浙江省医药卫生科学研究基金(2011ZDA005)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 重组表达糖蛋白GPIIIa片段偶联荧光微球分析人血小板抗原-1系统同种抗体被引量：2
- 2015年
- 目的:应用偶联血小板GPIIIa重组表达片段的Luminex xMAP荧光微球,检测血小板抗HPA-1a和-1b抗体。方法:以倍比稀释成12个浓度(原液~1/2048)的抗HPA-1a WHO国际标准品,比较MAIPA和Luminex xMAP技术检测抗HPA-1a的灵敏度。以8份抗HPA-1a/b阴、阳性对照,36份WHO血小板抗体质控盲样,评估流式荧光微球技术检测抗HPA-1a和-1b的特异性。结果:MAIPA检测抗HPA-1a的灵敏度为滴度1/64(抗体浓度1.56 IU/ml),流式荧光微球检测的灵敏度远高于滴度1/2048(抗体浓度0.049 IU/ml)。微球分析法能特异性鉴别抗HPA-1a和-1b阴、阳性对照。36份盲样中,有1份样本,在高浓度对偶抗体的影响下,产生抗HPA-1b假阳性结果。其余样本的微球分析结果与预期结果相符,能准确检出抗HPA-1a和-1b抗体,而且与HLA和ABO抗体以及其它的血小板抗体(包括抗HPA-3b、-5b、-15b、-GPIb/IX和非HPA-1特异性的抗-GPIIb/IIIa)未发生交叉反应。结论:基于重组偶联血小板GPIIIa的流式荧光微球技术可灵敏、特异性检测血小板HPA-1系统抗体,适合于临床免疫性血小板减少症患者的抗体特异性鉴定。
- 许先国刘瑛陈舒洪小珍陶苏丹马开荣蓝小飞何吉朱发明吕杭军
- 关键词：人类血小板抗原同种抗体
- 人类白细胞抗原HLA-C＊04：01：01G组的区分鉴别被引量：1
- 2014年
- 本研究旨在区分人类白细胞抗原(HLA)-C*04:01:01G组内等位基因,并分析其与HLA-A、-B的连锁情况。通过收集HLA-C*04:01:01G组标本,采用多聚酶链反应序列分型法(PCR-SBT)分析HLA-C座位第2-7外显子序列,采用PCR-SBT方法对HLA-A、-B、-DRB1和-DQB1基因进行分型。结果表明:在189例HLA-C*04:01:01G组标本中,178例(94.2%)为HLA-C*04:01,11例(5.8%)为C*04:82;共检出HLA-C*04:01:01和C*04:82相关单体型72条,频率大于0.0050的单体型为26条;连锁分析显示HLA-C*04:01:01与A*02:03,A*02:07,A*11:01,A*33:03,B*13:01,B*15:01,B*15:05,B*15:27,B*40:01,B*54:01关联,而HLA-C*04:82与B*40:01关联。结论:HLA-C*04:01:01G组中存在HLA-C*04:01:01和HLA-C*04:82,在常规分型指定中应加以鉴别。
- 王炜陈男英章伟何俊俊韩浙东秦斐董丽娜朱发明吕杭军
- 关键词：HLA
- 用体外表达的血小板膜蛋白GPⅢa偶联Luminex微球检测HPA-1a抗体被引量：2
- 2017年
- 目的拟利用体外克隆表达的GPⅢa蛋白作为HPA—1a抗原与LuminexxMAP微球相连，建立和评估用Luminex微球技术检测血清中抗HPA—1a的效果。方法扩增并克隆GPⅢa蛋白的编码基因ITGB3至真核表达载体，转染中国仓鼠卵巢癌细胞株。利用G418筛选稳定表达细胞株，体外获取并鉴定相应的特异性膜糖蛋白GPⅢa。将重组蛋白通过表面游离氨基和Luminex xMAP微球表面激活的羧基相偶联，再利用偶联后的微球与待测血清反应。利用PE-抗人IgG进行显色，在Luminex-100仪上读取数据并判断结果。结果ITGB3基因测序为HPA-1aa，将克隆后的GPⅢa重组蛋白偶联Luminex xMAP微球，Luminex微球法检测HPA-1a抗体的灵敏度为滴度1／32（抗体浓度3．125U／mL）。微球技术能特异性鉴别出待测样本的HPA—1a抗体，与MAIPA结果一致，而且与HLA抗体、ABO抗体以及其他HPA血小板系统抗体（HPA-3a、HPA_5b）均不发生交叉反应，说明建用立的Luminex微球技术来检测血小板抗体是可行的。结论成功获取了重组表达的血小板膜蛋白GPⅢ3，并初步建立了Luminex微球检测HPA-1a抗体方法。
- 陶苏丹刘瑛和艳敏应燕玲何吉朱发明
