国家自然科学基金(39900147)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
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- 大鼠膀胱移行上皮细胞的原代培养研究
- 2003年
- 许传亮孙颖浩顾正勤王元天邱镇
- 关键词：膀胱移行上皮细胞原代培养酶消化法组织块培养法
- 膀胱移行上皮细胞的体外培养研究被引量：6
- 2003年
- 目的 探索并建立大鼠膀胱移行上皮细胞的体外培养方法 ,为膀胱癌相关研究提供实验依据。方法 获取Wistar大鼠膀胱粘膜 ,采用Dispase酶消化法收集上皮细胞。动态观察细胞形态变化、生长增殖情况 ;对培养细胞进行细胞周期检测及超微结构观察 ,并行免疫组织化学鉴定。结果 培养细胞为二倍体移行上皮细胞 ,无成纤维细胞混杂生长。免疫组织化学证实角蛋白染色阳性。结论 膀胱移行上皮细胞体外培养为体外研究提供了理想的模型。
- 许传亮孙颖浩顾正勤王元天邱镇
- 关键词：膀胱移行上皮细胞体外培养细胞培养原代培养膀胱癌
- 人前列腺干细胞抗原在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备
- 2006年
- 目的:克隆并在大肠杆菌中表达人前列腺干细胞抗原(PSCA)基因,制备其抗血清。方法:通过PCR方法扩增包含蛋白融合点的PSCA基因片段,经DNA测序证实后克隆至带有Trx.6H is标签的原核表达载体pET32 a,重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果,经N i-NTA树脂亲和纯化的蛋白皮下注射免疫小鼠,ELISA检测抗血清的滴度,免疫组化鉴定其特异性。结果:PCR扩增得到241 bp的目的片段,序列测定证实与GenBank上登录的序列一致;成功构建了PSCA基因片段的原核表达载体pET32 a-PSCA;在大肠杆菌中表达,于相对分子质量为20.4×103处有一蛋白新生带;PSCA融合蛋白免疫小鼠后,ELISA确认抗血清的滴度>1∶4 000。抗血清检测到前列腺癌组织中PSCA的表达。结论:成功克隆、表达了人PSCA融合基因片段,并制备了相应的抗血清。
- 顾正勤许传亮孙颖浩高旭王林辉
- 关键词：前列腺干细胞抗原免疫血清
