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大鼠lipocalin 11蛋白非保守半胱氨酸双点突变体样品制备及理化性质表征被引量：1: 2011年; Lipocalin 11蛋白是新发现的一个lipocalin分泌型蛋白家族成员,与男性生殖密切相关。大鼠lipocalin 11(rLcn11)蛋白中4个半胱氨酸往往不能正确配对,为重组蛋白样品的制备带来困难。该研究通过序列比对和同源模建的方法获得rLcn11蛋白非保守半胱氨酸的位点,构建了rLcn11蛋白野生型与C59A/C156A突变体的表达系统和纯化方法。通过分子筛和圆二色谱分析rLcn11蛋白的聚集形态和结构特征,并用荧光滴定的方法研究了rLcn11蛋白与荧光探针ANS的结合能力。结果表明:(1)rLcn11蛋白非保守半胱氨酸残基的突变有利于减少蛋白的错误折叠和聚集,提高重组蛋白的产量;(2)rLcn11 C59A/C156A突变体的空间结构良好并能结合疏水性配体;(3)rLcn11蛋白Cys59、Cys156双点突变不显著地改变rLcn11蛋白的空间结构及其与配体的结合能力。该工作为rLcn11蛋白的空间结构解析和生理功能的研究奠定了基础。; 顾轶娜林东海; 关键词：配体结合

人β-防御素DEFB113的重组表达及活性鉴定: 2012年; DEFB113为人β-防御素家族新成员,其生物学功能尚不清楚。为了探索一种可以较低成本和较高产量表达活性DEFB113多肽的方法,将编码DEFB113成熟肽的序列克隆到载体pTWIN1上,并转化至E.coliBL21(DE3)中进行表达。结果表明融合蛋白主要以可溶形式存在;重组载体中融合标签的几丁质结合域(CBD)和内含肽(intein)分别使亲和层析纯化和融合标签自剪切一步完成。最终得到DEFB113多肽的产率为6～7 mg/LLB。经活性鉴定,该重组DEFB113多肽对于S.aureus,E.coli K12D31和C.albicans均表现出较强的抑制作用;另外DEFB113无明显的溶血活性,是一种较理想的多肽抗生素。该研究为进一步研究DEFB113的生理功能以及其它人β-防御素结构与功能奠定了基础。; 董靖于合国刁华郭晨云林东海; 关键词：原核表达抑菌活性溶血活性

基于NMR自旋弛豫技术的蛋白质动力学研究被引量：5: 2012年; 蛋白质的三维结构在很多情况下不能很好地解释其在生理过程中的作用机制.动力学研究能够获悉蛋白质在不同时间尺度下的内运动信息,建立起动态结构和生物功能的联系.该文综述了通过NMR自旋弛豫技术研究蛋白质动力学的原理和方法:ps～ns的快运动分析主要采用约化谱密度函数映射和Modelfree方法;μs～ms的慢运动涉及化学/构象交换过程,常借助CPMG和R1ρ弛豫色散手段.基于NMR的蛋白质动力学研究,将蛋白质科学从三维空间结构推进到四维时空结构的新层面.; 文祎林东海; 关键词：蛋白质动力学

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上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划(09XD1405100)