中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(ITBBZX2008-4-2)
- 作品数：5 被引量：1H指数：1
- 相关作者：张爱联易国辉罗进贤张添元屠发志更多>>
- 相关机构：中国热带农业科学院海南大学中山大学更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达cbhⅡ基因
- 2010年
- 用套叠PCR法扩增木霉的cbh Ⅱ基因,以EcoR I和Not I双酶切将其克隆进P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP-cbh Ⅱ。通过电转法将其cbhⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆作为工程菌。用葡萄糖作为碳源摇瓶发酵3 d,分泌的重组蛋白CBHⅡ达到50 mg/L。用CMC酶活法测定发酵液中的CMC酶活力为2.05 U/mL。
- 易国辉屠发志张爱联张添元屈直罗进贤
- 关键词：毕赤酵母基因表达酶活力
- 高密度发酵P.pastoris诱导表达egⅡ基因
- 2011年
- 用套叠PCR法扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)的葡聚糖内切酶Ⅱ(egⅡ)基因。扩增基因经EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,获得重组表达质粒pPIC9K-egⅡ。通过电转法将egⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的转化子作为工程菌。工程菌的发酵在生物反应器中进行,在50 L的发酵罐中加入20 L发酵液。连续24 h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后以甲醇为碳源诱导egⅡ基因表达48 h。放罐时生物量为A_(600)=203,重组EGⅡ产量为90 mg/L。表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。
- 尹慧祥易国辉屠发志张添元罗进贤张爱联
- 关键词：里氏木霉葡聚糖内切酶基因表达P.PASTORIS高密度发酵
- 高密度发酵P.pastoris诱导表达葡聚糖外切酶被引量：1
- 2010年
- 目的:应用P.pastoris的pAOX1表达系统表达CBHⅡ酶。方法:PCR法扩增木霉的cbhⅡ基因。将其克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,电转法将其cbhⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆为工程菌。重组CBHⅡ酶的生产是在50 L生物反应器中进行。连续24h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后用甲醇诱导表达64h。结果:放罐时生物量为A600=180,重组CBHⅡ产量为80mg/L。表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。结论:实现应用pAOX1表达系统在生物反应器中高密度发酵P.pastoris诱导表达CBHⅡ。该研究为重组CBHⅡ的规模化生产打下基础。
- 杨穗珊易国辉屠发志张添元罗进贤张爱联
- 关键词：P.PASTORIS高密度发酵
- 高密度发酵P.pastoris组成型表达纤维素二糖水解酶
- 2010年
- 用PCR法扩增里氏木霉cbhⅡ基因,并将其克隆到P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP9K-cbhⅡ。通过电转法将cbhⅡ基因整合到P.pastoris的基因组中,然后筛选高G418抗性的克隆作为工程菌菌种。在生物反应器中生产CBHⅡ,将20L发酵液装入50L的发酵罐中,在发酵过程中连续64h补加甘油-PTM4,放罐时生物量为A600=170,CBHⅡ的表达量为75mg/L。其表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。
- 崔艳艳易国辉屠发志张添元罗进贤张爱联
- 关键词：毕赤酵母基因表达
- 增加外源基因在植物中复制、转录和翻译的策略
- 2009年
- 与其他的真核表达系统(例如酵母和昆虫)比较,植物表达系统的主要优越性在于植物细胞具有全能性,能再生植株.这是植物表达系统能够以低廉的成本大规模生产重组蛋白的潜力.但是,由于植物表达系统重组蛋白表达产量低,使植物表达系统在大规模重组蛋白生产中的应用受到很大的影响.蛋白的产量与基因的数量、基因的转录和翻译水平密切相关.近年来,人们在增加外源基因在植物中复制、转录和翻译作了大量的探讨,使在植物表达重组蛋白产量低的问题得到改善.笔者综述了这方面的研究进展.
- 易国辉张爱联屈直
- 关键词：植物转录翻译
