国家自然科学基金(81302531)
- 作品数：11 被引量：32H指数：4
- 相关作者：周国平黄慧青徐妍妍王艳艳田民杰更多>>
- 相关机构：南京医科大学江苏省人民医院连云港市东方医院更多>>
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- 抗HIV抗体免疫印迹法检测中阳性及不确定结果的带型分析被引量：7
- 2014年
- 目的分析抗HIV抗体免疫印迹(western blot,WB)试验检测中出现的阳性和不确定结果的带型特征,探讨WB带型与HIV感染的关系。方法收集近5年检测的189例抗HIV抗体阳性样本及14例抗HIV抗体不确定样本,分析WB确证试验的带型特征。结果在189例抗HIV抗体阳性的样本中,出现WB全带型(gp160,gp120,p66,p55,p51,gp41,p31,p24,p17均阳性)共80例(占42.33%)。其中gp160、gp120条带阳性率均为100%,p55条带阳性率最低,为40.74%。14例不确定样本中共有5种带型,gp160、p24(±)带型9例(占64.29%),p24带型2例(占14.29%),gp160,gp160、gp120(±)和p24、p17带型各1例。9例gp160、p24(±)带型中,2例复检转为阳性。结论抗HIV抗体阳性样本WB带型以全带型为主。抗HIV抗体不确定样本以gp160、p24(±)带型为主。出现此带型时应加强随访以免漏检。
- 吴志奇张翔刘雁雁倪芳宋为娟谢而付徐华国
- 关键词：抗HIV抗体免疫印迹试验
- HIV抗体阳性者合并HCV、HBV及TP感染分析被引量：5
- 2015年
- 目的分析145例人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体阳性者合并乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)和梅毒螺旋体(TP)的感染情况。方法回顾性分析145例HIV抗体阳性者的临床资料,比较HIV合并HCV、HBV、TP的感染率。结果 145例HIV抗体阳性者中,合并HCV感染6例(4.14%)、合并HBV感染9例(6.21%)、合并TP感染44例(30.34%);合并HCV/TP感染1例(0.69%)、合并HBV/TP感染4例(2.76%)。性接触感染HCV、HBV和TP分别为3、8、43例,吸毒感染HCV、HBV和TP均为1例。结论 HIV/TP合并感染率高于HIV/HCV和HIV/HBV合并感染率。性接触是HIV/TP合并感染的主要传播途径。
- 吴志奇张翔刘雁雁倪芳宋为娟谢而付徐华国
- 关键词：人类免疫缺陷病毒梅毒螺旋体
- 第三代HIV ELISA诊断试剂初筛试验假阳性原因分析被引量：4
- 2015年
- 目的探讨第三代HIV ELISA诊断试剂检测HIV抗体假阳性的原因。方法对HIV抗体初筛试验呈阳性而确证试验为阴性的90例患者(HIV抗体假阳性组)的临床资料进行分析,与90例健康体检者(健康对照组)的相关实验室检测指标进行比较,分析HIV抗体假阳性结果产生的原因。结果 HIV假阳性组白细胞计数(WBC)、乳酸脱氢酶(LDT)、α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)水平均显著高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显低于健康对照组,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论 WBC、LDH和HBDH的异常升高及HDL-C的明显降低与第三代HIV ELISA试剂初筛试验假阳性密切相关。
- 吴志奇黄慧青陈丹刘雁雁倪芳宋为娟谢而付徐华国
- 关键词：人类免疫缺陷病毒抗体筛查试验确证试验假阳性
- 人骨碱性磷酸酶基因启动子的克隆及高水平尿酸对其活性影响的实验研究
- 2020年
