国家教育部博士点基金(20020533032)
- 作品数：15 被引量：125H指数：7
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- 热休克反应对氧化应激所致nucleolin裂解的影响被引量：3
- 2004年
- 观察热休克反应对氧化应激 (0 .5mmol/LH2 O2 )诱导细胞凋亡发生时nucleolin(C2 3)裂解的影响并探讨其机制。方法 :采用caspase 3活性定量分析及免疫印迹技术检测氧化应激诱导的原代心肌细胞、RAW 2 6 4 .7巨噬细胞及K5 6 2白血病细胞凋亡及C2 3的裂解 ;通过热休克反应观察热休克反应对C2 3裂解的影响。结果 :0 .5mmol/LH2 O2处理细胞 2hcaspase 3活性显著升高 ,12h达高峰。免疫印迹结果显示上述各种细胞的C2 3蛋白均发生了裂解 (有 80kD裂解片断出现 ) ,而且最早出现裂解片段的时间都在H2 O2 处理 30min到 1h左右 ;同时热休克反应通过诱导HSP70 ,HSP2 5等应激蛋白表达而显著减少氧化应激所致C2 3的裂解。结论 :氧化应激诱导凋亡发生的同时也引起C2 3的裂解 ;热休克反应显著抑制氧化应激所致C2 3的裂解 。
- 王慷慨蒋磊易宇欣刘可鄂顺梅唐道林王建设石永忠王秋鹏肖献忠
- 关键词：热休克反应氧化应激CASPASE-3H2O2片段
- 热休克预处理抑制缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡及其机制被引量：19
- 2004年
- 目的 :探讨缺血 再灌注所致心肌细胞凋亡发生的机制及热休克预处理抑制缺血 再灌注所致心肌细胞凋亡的机制。方法 :采用结扎小鼠左冠状动脉制备在体小鼠心肌缺血 再灌注损伤 (I/R)模型 ,经DNAladder检测细胞凋亡 ,并检测caspase 3,caspase 8,caspase 9的活性。部分小鼠经热休克预处理后再进行上述实验。结果 :缺血 再灌注后心肌组织中出现DNA梯状条带 ,caspase 3,caspase 8,caspase 9活性显著增高 ;热休克预处理后 ,多种热休克蛋白 (HSPs)表达增加 ,DNA片断化减轻及caspase的活性受到抑制。结论 :缺血 再灌注损伤可激活膜死亡受体信号通路和线粒体信号通路 ,导致心肌细胞凋亡 ;通过诱导多种HSPs的表达 。
- 石永忠肖卫民蒋碧梅唐道林陈广文肖献忠
- 关键词：热休克预处理心肌细胞凋亡缺血-再灌注CASPASE-9HSPDNA片断
- 从凋亡信号通路探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的机制被引量：23
- 2003年
- 为探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的分子机制 ,采用热休克对原代培养的新生大鼠心肌细胞进行预处理 ,以诱导热休克蛋白的表达 ,观察热休克蛋白对过氧化氢所致心肌细胞凋亡的保护作用。结果发现 ,热休克预处理导致心肌细胞热休克蛋白 70及αB 晶状体蛋白表达明显增加 ,同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放 ,抑制Caspase 8、Caspase 9和Caspase 3活化及随后的心肌细胞凋亡。以上结果提示 ,热休克蛋白通过抑制线粒体信号通路与死亡受体通路的活化保护过氧化氢导致的心肌细胞凋亡 。
- 肖卫民蒋碧梅石永忠刘梅冬唐道林夏珂王慷慨张华莉邓恭华肖献忠
- 关键词：热休克蛋白过氧化氢细胞凋亡线粒体信号通路
- HSP70抑制H_2O_2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体的释放及细胞凋亡被引量：6
- 2005年
- 目的:阐明HSP70对H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用基因瞬间转 染技术使细胞HSP70或/和Smac高表达,采用Hoechst33258染色观察H2O2(0.5mmol/L)处理转基因C2C12肌原 细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率。DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯带。采用 caspase活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹分析caspase 9和caspase 3的活化。利用免疫荧光分析HSP70对H2O2 所致Smac从线粒体释放的影响。结果:HSP70对H2O2及Smac所致C2C12肌原细胞凋亡具有明显的抑制作用,凋 亡核百分率明显降低,DNA电泳未出现明显“梯状”条带;caspase 9和caspase 3的活化明显受到抑制;并进一步发 现HSP70可抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体释放。结论:HSP70可通过抑制Smac从线粒体释放来
