35±0．04），用药前为（1．00±0．44），差异有统计学意义（t=8．83，P〈0．01）。结论建立的实时荧光定量PCR检测FPGSmRNA的方法重复性好、特异度高，可用于FPGSmRNA含量分析。MTX诱导耐药后细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGSmRNA表达发生了变化，MTX2种对映体形式在细胞耐药机制中可能发挥了不同的作用。
孙利何晓东孙余婕许维东李道静张白银张永娟刘锐沈佐君
关键词：白血病
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