江苏省高技术研究计划项目(BG2006607)
- 作品数：4 被引量：25H指数：3
- 相关作者：孟继鸿周镇先董晨戴星韩振格更多>>
- 相关机构：东南大学南京市第二医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省高技术研究计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 用不同基因型戊型肝炎病毒重组蛋白建立酶联免疫吸附测定一步法被引量：3
- 2009年
- 目的以7种不同基因型和亚型的HEV重组蛋白作为包被抗原，建立HEV抗体检测EuSA一步法。方法通过方阵滴定法确定包被抗原浓度，确定临界值，并进行敏感度、特异度和热稳定性试验。结果7种重组抗原混合物（Mix166）最佳包被浓度为1．5mg／L。抗-HEV IgG检测试剂的批内、批间变异系数分别为8．67％和10．85％，抗一HEV IgM检测试剂的批内、批间变异系数分别为4．56％和5．99％。一步法检测50份HEV RNA阳性血清的HEV IgG和HEV IgM抗体，阳性率均为94％。一步法检测674份健康者血清，52份抗-HEVIgG阳性．3份抗HEV IgM阳性。一步法检测HEV墨西哥株攻击黑猩猩后收集的系列血清发现，病毒攻击后1～6周抗-HEVIgM阳性，2～76周抗-HEV IgG阳性，而进口试剂盒缺乏对抗-HEV墨西哥株IgG、IgM的反应性。结论Mix166作为包被抗原建立的HEV抗体ELISA一步法具有较好的敏感性和特异性，可用于HEV感染的诊断。
- 周镇先丁福董晨龚希平耿全林孟继鸿
- 关键词：酶联免疫吸附测定基因型
- 一个能诱生戊型肝炎病毒中和抗体的ORF2编码蛋白短片段被引量：1
- 2007年
- 目的:比较戊型肝炎病毒(HEV)第4基因型ORF2编码蛋白片段pN472-C617(aa472～617)和pN477-C613(aa477～613)的免疫原性,找到能诱生HEV中和抗体的ORF2编码蛋白的更短片段。方法:表达和纯化pN472-C617和pN477-C613,分别免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA检测免疫血清的抗体效价,并以基于PCR的体外中和试验检测免疫血清的中和活性。结果:pN472-C617和pN477-C613可在大肠杆菌高效可溶性表达,纯化后的重组蛋白能在小鼠体内诱导出高效价的抗体。基于PCR的体外中和试验显示pN472-C617免疫血清可有效中和HEV,阻断其在敏感细胞表面的吸附和细胞内复制;而两端仅比pN472-C617各短5个氨基酸的pN477-C613的免疫血清不具有中和HEV的活性。结论:重组蛋白pN472-C617具有良好的抗原性和诱生中和抗体的能力,是目前文献报道中含有HEV中和抗原表位的最短ORF2编码蛋白片段,可作为重组亚单位候选疫苗用于HEV疫苗的开发。
- 张红梅孟继鸿戴星单祥年
- 关键词：戊型肝炎病毒中和抗体
- 戊型肝炎病毒通用性PCR引物的设计及其基因分型的研究被引量：9
- 2009年
- 针对戊型肝炎病毒(HEV)基因分型尚无统一标准的现状,本研究通过分析GenBank中现有的82株HEV基因组全序列,设计一组HEV通用性PCR引物(HEVuPrimer)用于扩增不同基因型HEV可测序长片段,分别基于全基因序列、HEVuPrimer扩增序列和较常用的MXJ引物扩增序列对82株HEV进行基因分型,再以HEVuPrimer扩增1～4型HEV参考株和HEVIg M抗体阳性的临床标本,进行HEV基因分型的研究。研究结果表明HE-VuPrimer扩增区段与全基因序列对82株HEV的基因分型结果完全一致;HEVuPrimer与HEV序列的匹配程度明显高于MXJ引物,且HEVuPrimer区段的基因分型结果较MXJ区段的更为准确。HEVuPrimer可同时扩增出不同基因型HEV基因片段。124份临床标本中,60份测出特异性HEV RNA,阳性率为48.4%,基因分型结果均为4型HEV,但分属于4个不同的基因亚型,核苷酸同源性为80.0%～99.9%,其中有6例近期分离的HEV毒株形成一新的基因亚型。因此,基于HEVuPrimer扩增区段的HEV基因分型方法具有较高的可靠性和可信度,为建立统一、可行的HEV基因分型标准提供了新的思路。
- 李峰孟继鸿董晨戴星杨义贵周镇先
- 关键词：戊型肝炎病毒基因分型
- 双抗原夹心ELISA检测抗HCV总抗体被引量：12
- 2008年
- 目的建立检测抗HCV抗体的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。方法将与His或GST融合表达的HCV基因工程抗原,分别用作ELISA的包被和酶标记抗原,建立用于抗HCV总抗体检测的双抗原夹心ELISA。用此方法检测1 968份临床血清标本,并以间接ELISA(北京万泰试剂)与之对照;此外,用套式RT-PCR检测部分血清的HCV RNA。结果有1 761份血清2种ELISA检测均为阴性,有190份血清均为阳性,两种方法符合率为99.1%;有17份血清的检测结果不相符,间接法阳性而本法阴性的14份,其中HCV RT-PCR阳性1份;本法阳性而间接ELISA阴性的3份,其中RT-PCR阳性2份。双抗原夹心ELISA与间接ELISA的敏感性分别为99.48%、98.96%,特异性分别为99.94%、99.27%。结论新研制的检测抗HCV总抗体的双抗原夹心ELISA具有较高的敏感性和特异性,值得作进一步的深入研究。
- 韩振格孟继鸿周镇先
- 关键词：丙型肝炎病毒抗体检测