- 目的克隆人骨碱性磷酸酶(BALP)基因的启动子序列并构建荧光素酶报告基因重组质粒,初步探索高水平尿酸(UA)对BALP基因启动子活性是否产生影响。方法首先用聚合酶链反应扩增目的基因5′端侧翼上游627 bp(距转录起始位点-473 bp至154 bp)的片段,纯化扩增产物后行双酶切,后亚克隆至pGL3-basic质粒,构建BALP基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒。通过质粒转染到HEK293细胞内,最后借助双荧光素酶报告基因活性检测的方法,比较3种UA水平条件下(0.0、0.2和0.4 mmol/L)对基因启动子活性的影响。结果通过双酶切电泳、基因组测序比对分析,成功构建了BALP启动子荧光素酶报告基因重组质粒。随着UA水平的升高,HEK293细胞中启动子重组质粒的相对荧光素酶活性明显降低,差异有统计学差异(P<0.05)。结论高水平UA能够抑制BALP基因启动子的活性。
- 田民杰田民杰
- 关键词：骨碱性磷酸酶骨转移
- 小鼠STING基因启动子的克隆鉴定及功能初步分析被引量：2
- 2016年
- 目的 :克隆小鼠干扰素基因刺激因子(STING)基因启动子,并对其启动子活性和转录调控机制进行初步探讨。方法 :利用PCR方法扩增小鼠STING基因5′上游1 005 bp(-927^+77)的片段,亚克隆至p GL3-basic质粒,然后通过步移缺失构建不同缺失片段的重组质粒。双荧光素酶报告活性分析检测重组质粒在NIH3T3中的活性,并利用生物信息学方法预测转录因子结合位点。结果:经酶切、测序鉴定,成功构建了小鼠STING启动子荧光素酶报告基因重组质粒。与p GL3-basic质粒相比,STING启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加(P<0.05)。通过生物信息学软件预测小鼠STING启动子区域(-177^-48)可能含有GATA、IK2、MZF1、SP1/SP3、STAT等转录因子结合位点。结论:成功构建小鼠STING不同缺失片段的启动子荧光素酶报告基因重组质粒。通过活性比较,推测小鼠STING的核心启动子区位于-177^+77区域,其中可能含有多个潜在的转录因子结合序列。
- 徐妍妍王艳艳徐华国周国平
- 关键词：启动子转录调控
- XIAP基因3′非翻译区荧光素酶报告载体的构建及活性分析
- 2014年
- 目的构建重组X连锁凋亡抑制蛋白质(XIAP)基因3′非翻译区(3′UTR)荧光素酶报告载体,分析可能调控XIAP基因表达的微RNA(miRNA)。方法采用聚合酶链反应(PCR)从人cDNA中扩增XIAP-3′UTR序列,插入荧光素酶报告载体pGL3-Ctrl,获得重组载体pGL3-Ctrl/XIAP;采用Target Scan 6.2软件预测可能与XIAP-3′UTR结合的miRNA;将pGL3-Ctrl/XIAP重组质粒和miRNA共转染A549细胞,测定XIAP-3′UTR荧光素酶的活性。结果酶切及核酸测序证实,成功构建了XIAP-3′UTR序列的荧光素酶报告重组子;miRNA靶位点的预测显示,XIAP基因可能是miR-200b、miR-200c和miR-429的作用靶标;与miRNA mimic ctrl组比较,miR-200b、miR-200c和miR-429能明显降低pGL3-Ctrl/XIAP的荧光素酶活性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了XIAP-3′UTR荧光素酶报告载体,且miR-200b、miR-200c和miR-429可显著降低其荧光素酶的活性。
- 董宁葛高霞张炜明朱伟徐华国
- 关键词：微小RNAS
- HIV初筛实验不同策略的选择及其在临床应用中的评价被引量：6
- 2014年
- 目的回顾分析南京医科大学第一附属医院近5年332例初筛阳性标本使用的多种血清学方法的检测结果,为临床实验室推荐人类免疫缺陷病毒(HIV)初筛实验的优选方案。方法对2010年1月至2014年4月在南京医科大学第一附属医院就诊者的331 968份样本进行HIV抗体初筛,332例初筛阳性样本用第四代酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂复检,以蛋白印迹试验(WB)结果为金标准,比较分析第三代ELISA试剂、第四代ELISA试剂以及分别与胶体金组合检测的结果。结果 332例HIV抗体筛查阳性样本,经WB试验确证阳性189例。第三代ELISA试剂检测确证阳性符合率为57.27%,第四代ELISA试剂检测确证阳性符合率为89.15%,两者比较,差异有统计学意义(P=0.00)。第三代ELISA试剂检测漏检1例确证阳性标本和1例确证不确定标本;第四代ELISA试剂检测未发现漏检阳性标本,并检出1例窗口期标本。第四代ELISA与胶体金组合后,确证阳性符合率较第三代ELISA与胶体金组合提高了3.91%。结论第四代ELISA试剂用于HIV抗体筛查优于第三代ELISA试剂,尤其是与胶体金的组合,明显提高了HIV检测的确证阳性符合率,并有利于HIV感染窗口期的检测,推荐作为临床实验室HIV优选筛查方案。
