艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2013ZX10001004-002-001)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：姚文荣杨贵波王凤杰崔艳芳余磊更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 中国恒河猴DNGR-1分子C型凝集素样结构域在大肠杆菌系统表达被引量：2
- 2014年
- 目的获得恒河猴C型凝集素结构域家族9的A成员(Clec9A)基因编码区序列;体外表达CLEC9A的C型凝集素样结构域(CTLD)。方法利用Clec9A基因特异引物,反转录PCR扩增中国恒河猴Clec9A基因编码区,亚克隆至pGEM-T载体,获得pGEM-T-DNGR质粒并进行测序。构建CLEC9A分子的CTLD区原核表达质粒pET-32a-CTLD,转化BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,并用SDS-PAGE和Western blot法对目的蛋白进行鉴定。结果 PCR扩增得到726 bp的Clec9A编码区全长,测序和序列比对发现恒河猴CLEC9A编码区的核苷酸序列与人和小鼠的同源性分别为95.0%和73.1%,推测的氨基酸同源性分别为91.7%和57.3%。体外表达获得相对分子质量(Mr)约32 000的CTLD融合蛋白,Western blot方法鉴定发现其与人DNGR-1分子具有相似的抗原性。结论中国恒河猴Clec9A基因与人的高度相似并能编码与人CTLD抗原性相似的蛋白。
- 姚文荣杨贵波
- 关键词：中国恒河猴树突状细胞
- 恒河猴XC趋化因子受体1(XCR1)基因的克隆和体外表达
- 2017年
- 目的了解恒河猴XC趋化因子受体1(XCR1)基因特征,并在HEK293T细胞上表达。方法采用反转录PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆恒河猴XCR1基因、并与GenBank中其他物种XCR1的cDNA序列进行比对。构建真核表达载体3.1-XCR1并转染HEK293T细胞,采用流式细胞术、Western blot法和激光扫描共聚焦显微镜技术检测XCR1蛋白的表达。结果恒河猴XCR1 cDNA序列全长1665 bp,包含415 bp的5'非翻译区(5'UTR)、1003 bp的编码区和248 bp的3'UTR;恒河猴XCR1编码区氨基酸序列与人XCR1的相似性为96.8%,而且具有相似的结构特征:含有七次跨膜结构,酸性N端以及保守的G蛋白锚定功能性基序HRYLSVV。与基因组序列比对和跨外显子反转录PCR结果表明,在恒河猴多种组织中只存在缺失第二外显子的剪接变异体。恒河猴XCR1可在HEK293T细胞中表达Mr40 000左右的分子、主要分布于细胞质和细胞膜上。结论除mRNA剪接异构体以外,恒河猴XCR1分子与人高度相似,并且能在HEK293T细胞中有效表达。
- 余磊李冬姚文荣王凤杰崔艳芳杨贵波
- 关键词：恒河猴剪接异构体真核表达
- C型凝集素9家族A成员的研究进展
- 2016年
- C型凝集素9家族A成员(CLEC9A),又称为树突状细胞-NK细胞凝集素群受体1(DNGR-1),属于非经典的2型跨膜C型凝集素样受体,其表达具有高度的树突状细胞(DC)限制性。小鼠CLEC9A主要表达在CD8α^+DC和CD103^+DC表面,人CLEC9A主要表达在血液树突状细胞抗原3阳性DC(BDCA3^+DC)表面。在表型和功能方面,人的同时表达CLEC9A和BDCA3(CLEC9A^+BDCA3^+)的DC与小鼠的CD8α^+DC具有相似性。CLEC9A能够与坏死或受损细胞的纤维状肌动蛋白结合,经细胞质区的免疫受体酪氨酸活化基序结构启动细胞内信号的转导。CLEC9A能介导内吞作用,参与交叉提呈抗原等作用,在抗病毒感染、肿瘤预防与治疗和疫苗的研究中具有潜在的应用前景。本文阐述了CLEC9A分子的研究进展。
- 姚文荣杨贵波
- 关键词：树突状细胞内吞作用纤维状肌动蛋白
