国家自然科学基金(31070140)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
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- RHDV VLPs对口蹄疫病毒B细胞表位的展示效果被引量：3
- 2015年
- 为研究兔出血症病毒(RHDV)病毒样颗粒(VLPs)携带外源表位的能力及其免疫原性,以兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60为载体,分别在RHDV VP60蛋白质的C端、N端和306位插入FMDV VP1双串联B细胞表位[GS-(200~213 aa)-GS-(141~160 aa)],得到嵌合蛋白质,分别命名为VP60-2FB、VP60-306FB和VP60-578FB。经IFA、SDS-PAGE和Western blot鉴定,嵌合VP60蛋白质在杆状病毒表达系统中均得到有效表达;通过电镜观察发现嵌合蛋白质可自聚成病毒样颗粒。将嵌合蛋白质免疫小鼠,检测产生的免疫应答情况,结果显示,嵌合蛋白质可以产生针对VP60特异的免疫应答,且在插入长度为42 aa外源氨基酸片段的情况下,嵌合蛋白质免疫的小鼠仍能诱导产生较高水平的针对外源表位的特异性应答。在进一步扩展了载体的容纳性后,序列的增加不影响VLPs的形成以及对外源表位的递呈效果,说明VP60-VLPs作为外源B细胞表位展示载体是可行性的。
- 胡波盛蓉宋艳华范志宇魏后军薛家宾王芳
- 关键词：兔出血症病毒病毒样颗粒口蹄疫病毒B细胞表位
- 兔出血症病毒衣壳蛋白N端携带双串联卵清蛋白T细胞表位嵌合体的构建与表达被引量：1
- 2014年
- 在兔出血症病毒(RHDV)主要结构蛋白VP60的N端插入双串联卵清蛋白(OVA)CD8+T细胞表位(OVA第257-264位氨基酸),研究外源片段对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体的可行性和对外源基因长度的耐受性。通过分子生物学方法将双串联OVA CD8+T细胞表位(257-264aa)插入至RHDV衣壳蛋白VP60基因序列的N端,得到重组VP60基因。利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白,并命名为DN。经RT-PCR、间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blot方法鉴定嵌合蛋白DN的表达,利用电镜观察嵌合蛋白病毒样颗粒的形成。结果表明嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达,且可形成与RHDV VLPs类似的病毒样颗粒。本研究为VP60作为载体系统,有效提呈外源片段的研究提供了重要依据,同时也为VLPs疫苗的研制奠定了基础。
- 张燕王芳胡波宋艳华范志宇魏后军姜平
- 关键词：兔出血症病毒VP60OVAT细胞表位
- RHDV VLPs对口蹄疫病毒B细胞表位展示效果的研究
- 为了研究兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60作为载体提呈外源表位的能力、分析外源表位的插入对其自身病毒样颗粒形成的影响以及评价VP60作为外源表位展示系统的可行性,本试验以前期构建的含VP60的重组质粒pFastBa...
- 胡波盛蓉宋艳华范志宇薛家宾魏后军王芳
- 关键词：兔出血症病毒病毒样颗粒口蹄疫病毒B细胞表位
- 文献传递
- 携带双串联卵清蛋白T细胞表位的嵌合兔出血症病毒衣壳蛋白自聚能力的研究被引量：1
- 2014年
- 以兔出血症病毒（ RHDV）衣壳蛋白VP60为载体,构建VP60携带双串联OVA T细胞表位（ Ovalbumin,卵清蛋白第257-264位氨基酸）的嵌合蛋白,研究外源基因对VP60蛋白表达及病毒样颗粒（ VLPs ）装配的影响,分析VP60作为载体对外源基因长度的耐受性。运用基因克隆和重组技术,通过2次SOE法（ Splicing by overlap extension,重叠延伸剪接术）,将双串联OVA T细胞表位（257-264位氨基酸）的基因序列取代VP60第302-309位氨基酸的基因序列,得到嵌合VP60基因。利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白,命名为DC。经 IFA、SDS-PAGE、Western Blot、RT-PCR方法鉴定嵌合蛋白的表达,并通过电镜观察嵌合蛋白自聚为病毒样颗粒的能力。嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达,且可自聚形成病毒样颗粒。携带双串联外源表位的嵌合VP60蛋白得到有效表达,并可形成VLPs。该研究为嵌合VP60 VLPs的形成、结构功能的研究奠定基础,同时扩展了VP60作为载体可携带的外源基因耐受性的研究资料。
- 张燕胡波宋艳华范志宇魏后军姜平王芳
- 关键词：兔出血症病毒VP60病毒样颗粒
- 携带口蹄疫病毒B细胞表位的兔出血症病毒样颗粒的表达及其免疫原性研究被引量：4
- 2015年
- 为了研究RHDV病毒样粒子作为载体提呈外源B细胞表位的能力，以兔出血症病毒（ RHDV ）衣壳蛋白VP60为载体，构建携带FMDV B细胞表位（ FMDV VP1 B细胞表位200～213 aa ）的VP60嵌合蛋白，研究外源基因对VP60蛋白的表达、病毒样颗粒（ VLPs）的装配及免疫原性的影响。分别在RHDV衣壳蛋白的C端、N端、306和307位氨基酸之间插入外源B细胞表位（ FMDV VP1 B细胞表位200～213 aa ），得到嵌合VP60基因。利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白，分别命名为VP60-2F、VP60-306F和VP60-578F。经IFA、SDS-PAGE和Western Blot方法鉴定嵌合蛋白的表达，通过电镜观察嵌合蛋白自聚为病毒样颗粒的能力，通过动物试验研究其免疫原性。结果显示，嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达，可自聚形成病毒样颗粒，免疫小鼠后可以产生针对VP60和B细胞表位特异的免疫应答。该研究为嵌合VP60 VLPs的形成及结构功能的研究奠定基础，同时为RHDV-VLPs作为外源B细胞表位展示载体的可行性提供依据。
- 盛蓉宋艳华胡波范志宇姜平薛家宾魏后军王芳
- 关键词：兔出血症病毒病毒样颗粒口蹄疫病毒B细胞表位
- 嵌合卵清蛋白-兔出血症VP60蛋白病毒样颗粒在杆状病毒表达系统中的表达及其鉴定被引量：1
- 2013年
- 利用卵清蛋白(OVA)第257～264位氨基酸替换兔出血症病毒的主要结构蛋白质VP60不同位置处相应数量的氨基酸,研究了氨基酸的替换对VP60蛋白表达及病毒样颗粒装配的影响。通过重叠延伸剪接术(SOE)法,OVA T-细胞表位(257～264位氨基酸)分别取代VP60 3个区域(502～510位氨基酸、411～417位氨基酸、302～309位氨基酸),得到3种重组嵌合VP60基因。利用杆状病毒表达系统,得到3种重组穿梭载体Bacmid,分别命名为Bacmid-V-1、Bacmid-V-2、Bacmid-V-3。将重组阳性质粒转染Sf9昆虫细胞,得到3种重组病毒rBac-v-1、rBac-v-2、rBac-v-3,3组重组病毒感染Sf9细胞后表达的3种蛋白质分别命名为Z1、Z2和Z3。经RT-PCR、IFA、SDS-PAGE、Western blot等方法鉴定后,利用电镜观察此3种重组蛋白质病毒样颗粒的形成情况。3种重组嵌合VP60蛋白在Sf9昆虫细胞中得到表达,3种重组嵌合蛋白质均可以形成与VP60蛋白类似的病毒样颗粒。
- 谭晖胡波陈萌萌范志宇魏后军宋艳华王芳
- 关键词：VP60蛋白卵清蛋白SF9细胞
