国家高技术研究发展计划(2009AA10Z104)
- 作品数：10 被引量：64H指数：5
- 相关作者：张映陈钰辉刘富中连勇雷建军更多>>
- 相关机构：中国农业科学院蔬菜花卉研究所华南农业大学中国农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 农杆菌介导PSAG12-IPT基因转化辣椒的研究被引量：4
- 2015年
- 异戊烯基转移酶(Isopentenyl-Transferasas,IPT),也称作细胞分裂素合成酶,是植物中细胞分裂素合成的限速酶。IPT在转基因植株中超表达后,会使叶片中的细胞分裂素含量增加,从而延缓叶片衰老。但过高对植物的生长和育性都是有害的。如果将衰老特异性启动子(PSAG)与IPT基因融合,在它的驱动下表达,只有在叶片衰老时才表达合成分裂素,既能延缓衰老又不影响植物的生长发育。以p CAMBIA1301-PMI表达载体为基础载体,用衰老特异性启动子驱动目的基因IPT,用辣椒Flamingobill外植体作受体,采用农杆菌介导的方法转化辣椒,并利用甘露糖筛选体系对辣椒转化体进行筛选,对转基因植株进行分子生物学检测和抗衰老检测。结果表明,共获得82株抗性植株,PCR检测的阳性率约为50%。而在对T1代的PCR检测表明该基因能稳定遗传给下一代。这些经转化的植株具有叶片衰老延缓及植株生命周期延长等现象,花的衰老也有所延缓。T1的株高和侧芽萌发与对照相比无明显差异。
- 李秋庆陈国菊曹必好陈长明雷建军
- 关键词：辣椒IPT基因甘露糖
- Cry2Aa2和PamPAP双价表达载体的构建及其对辣椒的遗传转化被引量：2
- 2012年
- 为了获得既抗虫又抗病毒病,又对人体和环境安全的转基因辣椒(Capsicum annuum L.)材料,将启动子CaMV35S、终止子Nos-ter及缺失无毒型商陆抗病毒蛋白基因PamPAP一起插入到植物表达载体pCAMBIA1301-Cry2Aa2-PMI的多克隆位点上,构建双价表达载体,采用农杆菌介导法将其转入辣椒中,并用PMI/甘露糖筛选体系对转化植株筛选。经PCR扩增和Southern杂交检测,结果表明Cry2Aa2和PamPAP已经整合到辣椒基因组中。进一步经RT-PCR分析,证实Cry2Aa2和PamPAP在T0代转基因辣椒植株中共表达。经抗虫性、抗病毒病表型鉴定:T0代转基因辣椒植株对黄瓜花叶病毒(CMV)和斜纹夜蛾幼虫的抗性均显著高于非转基因植株。
- 高玉尧陈长明陈国菊曹必好雷建军
- 关键词：辣椒抗病毒
- 茄子单性结实研究进展被引量：15
- 2012年
- 茄子单性结实性能克服反季节栽培中的低温障碍,提高产量,降低栽培成本,改善果实品质。本文从特性鉴定、生理基础、遗传机制、生物学研究等几个方面对茄子单性结实的研究进展进行了综述,并提出了存在的问题和今后的研究方向。
- 李香景刘富中张映李艳玮陈钰辉连勇
- 关键词：茄子单性结实激素基因
- 甜瓜高效遗传转化体系的研究
- 目前转基因技术手段已经成功运用于模式植物,在甜瓜上虽然也有报道,但转化体系仍不成熟,转化效率低。本研究中主要利用含GUS报告基因的植物表达载体进行甜瓜遗传转化技术体系的探讨,针对基本培养基、子叶切割方式、侵染时间、共培养...
