国家自然科学基金(81072753)
- 作品数：8 被引量：45H指数：4
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- Caco-2细胞中^(13)C-D-葡萄糖含量测定方法的建立
- 2013年
- 【目的】建立检测Caco-2细胞中13C-D-葡萄糖含量的液相色谱—质谱联用(LC-MS)方法。【方法】样品经前处理后,通过Atlantis HILIC色谱柱分离,以乙腈与体积分数0.1%甲酸为流动相,质谱为电喷雾离子源,在负离子模式下以选择反应监测(SRM)方式进行检测。【结果】在选定的色谱和质谱条件下,各指标成分峰分离良好,13C-D-葡萄糖在定量范围内呈现良好的线性关系,R2=0.999 5,高、中、低浓度日内精密度和日间精密度相对标准偏差(sR)<20%,回收率在100.61%～108.34%之间,样品检测的重复性及样品稳定性良好。【结论】本方法适用于Caco-2细胞中13C-D-葡萄糖含量的测定。
- 任理郑润生郭文峰刘佳陈蔚文徐晖
- 关键词：细胞培养
- 稳定同位素示踪法用于Caco-2细胞葡萄糖吸收模型的研究被引量：2
- 2013年
- 目的建立Caco-2细胞葡萄糖吸收模型,为考察药物对葡萄糖吸收的影响提供方法。方法 Caco-2细胞培养7,14,21 d后,分别加入25,50,75,100 mmol.L-1的葡萄糖溶液孵育5,10,15,20 min,采用高效液相色谱-质谱联用技术,以稳定同位素示踪法比较培养时间、葡萄糖浓度以及孵育时间对葡萄糖吸收的影响。结果 Caco-2细胞培养21 d后葡萄糖的吸收优于培养7 d和14 d的吸收,吸收量大,趋势稳定。此时用75 mmol.L-1的葡萄糖溶液孵育细胞10 min,葡萄糖吸收量与100 mmol.L-1比较差异无统计学意义,但高于25,50 mmol.L-1时的葡萄糖吸收量。结论本实验条件下建立的Caco-2细胞模型可作为研究葡萄糖吸收的模型。
- 任理郭文峰刘佳陈蔚文
- 关键词：CACO-2细胞葡萄糖稳定同位素液质联用
- 黄芪提取物对结肠腺癌Caco-2细胞葡萄糖吸收的影响被引量：2
- 2016年
- 目的:探讨黄芪提取物对Caco-2细胞葡萄糖吸收的影响,并探讨其作用机制。方法:采用系统溶剂法提取黄芪各部位,以Caco-2细胞为研究对象,设立空白组和黄芪各提取部位组(乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇4个部位组)。以荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)做为光学探针检测黄芪各提取部位对Caco-2细胞葡萄糖吸收能力的影响。筛选出黄芪中促进Caco-2细胞葡萄糖吸收的药效部位后,对这一药效部位有效作用浓度进行考察。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)法测定Caco-2细胞钠依赖葡萄糖转运蛋白(SGLT1)和2型葡萄糖转运蛋白(GLUT2)蛋白表达。结果:黄芪正丁醇提取部位可以促进Caco-2细胞葡萄糖的吸收,与空白组比较,黄芪正丁醇提取部位100,150 mg·L-1组Caco-2细胞葡萄糖含量升高(P<0.05,P<0.01);且黄芪正丁醇部位可以上调Caco-2细胞GLUT2和SGLT1蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪正丁醇萃取部位可以促进Caco-2细胞葡萄糖的吸收,这一作用机制可能与SGLT1和GLUT2蛋白的调节有关。
- 张磊曾丹郑媛嘉许燕玲郭文峰
- 关键词：CACO-2细胞葡萄糖吸收
- 黄芪六一汤对2型糖尿病大鼠降糖作用的机制研究被引量：8
- 2018年
- 目的:探讨黄芪六一汤对糖尿病大鼠的降糖作用及其机制。方法:采用高脂高糖饲养合并腹腔注射链脲佐菌素(30 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型。造模成功的大鼠随机分为模型组、达格列净阳性对照组及黄芪六一汤低、中、高剂量组。实验期间每周称体质量,尾静脉采血测量空腹血糖、糖化血红蛋白及胰岛素的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定2型葡萄糖转运蛋白(GLUT2)和钠-葡萄糖转运蛋白(SGLT2)的表达;荧光定量PCR分别检测GLUT2、SGLT2 mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低,血糖、糖化血红蛋白水平及SGLT2、GLUT2蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,黄芪六一汤各组糖化血红蛋白、SGLT2蛋白表达均显著降低,GLUT2蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。黄芪六一汤对模型大鼠体质量及GLUT2、SGLT2 mRNA表达无明显影响。结论:黄芪六一汤对高脂高糖饲养合并腹腔注射STZ致糖尿病大鼠具有降糖作用,治疗效果与达格列净相似,其作用机制与抑制SGLT2蛋白功能有关。
- 温丽敏许燕玲李振郑媛嘉郭文峰
- 关键词：2型糖尿病
- 黄芪对脾虚大鼠小肠葡萄糖吸收功能的影响及机制被引量：6
- 2017年
