国家自然科学基金(30871851)
- 作品数：14 被引量：79H指数：6
- 相关作者：祁克宗涂健白灏汪雪雁彭开松更多>>
- 相关机构：安徽农业大学中国农业科学院上海兽医研究所安徽省动物疫病预防与控制中心更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 鸡β防御素Gallinacin-8基因乳酸菌表达载体的构建
- 鸡β-防御素gal-8是一种具有广谱抗微生物活性的抗菌肽。本研究从已构建的重组质粒pGEM-T Easygal-8-8中克隆出gal-8成熟肽cDNA,将该cDNA插入原核表达载体pNZ8048,构建重组质粒pNZ804...
- 杨涛钟瑾涂健彭开松祁克宗
- 关键词：原核表达乳酸乳球菌
- 文献传递
- 影响禽致病性大肠杆菌信号分子AI-2产生的因素分析被引量：8
- 2013年
- 【目的】探讨禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)在不同生长时期和不同培养条件下,信号分子AI-2(Autoinducer-2,AI-2)的合成与luxS和pfs的转录水平之间的关系。【方法】利用哈维弧菌BB170(vibrio harveyi BB170)检测不同生长时期和不同培养条件下APEC的AI-2活性。同时利用Real-time PCR检测APEC不同生长时期和不同培养条件下luxS和pfs的转录水平。【结果】APEC在不同生长时期的AI-2活性与luxS的转录水平保持一致。培养基中加入葡萄糖,麦芽糖和NaCl后,AI-2活性和luxS转录水平都上调,加入蔗糖后则都下调,两者保持一致性。AI-2活性与pfs的转录水平则并不一致。【结论】APEC的AI-2产生水平与luxS的转录水平有高度的相关性,而与pfs的转录水平没有显著相关性;葡萄糖、麦芽糖和NaCl,促进AI-2的合成。
- 白灏韩先干刘蕾祁克宗刘海文丁铲于圣青
- 关键词：禽致病性大肠杆菌LUXSPFSREAL-TIMEPCR
- 1株禽源致病性大肠杆菌分离鉴定与相关特性的初步研究被引量：1
- 2010年
- 无菌采取病鸭肝脏,进行病原菌的分离、鉴定、生化试验、毒力基因检测和动物毒力试验。结果:致病菌为大肠杆菌,至少携带有5种毒力基因,并且该菌对小白鼠和鸡有较强的致死性,属于大肠杆菌强毒株,与基因检测的结果相吻合。
- 刘华占松鹤朱良强祁克宗彭开松
- 关键词：生化试验毒力试验致病菌小白鼠强毒株
- 禽致病性大肠埃希菌强毒力岛(HPI)全岛缺失株的构建被引量：5
- 2011年
- 目的构建大肠埃希菌强毒力岛(HPI)全岛缺失突变株,为进一步评价大肠埃希菌HPI的功能打下基础。方法根据已知大肠埃希菌HPI基因序列设计PCR敲除引物,引物5′端有50 bp的拟敲除基因的同源臂,3′端为扩增引物,以pKD3为模板,扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性基因,利用pKD46的λ重组系统替换E.coli ZL基因组上的毒力岛全岛基因,再利用表达Flp重组酶的质粒pCP20,可将FRT位点之间的氯霉素抗性基因删除,用鉴定引物进行鉴定并测序。结果构建的全岛缺失株与预期一致。结论成功构建了禽致病性大肠埃希菌强毒力岛(HPI)全岛缺失突变株。
- 张海峰彭开松涂健祁克宗
- 禽致病性大肠杆菌江苏、安徽分离株的生物学特性分析被引量：24
- 2013年
- 【目的】研究禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)江苏、安徽分离株的优势血清型,并分析其生物学特性。【方法】对分离自病禽的细菌进行鉴定,采用玻片凝集法测定禽致病性大肠杆菌的血清型,PCR方法检测14种毒力基因的分布,采用美国临床和实验室标准化研究所的方法进行药物敏感性检测,改良结晶紫半定量法检测分离细菌的生物被膜形成能力。【结果】共分离到禽致病性大肠杆菌56株,血清型检测结果表明,O78血清型占64.29%,为主要血清型。毒力基因检测显示,fimC、pfs、ompA和luxS的阳性率超过90%。药物敏感性检测显示,58.93%的菌株对8种以上的药物耐受。生物被膜检测显示,有16株细菌生物被膜形成能力为中等以上,其中68.75%的菌株耐8种以上的药物。【结论】O78为主要流行的血清型。fimC、pfs、ompA和luxS基因为APEC保守基因。多重耐药性仍很普遍,细菌生物被膜与耐药性具有相关性。
- 白灏冀辉韩先干龚建森董洪亮丁铲祁克宗于圣青
- 关键词：禽致病性大肠杆菌血清型毒力基因生物被膜
- 一株孔雀源大肠杆菌分离鉴定与致病特性初步研究被引量：3
- 2010年