- 蒋碧梅肖卫民石永忠刘梅冬肖献忠
- 关键词：HSP70SMAC细胞凋亡H2O2
- NF-κB/I-κB在过氧化氢所致心肌细胞损伤中的作用机制被引量：8
- 2004年
- 【目的】探讨氧化应激损伤心肌细胞的分子机制。【方法】采用 0 .5mmol/L过氧化氢 (hydrogenperoxide ,H2 O2 )作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞 ;采用胎盘蓝染色检测细胞死亡率 ,乳酸脱氢酶 (LDH)测定试剂盒检测其释放率 ,末端标记检测细胞凋亡 ,Westernblot检测NF κB内源性抑制蛋白I κB (inhibitorκB ,I κB)含量 ,免疫组化检测NF κB在细胞内的分布情况。【结果】①H2 O2 损伤 3h ,心肌细胞死亡率和LDH释放率均较对照组明显升高 (P <0 .0 1) ;②H2 O2 损伤 2 4h ,出现大量心肌细胞凋亡 ;③I κB在H2 O2 损伤 5min即减少 ,15min时减至最低 ,而后逐渐恢复 ;④H2 O2 损伤 0 .5h可引起心肌细胞中NF κB从胞浆向胞核移位 ,2h后复位 ;⑤与单纯损伤组比 ,NF κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐 (pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)能明显降低心肌细胞LDH释放率 (P <0 .0 1)。【结论】在H2 O2 所致心肌细胞损伤中 ,既有坏死 ,又有凋亡的发生 ,而NF κB/I κB信号通路的激活可能介导了H2 O2 所致的心肌细胞损伤。
- 涂自智肖卫民刘梅冬尢家騄肖献忠
- 关键词：心肌过氧化氢NF-ΚB
- Smac/DIABLO在过氧化氢所致C_2C_(12)肌原细胞凋亡中的作用被引量：9
- 2003年
- 为探讨Smac/DIABLO在过氧化氢 (H2 O2 )所致C2 C12 肌原细胞凋亡中的作用 ,采用Hoechst 3 3 2 58染色 ,观察H2 O2 (0 5mmol/L)处理C2 C12 肌原细胞不同时间后 ,细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率 ,DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯状带 ,利用细胞成分分离后蛋白质印迹分析H2 O2 是否导致Smac/DIABLO从线粒体释放 ,采用Caspase检测试剂盒及蛋白质印迹分析Caspase 3和Caspase 9的活化 ,转染Smac/DIABLO基因 ,观察Smac/DIABLO过表达对H2 O2 所致的C2 C12 肌原细胞凋亡的影响 .结果表明 :H2 O2 处理 1h后 ,Smac/DIABLO从C2 C12 肌原细胞线粒体释放入胞浆 ,2h更明显 ;H2 O2 处理 4h后 ,Caspase 3和Caspase 9活化 ,12h达高峰 ;H2 O2 处理 2 4h后 ,C2 C12 肌原细胞显示特征性的凋亡形态改变 ,凋亡核百分率明显升高 ,DNA电泳出现明显“梯状”条带 .与单纯过氧化氢损伤组相比 ,Smac/DIABLO高表达的C2 C12 肌原细胞经过氧化氢损伤组的Caspase 3和Caspase 9的活化、凋亡核百分率的升高、“梯状”条带的出现均更明显 .结果表明 ,H2 O2 可导致Smac/DIABLO从C2 C12 肌原细胞线粒体释放 ,促进Caspase 9和Caspase
- 蒋碧梅肖卫民石永忠刘梅冬唐道林肖献忠
- 关键词：SMAC/DIABLO过氧化氢细胞凋亡心肌损伤
- 核仁素反义寡核苷酸对RAW264.7细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2005年