- 目的探讨黄芪对脾虚证大鼠模型小肠黏膜葡萄糖吸收功能的影响及其作用机制。方法采用皮下连续注射利血平注射液(0.5 mg·kg^(-1))14 d建立脾虚证大鼠模型。大鼠随机分为正常组、造模组,并将造模成功的大鼠随机分为模型组、黄芪组(6.0 g·kg^(-1)),连续给药21 d。每日记录大鼠体质量;分别于造模结束和给药结束后收集大鼠尿液,采用硫酸苯酚法测定尿D-木糖排泄率;采用大鼠在体空肠灌流实验及葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖吸收量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定钠依赖葡萄糖转运蛋白(SGLT1)和2型葡萄糖转运蛋白(GLUT2)的蛋白表达;荧光定量PCR法测定SGLT1/GLUT2的m RNA表达。结果与正常组比较,造模组大鼠体质量及模型组大鼠尿D-木糖排泄率、葡萄糖吸收量、SGLT1/GLUT2蛋白相对表达量、SGLT1/GLUT2 m RNA相对表达量均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,黄芪组大鼠尿D-木糖排泄率、葡萄糖吸收量、SGLT1/GLUT2蛋白相对表达量、SGLT1/GLUT2 m RNA相对表达量均明显提高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪能够改善利血平致脾虚证大鼠小肠对葡萄糖的吸收功能,其机制可能与调节SGLT1/GLUT2的蛋白表达有关。
- 郑媛嘉张磊郭文峰
- 关键词：脾虚证葡萄糖
- 四君子汤对脾气虚证模型大鼠小肠葡萄糖吸收功能作用的影响被引量：25
- 2013年
- 目的观察四君子汤对脾气虚证模型大鼠小肠葡萄糖吸收功能的影响。方法通过颈部皮下注射利血平建立脾气虚证大鼠模型,观察大鼠体重及尿D-木糖排泄率变化,通过在体空肠灌流收集并检测葡萄糖吸收量,收集小肠黏膜,检测葡萄糖运载蛋白2(GLUT2)蛋白及mRNA表达变化。结果与正常对照组比较,模型组大鼠体重及尿D-木糖排泄率均降低,同时伴有葡萄糖吸收的下降以及GLUT2蛋白及mRNA表达的降低,通过给予四君子汤治疗,四君子汤组在各指标恢复上均优于自然恢复组。结论四君子汤能够促进利血平致脾气虚证模型大鼠小肠吸收葡萄糖功能恢复。
- 刘佳郭文峰任理陈蔚文
- 关键词：四君子汤脾气虚证葡萄糖小肠吸收
- 人参皂苷Re对Caco-2细胞葡萄糖吸收功能的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:研究人参皂苷Re对Caco-2细胞葡萄糖吸收的影响。方法:Caco-2细胞培养21 d后加入根皮素及人参皂苷Re孵育,采用稳定性同位素示踪技术,以LC-MS/MS法测定细胞中葡萄糖的吸收量,检测GLUT2蛋白和mRNA表达变化。结果:根皮素能够显著抑制葡萄糖的吸收,50μmol/L人参皂苷Re能够改善受根皮素抑制的葡萄糖吸收量,并增加GLUT2蛋白及mRNA表达。结论:人参皂苷Re能够促进Caco-2细胞对葡萄糖的吸收,并能扭转根皮素对葡萄糖吸收的抑制作用,其作用机理的发挥可能与调控GLUT2有关。
- 刘佳郭文峰任理陈蔚文
- 关键词：人参皂苷RE葡萄糖吸收LC-MS/MS
- 黄芪六一汤对2型糖尿病模型大鼠肾小管上皮葡萄糖重吸收的作用被引量：4
- 2017年
- 目的:观察黄芪六一汤对糖尿病大鼠血糖、糖化血红蛋白、血脂及肾小管上皮钠-葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)的作用,探讨该方治疗糖尿病的疗效及其可能的作用机制。方法:将77只SPF级SD大鼠按体重随机分为6组,分别为正常组,模型组,二甲双胍组(0.15 g·kg^(-1)),黄芪六一汤低、中、高剂量组(3.15,6.30,12.60 g·kg^(-1));糖尿病模型复制方法采用高脂高糖喂养28 d后,40 mg·kg^(-1)体重剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射造模。STZ注射后第7天开始分别给予相应治疗药物灌胃,正常组、模型组同法灌胃相应体积的水。连续灌胃给药治疗6周,每周1次,禁食6 h后尾静脉取血测血糖,末次给药后禁食12 h后,给大鼠进行尾静脉取血测血糖,然后麻醉大鼠,腹腔静脉取血,处死动物后留取取肾、胰腺做病理切片苏木素-伊红(HE)染色检查。观察血糖、糖化血红蛋白、血脂四项、体重、进食量、肾组织SGLT2蛋白表达等指标。结果:各造模组的血糖均高于正常组(P<0.01),血糖>13.0 mmol·L^(-1)。经过6周自行恢复后,模型组血糖仍显著高于正常组(P<0.01);二甲双胍组、黄芪六一汤中、高剂量组血糖均明显低于模型组(P<0.05)。模型组的糖化血红蛋白升高,高于正常组(P<0.01),与模型组比较,二甲双胍、黄芪六一汤高剂量组糖化血红蛋白明显低于模型组(P<0.05)。造模组大鼠胰腺病理切片HE染色可见胰岛结构完整,说明本实验中并未造成胰岛的完全破坏。肾脏病理切片可见,各组大鼠肾脏肾小球、集合小管、近端及远端小管的结构完整,未见明显病理损害。各给药组大鼠肾组织SGLT2蛋白表达均有所降低(P<0.05,P<0.01)。结论:高糖高脂饮食合并腹腔注射STZ致糖尿病大鼠模型肾组织SGLT2蛋白表达增高,黄芪六一汤能降低实验性糖尿病模型大鼠血糖、糖化血红蛋白,有降低模型大鼠肾组织中SGLT2蛋白表达的作用。部分抑制肾小管上皮葡�
- 许燕玲郑媛嘉李振温丽敏郭文峰
- 关键词：血糖糖化血红蛋白