- 吴志奇刘雁雁倪芳宋为娟谢而付徐华国
- 关键词：人类免疫缺陷病毒检测试剂
- 331 968例门诊及住院患者感染性指标检测的结果分析被引量：6
- 2015年
- 目的：分析近5年来南京医科大学第一附属医院就诊患者感染性指标的检测结果，为相关传染病的预防控制提供科学依据。方法对2010年1月至2014年4月在南京医科大学第一附属医院检测感染性指标的患者临床资料进行回顾性分析。结果人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体的阳性率在0．043％～0．061％，丙型肝炎病毒（HCV）抗体的阳性率在1．07％～1．41％，梅毒抗体的阳性率在2．01％～2．17％。乙肝表面抗原（HBsAg）阳性率由2010年的8．36％下降至2014年的7．81％。乙肝表面抗体（HBsAb）的阳性率由2010年的35．36％上升至2014年的50．96％。结论有效地切断传播途径可以防止感染性疾病的进一步传播。
- 吴志奇黄慧青刘雁雁倪芳宋为娟谢而付徐华国
- 关键词：人类免疫缺陷病毒
- 一种新的干扰素基因刺激因子剪接异构体STING(sv)的结构和功能
- 2015年
- 干扰素基因刺激因子（Stimulator of interferon genes,STING）是病毒感染后机体抗病毒固有免疫反应过程中的重要蛋白分子。为了寻找STING新的剪接异构体,我们抽提了人类胚胎肾（Human embryonic kidney,HEK）293细胞RNA,用全长STING的mRNA（NM-198282.82）序列设计引物,作cDNA末端快速放大（RACE）及RTPCR,生物信息学方法比较新序列,亚克隆STING野生型（wt）及STING剪接异构体（sv）至真核表达载体pEGFPC1和pcDNA 3.1中。质粒EGFP-STING（wt）和EGFP-STING（sv）转染HEK 293细胞,用抗EGFP抗体作Western blot分析;质粒pcDNA-STING（wt）和pcDNA-STING（sv）转染HEK 293细胞,作荧光素酶功能分析以检测新剪接异构体对病毒诱导的干扰素β启动子荧光素酶活性的影响。我们发现了STING 3′端新的剪接异构体,与野生型相比,它缺失了第7外显子,导致阅读框架移位,相应蛋白质的C端30个氨基酸不同于野生型。Western blot出现相对分子质量（Mr）为58×103的STING（sv）蛋白强阳性条带。STING（sv）荧光素酶功能分析显示,该剪接异构体能明显抑制病毒诱导的干扰素β启动子活性。STING（sv）在多数组织和不同细胞系中都能表达。STING（sv）的发现为STING这一重要分子的功能调节提供了新的线索,它可能是病毒感染通路中干扰素的显性负性抑制剂,提示其为干扰素产生的精细调节成分,在人类病毒感染性疾病中的病理意义值得探究。
- 王艳艳金蕊周国平徐华国
- 关键词：剪接异构体
- 干扰素基因刺激因子启动子的克隆、鉴定及活性分析被引量：1
- 2015年
- 目的克隆和鉴定干扰素基因刺激因子(STING)基因上游启动子序列,并评价其在人胚肾HEK-293T细胞中的启动活性。方法以人全血DNA为模板,PCR扩增STING启动子区2154bp序列。将此片段亚克隆至pGL-3基本载体荧光素酶报告基因上游的多克隆位点,构建重组报告质粒pGL-3/STING。转染HEK-293T细胞,检测其荧光素酶活性,并利用生物信息学方法分析转录因子结合位点。结果经酶切、测序鉴定,成功构建了含有STING启动子序列的表达质粒。与pGL-3基本质粒相比,pGL-3/STING启动子的相对荧光素酶活性增加(P<0.01)。STING启动子区域含SRY、HSF、AP1、Sp1/3、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白和GATA-1等多个转录因子结合序列。结论 STING转录起始位点上游2154bp区域在HEK-293T细胞中具有较强的启动活性。
- 王艳艳金蕊徐华国周国平
- 关键词：启动子活性
