北京市教育委员会科技发展计划面上项目(KM200411417014)
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
- 相关作者：赵伟陶凤云董安康马润宇徐宏博更多>>
- 相关机构：北京联合大学北京化工大学更多>>
- 发文基金：北京市教育委员会科技发展计划面上项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 中国林蛙卵核糖核酸酶的分离纯化及其抗肿瘤作用被引量：12
- 2010年
- 以中国林蛙卵为原料,采用丙酮分级沉淀、SP-Trisacryl阳离子交换色谱、SephadexG-75凝胶过滤色谱、C8反相色谱等纯化方法,得到一种具有核糖核酸酶活性的蛋白质,采用SDS-PAGE电泳对该蛋白质进行了相对分子质量和纯度测定。结果表明:纯化的中国林蛙卵核糖核酸酶为相对分子质量13kDa的单一成分。该酶最适反应温度为65℃,最适反应pH为5.5～6.0,米氏常数为4.11μmol/L,最大反应速率为2.82pmol/s。在体外细胞毒性实验中,对人三种肿瘤细胞HeLa、K562、MCF-7具有抑制作用,其IC50分别为0.6μmol/L、0.8μmol/L和4μmol/L,而对于正常人成纤维细胞在酶浓度达到8μmol/L时仍未见明显细胞毒性。这种从中国林蛙卵中分离纯化出的具有选择性细胞毒性的小分子量核糖核酸酶,为肿瘤的治疗提供了新的候选蛋白分子。
- 陶凤云赵伟林强马润宇
- 关键词：中国林蛙核糖核酸酶分离纯化抗肿瘤
- 中国林蛙Onconase样核糖核酸酶的基因克隆和表达被引量：1
- 2011年
- Onconase是从美洲豹蛙卵中提取的一种核糖核酸酶,由于其抗肿瘤活性而具有潜在的临床应用价值。以中国林蛙基因组为模板,克隆了一个新的RNase基因,并由此推导出了成熟林蛙RNase的氨基酸顺序。该酶是由103个氨基酸残基组成的,它保留了RNase A家族成员酶催化活性必须的组氨酸和赖氨酸残基,以及CKXXNTF的序列特征,与Onconase具有73%的氨基酸顺序的相似性。林蛙酶比Onconase少一个氨基酸,成为迄今为止发现的RNaseA家族中的最小成员;并且,林蛙酶拥有的精氨酸和酪氨酸残基比Onconase多3个。此外,在利用原核表达系统对林蛙RNase基因进行表达的过程中,表达产物对宿主显示出一定的细胞毒性。
- 徐宏博王天航董安康陶凤云赵伟
- 关键词：中国林蛙核糖核酸酶基因克隆和表达
- 人类核糖核酸酶A家族被引量：1
- 2012年
- 核糖核酸酶A(RNase A)是脊椎动物所特有的蛋白质家族。除了水解RNA以外,它们还参与细胞成熟、细胞凋亡、血管生成以及宿主防御等过程,在疾病的诊断和治疗方面表现出重要的应用价值。随着人类基因组计划的完成,人们已经发现了13个RNase A基因。本文综述了人类RNase A的酶活性和结构特点,特别论述了其特殊的生物学活性,以及酶活性与特殊生物学活性之间的关系,为进一步的研究和应用提供信息。
- 徐宏博李丹赵伟
- 关键词：酶活性杀菌活性
- 核糖核酸酶A超家族成员杀菌作用研究进展被引量：4
- 2009年
- 核糖核酸酶A超家族是一类以牛胰腺核糖核酸酶A为代表的、从不同脊椎动物中分离到的同源蛋白组成,其中几个成员具有选择性抗微生物活性,不同成员杀菌作用的机制不同。本文对近年发现的核糖核酸酶A超家族成员的杀菌谱及其作用机制的研究成果进行了总结,并分析了当前存在的问题和解决的思路。核糖核酸酶独特的杀菌作用机制在新药开发中具有引人瞩目的前景,基于其独特的分子骨架设计合成新一类抗生素,可能在微生物感染的临床治疗中发挥作用。
- 陶凤云赵伟马润宇
- 关键词：核糖核酸酶A抗生素
- 中国林蛙凝集素样核糖核酸酶A的抑菌作用
- 2013年
- 目的:从中国林蛙基因组中克隆核糖核酸酶的基因并分析该基因的特殊生物学功能。方法:采用PCR方法克隆基因,利用原核系统进行基因表达,检测重组蛋白的抑制细菌生长的活性。结果:DNA顺序分析显示:克隆的基因编码了111个氨基酸序列,其中拥有核糖核酸酶A家族的保守序列,与日本稻田蛙的一种凝集素样核糖核酸酶的氨基酸相似性达到82%,与中国林蛙Onconase样核糖核酸酶氨基酸序列仅有40%相似性。重组蛋白对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有生长抑制作用。结论:中国林蛙凝集素样核糖核酸酶有抑制细菌生长的作用。
