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抗人肝癌单链抗体HAb25-scFv的构建及其表达被引量：1: 2005年; 目的构建和原核表达抗人肝癌单链抗体HAb25scFv,为其进一步的临床应用研究奠定基础。方法采用(Gly4Ser)3为连接肽,在pUC19质粒上构建HAb25scFv单链抗体基因;序列分析证实后将HAb25scFv基因亚克隆入pGFX4T1GST融合表达载体上,SDSPAGE电泳鉴定表达产物并建立目的蛋白的纯化方法;免疫荧光竞争实验鉴定HAb25scFv单链抗体的活性。结果序列分析证实在pUC19质粒上以(Gly4Ser)3连接肽成功构建了HAb25scFv单链抗体基因;HAb25scFv单链抗体基因在pGEX4T1GST融合表达载体中获得高效表达,其表达量占菌体总蛋白的60.8%;经GST亲和层析柱,可获得纯度达95.2%的GSTHAb25scFv融合蛋白;免疫荧光竞争实验证实HAb25scFv单链抗体具有与其亲本抗体相同的抗原结合特性,并至少保留了亲本抗体39.12%的亲合力。结论获得了HAb25scFv单链抗体基因,并在原核GST融合表达系统中实现了HAb25scFv的高效表达,免疫荧光竞争实验证实HAb25scFv较好地保留了其亲本抗体的特异性和亲和力。; 胡川闽李鹏陈安郭建秀刘彦仿; 关键词：肝细胞肝癌单链抗体克隆

抗人MIF单克隆抗体的制备及其活性的初步鉴定被引量：4: 2006年; 目的构建人巨噬细胞移动抑制因子(hum an m acrophage m igration inh ib itory factor,hM IF)原核表达系统并制备其单克隆抗体。方法采用RT-PCR从乳腺癌细胞株MDA-MB453细胞克隆hM IF cDNA,测序后构建pET11b/hM IF重组表达质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达hM IF;重组hM IF经纯化和鉴定后,作为抗原常规免疫和CpG ODN加强免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体并鉴定活性。结果构建pET11b/hM IF重组表达质粒,表达出预期hM IF蛋白,表达率30%,纯化后纯度达95%。W estern b lotting鉴定为hM IF,NO释放实验证实具有生物学活性。两种免疫方案共获得9株分泌抗hM IF抗体的杂交瘤细胞株,其中一株经W estern b lotting和活性鉴定证明具有特异性和生物学活性。结论获得hM IF重组蛋白和抗hM IF单克隆抗体,为其基础性研究和在脓毒症的治疗等临床应用研究奠定基础。; 郭建秀李鹏伍艳芳易维京刘进军郭鹰唐捷胡川闽; 关键词：巨噬细胞移动抑制因子原核表达单克隆抗体生物学活性

抗肝癌单链免疫毒素HAb25(scFv)-PE40的构建及其导向作用的实验研究被引量：3: 2005年; 目的构建单链免疫毒素HAb25(scFv)-PE40并探讨其导向细胞毒作用。方法采用亚克隆技术,首先将HAb25(scFv)与绿脓杆菌外毒素基因突变子PE40,在p ly5载体上构建HAb25(scFv)-PE40单链免疫毒素基因;再将其亚克隆入pBV220原核表达载体中,转化DH5α宿主菌,温度诱导表达;SDS-PAGE观察其表达水平并建立目的蛋白的纯化方法;间接免疫荧光染色鉴定HAb25(scFv)-PE40与肝癌细胞结合的特异性;体外导向细胞毒实验明确其是否具有选择性靶细胞杀伤活性。结果限制性酶切图谱和序列分析证实在p ly5载体上成功地构建了HAb25(scFv)-PE40单链免疫毒素基因;该单链免疫毒素基因在pBV220载体中获得高效表达,其表达量占菌体总蛋白的43.3%;纯化后的HAb25(scFv)-PE40间接免疫荧光染色显示具有与亲本抗体HAb25相同的抗原结合特性;导向细胞毒实验结果显示HAb25(scFv)-PE40具有明确的选择性靶细胞杀伤活性。结论已成功构建和高效表达了单链免疫毒素HAb25(scFv)-PE40,该免疫毒素有选择性地杀伤靶肝细胞的生物活性(P<0.001),为其进一步的基础和临床应用研究奠定了基础。; 胡川闽郭建秀李鹏陈安刘彦仿; 关键词：肝细胞肝癌单链抗体免疫毒素

巨噬细胞移动抑制因子分子作用机制的研究进展被引量：14: 2005年; 巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是一种受下丘脑垂体控制的多功能细胞因子,由于与多种炎症性cPLA2、自体免疫性疾病及肿瘤等密切相关而受到极大关注。MIF的分子作用机制较为复杂,至今尚未完全阐明,国内外学者对此进行了大量研究,现就MIF分子作用机制的最新研究进展作一综述。; 刘进军胡川闽魏明竟; 关键词：巨噬细胞移动抑制因子分子作用机制自体免疫性疾病 CD74 TLR-4

人乳腺珠蛋白与乳腺癌被引量：4: 2006年; 人乳腺珠蛋白(hMAM)是乳腺组织特异性表达的分泌性蛋白,目前被认为是一种具有临床应用前景的乳腺肿瘤标志物。现就MAM在乳腺癌肿瘤免疫治疗中的应用、作为乳腺癌肿瘤标志物的诊断现状和存在问题等方面探讨MAM在乳腺癌肿瘤疫苗的设计、诊断及转移检测的作用。; 郭建秀刘秀娜胡川闽; 关键词：珠蛋白乳腺肿瘤免疫逃逸肿瘤标记生物学

人源性MIFcDNA的克隆及其原核高效表达的研究被引量：1: 2005年; 目的　克隆人MIFcDNA并构建其高效原核表达载体,表达和纯化得到高纯度的可溶性hMIF蛋白。方法　经RT PCR从人乳腺癌细胞株MDA MB45 3中扩增到hMIFcDNA ,并克隆到原核表达载体pET11b中。测序验证后将其转入大肠杆菌BL2 1中表达,最后经离子交换和疏水层析法纯化hMIF蛋白。结果　克隆到的hMIFcDNA与Genebank已发表的序列完全一致,纯化得到的产物经Westernblotting鉴定证实为hMIF蛋白。结论　应用基因重组技术成功构建了pET11b/hMIF重组质粒,在大肠杆菌中实现了高效表达;纯化到高纯度的可溶性hMIF蛋白,为治疗性抗hMIF抗体的研究创造了条件。; 刘进军李鹏郭鹰潘自铁胡川闽; 关键词：乳腺癌原核表达蛋白纯化

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重庆市自然科学基金(2004BA5017)