- 【目的】探讨核仁素反义寡核苷酸对RAW264.7细胞增殖与凋亡的影响。【方法】采用反义寡核苷酸技术以抑制RAW264.7细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。【结果】免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞后24 h,核仁素的表达被显著抑制,同时反义寡核苷酸处理组细胞的增殖能力明显受到抑制,细胞凋亡百分率显著升高,并能检测到清晰的“梯状条带”。而正义及随机寡核苷酸导入细胞后不能降低核仁素的表达,对细胞增殖及凋亡均无明显影响。【结论】核仁素表达下调能抑制RAW264.7细胞增殖并能触发RAW264.7细胞凋亡。
- 邹江王慷慨刘可易宇欣鄂顺梅张玲莉肖献忠
- 关键词：脱噬作用
- 热休克预处理抑制过氧化氢所致C2C12肌原细胞释放天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物及细胞凋亡被引量：5
- 2004年
- 为探讨热休克预处理对过氧化氢所致C2C12肌原细胞凋亡和第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体释放的影响 ,采用 0 .5mmol L过氧化氢作用于C2C12肌原细胞。Hoechst332 5 8荧光染色 ,观察细胞形态学改变并计算凋亡百分率 ,抽提DNA作琼脂糖电泳 ,以确定细胞凋亡情况。采用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹观察天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9的活化情况。采用免疫荧光及细胞成分分离后蛋白质印迹检测第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体的释放。结果发现 ,过氧化氢处理 1～ 2h ,第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物逐渐从线粒体释放入胞浆 ;处理 4h天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9活性升高 ,12h达高峰 ;处理 2 4h细胞明显出现凋亡 ,凋亡百分率明显升高。热休克预处理可诱导C2C12肌原细胞中热休克蛋白 90 ,热休克蛋白 70及αB 晶状体蛋白的表达增高 ;抑制第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物释放、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9的活化及细胞凋亡的发生。结果提示 ,线粒体信号通路在?
- 蒋碧梅肖卫民石永忠刘梅冬唐道林肖献忠
- 关键词：病理学与病理生理学热休克预处理热休克蛋白过氧化氢
- 过氧化氢通过线粒体通路和死亡受体通路诱导心肌细胞凋亡被引量：29
- 2003年
- 为探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡的分子机制 ,采用 0 .5mmol L过氧化氢作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞。末端标记发现过氧化氢明显诱导心肌细胞凋亡 ;Caspase活性定量检测及Western blot发现Caspase 3、Caspase 8和Caspase 9同时被激活 ;而Western blot及间接免疫荧光发现细胞色素C从线粒体释放入胞浆。以上结果提示 ,氧化应激通过同时激活线粒体通路与死亡受体通路导致心肌细胞凋亡 。
- 肖卫民蒋碧梅石永忠刘梅冬唐道林王慷慨张华莉邓恭华肖献忠
- 关键词：心肌缺血心肌再灌注损伤过氧化氢细胞凋亡线粒体信号通路
- 核仁素表达下调对C_2C_(12) 细胞增殖与凋亡的影响被引量：7
- 2005年
- 目的:探讨核仁素反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的影响。方法:采用反义寡核苷酸技术以抑制CC12细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞后24h,核仁素的表达受到明显抑制,同时反义寡核苷酸处理组细胞的增殖能力亦明显受到抑制,细胞凋亡百分率显著升高,并能检测到清晰的“梯状条带”。而正义及随机核酸导入细胞后不能降低核仁素的表达,对细胞增殖及凋亡均无明显影响。结论:核仁素表达下调能抑制C2C12细胞增殖并能触发C2C12细胞凋亡。
- 王慷慨蒋磊鄂顺梅刘可张玲莉刘梅冬肖献忠
- 关键词：表达下调核仁素反义寡核苷酸技术MTT法检测凝胶电泳检测组细胞