- 无菌采取病死孔雀肝脏,进行病原菌的分离、鉴定、生化试验、毒力基因检测、动物毒力试验。结果表明:致病菌为大肠杆菌,至少携带有papC、iucD、tsh、irp2、iss5种毒力基因,具有高致病性,并且该菌对小白鼠和鸡有较强的致死性。
- 刘华祁克宗朱良强詹松鹤彭开松
- 关键词：大肠杆菌毒力基因
- 利用Red重组系统敲除APEC毒力岛irp2基因被引量：4
- 2012年
- 应用质粒pKD46介导的Red同源重组系统,以质粒pKD3为模板,设计irp2基因序列敲除引物,引物5′端有51 bp的拟敲除基因的同源臂,3′端为扩增引物,扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性基因,通过第1次同源重组将拟敲除的irp2基因替换为氯霉素抗性基因,再通过重组酶质粒pCP20在FRT位点发生第2次同源重组,消除抗性基因。结果表明,利用该重组系统成功敲除了禽致病性大肠杆菌HPI毒力岛irp2基因。为深入研究irp2基因在禽致病性大肠杆菌致病过程中所发挥的作用打下基础。
- 李叶芳涂健邵颖刘红梅祁克宗
- 关键词：禽致病性大肠杆菌
- 动物源性大肠杆菌ESBLs类耐药基因与HPI基因的双重PCR检测及相关性分析被引量：6
- 2013年
- 为研究大肠杆菌ESBLs类耐药基因和HPI基因在环境中的污染状况及相关性,采用双重PCR对大肠杆菌中HPI基因irp1、irp2、fyuA和产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因TEM、SHV进行了检测分析,选择irp2缺失株对两类基因的相关性进行了分析。37株大肠杆菌的检测结果显示,TEM、SHV耐药基因的阳性率分别为94.5%、56.8%;irp1+TEM、irp1+SHV、irp2+TEM、irp2+SHV、fyuA+TEM、fyuA+SHV基因的阳性率分别为13.5%、13.5%、21.6%、21.6%、16.2%、16.2%。从大肠杆菌中扩增出118、132、799、414、948bp的特异性目的条带,而从甲型副伤寒沙门氏菌、绿脓假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌中则不能扩增出上述特异性条带。灵敏度试验表明,该反应体系的检测灵敏度为1.5×103 CFU/mL。irp2缺失株试验表明,irp2中仍能检测出TEM、SHV基因。上述结果表明,采用双重PCR能特异地从大肠杆菌中检测出β-内酰胺类耐药基因和HPI基因,且两类基因间无明显相关性。
- 陈伟张永正汪雪雁薛秀恒涂健祁克宗
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶双重PCR
- 禽源大肠杆菌耶尔森氏菌强毒力岛核心基因的检测及其irp2和int基因同源性被引量：7
- 2013年
- 【目的】为了提高禽源大肠杆菌中耶尔森氏菌强毒力岛(HPI)的检测效率,了解高分子量铁调节蛋白2基因(irp2)和整合酶基因(int)在不同株禽源HPI+大肠杆菌间的同源性,进一步揭示禽源大肠杆菌HPI的转移规律。【方法】利用L16(44)正交试验设计,建立针对HPI核心基因irp2和fyuA的双重PCR,运用双重PCR方法检测禽源大肠杆菌临床分离株,并对检出的7株HPI阳性(HPI+)大肠杆菌进行irp2和int基因测序及同源性分析,同时结合这7株大肠杆菌的ERIC-PCR分析结果,对比分析int基因的分布特点。【结果】结果显示,新建立的双重PCR能特异性扩增出HPI核心基因;ERIC-PCR分析显示,HPI+大肠杆菌间差异均大于5%;HPI+大肠杆菌irp2基因高度保守(同源性大于99%),而int基因虽然都位于asn-tRNA位点,但基因序列在部分菌株间存在较大差异。【结论】建立了一种可以用于HPI的流行病学调查和实验室诊断的双重PCR方法,并推测区域外同源重组可能是HPI基因在大肠杆菌间水平转移的主要方式。
- 冀辉邵长胜涂健黄博言邵颖周秀红汪雪雁祁克宗
- 关键词：禽源大肠杆菌整合酶基因
- 禽致病性大肠杆菌强毒力岛摄铁功能与致病性关系的研究被引量：14
- 2012年
- 采用PCR法检测强毒力岛主要结构基因irp1、irp2、fyuA在禽致病性大肠杆菌中的分布;铬苯胺醇法检测铁载体的合成;SDS-PAGE法检测耶尔森菌摄铁蛋白HMWP1和HMWP2的表达,以半数致死量试验测定禽致病性大肠杆菌致病性与强毒力岛摄铁功能的关系。结果表明,7株禽致病性大肠杆菌强毒力岛irp1、irp2和fyuA基因的检出率为100%;铬苯胺醇平板上都能产生橙色透明晕圈;缺铁条件下,能够表达与耶尔森菌相同的摄铁蛋白HMWP1和HMWP2且半数致死量试验验证禽致病性大肠杆菌的毒力与强毒力岛摄铁功能呈正相关。证实禽致病性大肠杆菌中强毒力岛的摄铁功能与其致病性有密切的联系。
- 李叶芳白灏彭开松涂健祁克宗
- 关键词：禽致病性大肠杆菌
