教育部科学技术研究重点项目(108017)
- 作品数：5 被引量：28H指数：3
- 相关作者：张志毅安新民王静澄崔东清叶梅霞更多>>
- 相关机构：北京林业大学更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 毛白杨PtSEP3-1基因启动子的克隆分析及其表达载体构建被引量：10
- 2010年
- SEP(SEPALLATA)类基因属于花器官发育ABCDE模型中的E类基因,拟南芥中的研究表明该类基因可能具有控制花器官形态发育以及激活其它类型基因的功能,是一类花发育过程中的关键基因。因此,研究杨树SEP类基因启动子表达特性对于杨树的开花调控研究具有重要意义。本文根据毛白杨SEP3基因和毛果杨基因组序列设计引物,通过PCR获得了PtSEP3-1基因上游2000bp的序列。序列分析结果表明该序列具有启动子的基本元件TATA-box和CAAT-box,还包含大量光响应元件ACE、Box I和Box4等,此外还有脱落酸响应元件ABRE,赤霉素响应元件GARE-motif以及胁迫响应元件HSE、TC-richrepeats等。进一步构建了一个以PtSEP3-1启动子驱动GUS基因的植物表达载体pPtSEP3-1protest,为该启动子的功能鉴定奠定了基础。
- 王静澄李昊崔东清刘军梅叶梅霞张志毅安新民
- 关键词：毛白杨启动子
- 毛白杨PtLFY在花芽发育中的表达模式与花芽形态分化被引量：7
- 2010年
- 以毛白杨花芽为材料,采用RT-PCR技术分离克隆毛白杨PtLFYcDNA序列,测序结果表明该序列全长1314bp,包含1个开放阅读框,编码377个氨基酸。Alignment分析显示该基因与拟南芥等物种LFY/FLO同源基因所编码的氨基酸相似性达到68%～75%。蛋白结构预测分析表明,在PtLFY蛋白N-端和C-端具有2个高度保守的区域,其中PtLFY-C端由7个α-helix组成Helix-turn-helix结构。采用Real-time qRT-PCR技术检测PtLFY在雌雄花芽发育过程中的表达模式,结果显示从9月13日到翌年1月25日,PtLFY在毛白杨雌雄花芽中持续稳定表达,到2月25日表达量少许下调,但该基因在雄花芽中的相对表达量明显高于雌花芽。解剖分析结果表明,雄花芽形态分化进程明显早于雌花芽,这种差异可能与PtLFY在雌雄花芽发育过程的差异表达存在密切联系。研究结果对于阐明PtLFY在毛白杨雌雄花芽发育和开花中的分子作用机制具有重要的理论意义,为进一步开展毛白杨开花调控研究奠定基础。
- 安新民王冬梅王泽亮王静澄曹冠琳薄文浩张志毅
- 关键词：毛白杨花芽形态分化QRT-PCR
- amiRNA分子设计及其离体合成策略被引量：2
- 2010年
- 详细介绍了基于WMD3(Web MicroRNA Designer 3)软件平台的amiRNA(artificial microRNA)分子自动设计方法及其离体合成策略。应用网络在线设计时,只需输入目的基因靶序列相关信息后便可获得候选amiRNA。根据选定的最佳amiRNA,可得到4条含有amiRNA以及载体中miRNA两侧序列的寡聚核苷酸序列。重叠延伸PCR合成策略可以以这4条序列以及根据质粒模板设计的A、B两段序列作为引物,扩增出目标amiRNA。同样尿嘧啶切除的策略也可合成amiRNA,但这些引物序列需做适当调整变动。此外,还介绍了基于特异引物退火的amiRNA合成策略,该策略可保证amiRNA分子能够一步PCR合成,合成后的amiRNA表达盒可通过合适的限制性位点被克隆至目的载体中的相应位点。可以预见,这种amiRNA分子设计的科学性与合成策略的精确性将会使amiRNAi技术在生物基因功能分析中发挥更加重要的作用,对生命科学研究产生深远的影响。
- 叶梅霞崔东清李昊王静澄刘军梅张志毅安新民
- 关键词：分子设计
- 毛白杨PtSEP2基因启动子克隆和瞬时表达特性分析被引量：1
- 2011年
- 利用PCR技术从毛白杨基因组DNA中扩增获得花器官发育相关的SEPALLATA2类似基因PtSEP2 5'侧翼约2.3kb的一段序列,经PlantCARE序列分析表明,该序列中含有启动子特征的保守序列及多种光应答元件,初步推测其为PtSEP2基因启动子。进一步以GUS为报告基因,构建了pPtSEP2 promoter∷GUS的植物表达载体,命名为PtSEP2p∷GUS。以烟草根、茎、叶、花芽为受体,通过农杆菌介导转化植物表达载体PtSEP2p∷GUS进行瞬时表达研究,结果表明该启动子能够驱动GUS报告基因在烟草花药中表达,而其表达活性弱于组成型表达的花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子。该启动子的获得对于杨树及其他开花调控基因工程研究具有重要的应用价值。
- 崔东清叶梅霞刘军梅李昊张志毅安新民
- 关键词：毛白杨GUS活性
- amiRNAi-实现高效稳定的特异基因沉默新方法被引量：9
- 2010年
- RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)是实现基因沉默的有效工具。近年来,随着分子生物学与生物技术的快速发展,在RNAi基础上又发展出另一种特异性更高的基因沉默技术—amiRNAi(artificial microRNA interference)。amiRNAs是一类由内源miRNA前体生成的长21个核苷酸的人工小RNA分子,它能在不影响其他基因表达的情况下特异地介导单个或多个靶基因高效稳定沉默。与普通的RNAi相比,amiRNAi具有特异性高、稳定性强和沉默效应可预见等优点。因而amiRNAi可能成为基因功能分析的最有效工具之一,同时amiRNAi对于基因负调控研究和应用而言前景广阔。着重介绍了amiRNAi技术的原理、优势及其潜在的应用价值。
- 叶梅霞刘军梅李昊崔东清王静澄张志毅安新民
- 关键词：MIRNA