- 刘丽锋张俊红古勤生李汉霞叶志彪
- 关键词：甜瓜GUS染色
- 茄子单性结实候选基因的表达分析被引量：5
- 2011年
- 对茄子单性结实抑制差减文库中的1 248个差异表达unigenes在GeneBank数据库中进行BLAST比对分析,结果表明1 109个unigenes具有同源序列,其编码的蛋白包括甲硫氨酸亚砜还原酶、MADS-box转录因子、组蛋白和隐花色素等,涉及到果实发育的多个方面,139个unigenes没有同源序列,可能为新基因。利用荧光定量PCR研究10个差异表达unigenes在茄子单性结实果实和非单性结实果实发育过程中的表达模式,分析表明,在低温条件下,unigenes Z569和Z707在单性结实果实发育中特异表达,可能与单性结实果实的形成有关,可作为研究单性结实的候选基因。
- 张映刘富中李香景陈钰辉张振贤方智远连勇
- 关键词：茄子单性结实荧光定量PCR
- 茄子温敏单性结实抑制差减文库的构建与分析被引量：12
- 2011年
- 【目的】构建茄子单性结实差减文库,分离获得茄子单性结实相关基因,研究茄子单性结实形成的分子机制。【方法】以茄子单性结实品系D-10低温条件下无籽的子房和果实,以及适温条件下有籽的子房和果实为材料,采用抑制差减杂交(SSH)技术构建正向和反向差减文库。对阳性克隆测序、BLAST比对分析、GO(gene ontology)功能注释及分类和荧光定量PCR分析。【结果】正反向文库共获得了2 347个阳性克隆;测序、序列拼接后,共获得1 248个高质量的unigenes;将其与非冗余数据库BLAST比对后,有1 109个unigenes找到同源序列,139个unigenes无同源序列为新基因。1 248个unigenes中527个在GO数据库中有功能注释,其中细胞组分、分子功能和生物过程的unigenes分别为206、445和361条,分析表明,茄子单性结实果实的差异主要发生在细胞内部,单性结实性状的表达可能受到一些因子和激酶的调控。【结论】成功构建了茄子单性结实不同时期果实的抑制差减文库,获得3个可能与茄子单性结实相关的unigenes,包括MADS-box基因、雌蕊伸展相关蛋白和果实膨大相关基因。
- 张映陈钰辉张振贤方智远连勇刘富中
- 关键词：茄子抑制差减杂交EST
- 双价表达载体转化辣椒的体系优化
- 2014年
- 将含有PamPAP和Cry2Aa2的双价表达载体通过农杆菌介导法转化辣椒,并对其遗传转化体系进行优化,从而建立辣椒Flamingo-bill农杆菌介导的高效遗传转化体系.结果表明：Flamingo-bill外植体的不定芽容易伸长,不定芽分化率明显高于带柄子叶;延迟筛选4～6 d可显著提高Flamingo-bill外植体不定芽的分化率和抗性率;Flamingo-bill外植体最适筛选浓度为甘露糖18g/L和蔗糖12 g/L;抗性苗生根最佳培养基为MS＋0.2 mg/L NAA＋0.1mg/L IAA.经过优化的甘露糖体系筛选共获得28株To代转基因植株,其中阳性率为21.4％,转化率为2.5％.
- 高玉尧许文天黄皓陈长明曹必好陈国菊刘实忠雷建军
- 关键词：辣椒PMI
- 茄子单性结实抑制差减文库的构建及相关基因的克隆
- 茄子单性结实性能克服低温引起的落花、落果障碍,增强坐果能力,显著提高产量,同时还可改进果实品质,降低栽培成本。本研究旨在构建茄子单性结实果实差异表达基因的抑制性差减cDNA文库,分离获得茄子单性结实相关基因,研究茄子单性...
- 刘富中张映周亚君陈钰辉连勇
- 关键词：茄子单性结实基因分离
- 文献传递
- 茄子单性结实特性及相关基因的分离
- 茄子单性结实性能克服低温引起的落花落果障碍,还可改进果实质量。本研究旨在探明茄子单性结实基因在自然低温下的表达效应,分离获得与茄子单性结实基因相关的cDNA片段,为研究茄子单性结实基因的表达和调控机制奠定基础。以茄子单性...
- 刘富中周亚君张映陈钰辉连勇
- 关键词：茄子单性结实基因分离
- 文献传递
- 利用pmi作为筛选基因对辣椒进行Bt基因转化的研究被引量：3
- 2013年
- 根据Cry2Aa2的保守基因序列设计引物,从而扩增出完整的Cry2Aa2序列,连接到含有磷酸甘露糖异构酶基因(pmi)的表达载体pCAMBIA1301-PMI上,采用农杆菌介导的方法转化辣椒,利用甘露糖筛选体系对辣椒转化体进行筛选,对转基因植株进行分子生物学检测和抗虫试验,72h后统计抗虫情况。结果表明:获得了含有Cry2Aa2转基因植株;食用转Bt基因辣椒叶片和果实的斜纹夜蛾幼虫的校正死亡率均高于阴性对照,且大多表现出僵化和厌食的状态,对转基因的辣椒伤害较小,说明Bt基因成功导入辣椒中。
- 黄皓雷建军曹必好陈长明陈清华陈国菊
- 关键词：辣椒甘露糖