- 李丹张潮陶凤云赵伟
- 关键词：中国林蛙核糖核酸酶A抑菌作用
- 中华眼镜蛇毒核糖核酸酶的分离纯化及其特殊生物学活性被引量：2
- 2010年
- 目的从中华眼镜蛇毒中分离纯化核糖核酸酶,并研究其生物学活性。方法以中华眼镜蛇毒为原料,采用SP-Trisacryl阳离子交换色谱、Sephadex G-75凝胶色谱、C8反相色谱等纯化方法,分离纯化具有核糖核酸酶活性的蛋白质,表征其酶学性质,检测其抑菌性、抗肿瘤细胞作用及抗氧化作用。结果 SDS-PAGE电泳显示纯化的中华眼镜蛇毒核糖核酸酶(Na-RNase)为相对分子质量为13 000的单一成分。该酶最适反应温度为40℃,最适pH值为6.5,米氏常数为3.67μmol/L,最大反应速率为3.52 pmol/s。在体外抑菌实验中,在8μmol/L的浓度下对大肠艾希菌和金黄葡萄球菌均未显示出显著抑制作用;在体外细胞毒性实验中,对于Hela肿瘤细胞和正常的人成纤维细胞在8μmol/L的浓度下无明显抑制作用;在抗氧化实验中,浓度达到71.5μmol/mL时,对小鼠肝微粒体脂质过氧化反应的抑制率为41.30%。结论中华眼镜蛇毒中的核糖核酸酶具有抗氧化作用,可能作为氧化还原的调节剂,在有关的疾病治疗方面具有应用的潜能。
- 陶凤云赵伟林强马润宇
- 关键词：中华眼镜蛇核糖核酸酶分离纯化抑菌作用细胞毒性
- 松鼠胰腺型核糖核酸酶A基因的克隆与表达
- 2011年
- 核糖核酸酶A(ribonucleases A,RNases A)构成一个大家族,其成员表现出不同程度的水解RNA的酶活性。一些成员还表现出特殊的生物学活性。旨在克隆松鼠核糖核酸酶A的基因,利用原核细胞系统表达重组蛋白,并进行初步的酶学性质的研究。结果表明,所克隆的基因属于核糖核酸酶A家族,保留了核糖核酸酶A家族酶活性必要的保守序列。进化分析表明,该基因属于松鼠胰腺型核糖核酸酶基因,与其它啮齿类动物胰腺型酶一样,重组的核糖核酸酶具有酶活性,为进一步进行啮齿类动物核糖核酸酶的宿主防卫功能研究打下了基础。
- 董安康徐宏博陶凤云王旭颖赵伟
- 关键词：松鼠基因克隆和表达
- 细胞毒性RNase及其抗肿瘤活性被引量：4
- 2010年
- 核糖核酸酶(ribonuclease,RNase)是一类核酸水解酶,它们广泛存在于动植物中,除了具有水解RNA的活性外,有的还有一定的细胞毒性。根据结构的相似性,这些RNase属于RNase A超家族(RNase A superfamily)。RNaseA超家族包含了以牛胰核糖核酸酶为原型的不同来源的脊椎动物核糖核酸酶。细胞毒性RNase显示出抑制肿瘤细胞生长的活性,因而有望应用于肿瘤治疗中。本文对RNase A超家族中的几个成员棗核糖核酸酶A(ribonuclease A,RNaseA)、豹蛙抗癌酶(onconase,ONC)、牛蛙核糖核酸酶(Rana catesbeiana ribonuclease,RC-RNase)、牛精液核糖核酸酶(bovine seminal ribonuclease,BS-RNase)和amphinase(Amph)的结构及抗肿瘤活性进行了综述。
- 董安康王旭颖赵伟
- 关键词：核糖核酸酶细胞毒性抗肿瘤
- 中国林蛙细胞毒性核糖核酸酶的原核表达被引量：1
- 2011年
- 目的:利用大肠杆菌以非包涵体的形式表达中国两栖动物林蛙的细胞毒性核糖核酸酶,探索原核表达系统表达细胞毒性核糖核酸酶的条件。方法:利用中国林蛙核糖核酸酶基因及表达质粒pFlag-CTS构建重组表达质粒,转导BL21后用IPTG诱导表达,观察不同诱导温度下细菌的生长情况。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹方法进行重组蛋白的检测。结果:通过观察不同诱导温度下细菌的生长情况,发现利用较低温度可以降低宿主细胞对表达产物细胞毒性的敏感性,成功地得到了这种目的基因的表达产物。结论:低温(20℃)可以有效表达目的蛋白。
- 范美音董安康吴琼陶凤云赵伟
- 关键词：中国林蛙核糖核酸酶细胞毒性原核表达
