广东省人民医院科研基金(Y200532)
- 作品数：5 被引量：30H指数：3
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- 相关机构：中山大学广东省人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 3T3-L1脂肪细胞诱导分化与肿瘤抑制因子PTEN的表达研究被引量：5
- 2007年
- 目的优化3T3-L1脂肪细胞分化条件,研究信号因子PTEN在分化过程中的表达,以了解PTEN是否通过表达量来调节正常脂肪细胞形成,为探索PTEN的药物靶标作用奠定基础。方法DMEM高糖培养基培养3T3-L1脂肪前体细胞,地塞米松、3-异丁基1-甲基黄磦呤(IBMX)和胰岛素按2种组合方案分别诱导3T3-L1细胞分化,油红O染色鉴定脂肪细胞,蛋白裂解液提取细胞总蛋白,SDS-PAGE和Western blotting鉴定分化过程中PTEN的表达量,用生物信息学进行小鼠和人类PTEN的同源性分析。结果1μmol/L地塞米松、0.5μmol/LIBMX和5μg/ml胰岛素诱导48h后,再用含5μg/ml胰岛素的DMEM高糖营养液培养48h的方案对3T3-L1细胞诱导分化效果较好,脂肪细胞分化率高且均一,在分化第10天可见90%以上细胞分化为脂肪细胞。PTEN在脂肪细胞分化过程中表达量在第0、4th、6th、9th和第12天时不一致,在12天时明显下降,显著低于诱导前。同源性比对分析表明,小鼠和人类的PTEN mRNA编码序列匹配率为96%,而氨基酸序列匹配率为100%。结论内源性PTEN在小鼠3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化为脂肪细胞的时相过程中表达量有所变化,提示PTEN可能在生理条件下即可发挥提高胰岛素敏感性和促进脂肪细胞形成的作用。
- 李运雄孟锦绣蔡雪珍李东风荣卡彬蒋文玲张仁礼余细勇
- 关键词：PTEN脂肪细胞IBMX
- 广州管圆线虫抗原IF的体外表达系统的建立和分析被引量：5
- 2006年
- 【目的】建立广州管圆线虫特异性抗原中间纤维(IF)基因的体外表达系统,研究IF蛋白的结构和功能关系。【方法】将IF基因亚克隆入原核表达载体pET-30a-c(+)并在原核中诱导表达,Westernblot鉴定融合表达产物的免疫特性,用组氨酸(His)亲合层析柱分离纯化表达产物,鉴定表达体系效率。生物信息学分析目的蛋白结构和功能关系。【结果】抗原基因IF在原核中与6个组氨酸进行了融合表达,以可溶性表达为主,并能在该系统中大量、稳定表达,其相对分子质量Mr=48×103,该表达产物具有较好的抗原性,可被大鼠感染血清识别,抗原IF具有典型的中间纤维家族特征,该蛋白具有多个抗原表位存在。【结论】建立了IF的有效原核表达系统,IF抗原蛋白的结构决定了它的属性和功能。
- 孟锦绣何蔼程梅李素丽甘明徐贵峰李卓雅詹希美
- 关键词：广州管圆线虫抗原中间纤维原核表达
- 广州管圆线虫GAMMA-BBH基因的克隆表达鉴定和荧光定量检测被引量：2
- 2007年
- 目的亚克隆和表达广州管圆线虫γ-丁基甜菜碱羟化酶(γ-butyrobetaine hydroxylase,GAMMA-BBH)基因,对该蛋白属性进行鉴定,定量检测不同虫龄该目的基因表达量。方法PCR扩增GAMMA-BBH cDNA基因,产物经NcoⅠ和HindⅢ限制性内切酶酶切后连接至原核表达载体重组为pET-BBH,在BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot和酶活性测定鉴定表达产物,用荧光定量PCR方法检测广州管圆线虫不同虫龄GAMMA-BBH的表达量。结果PCR和核苷酸序列测定结果表明pET-BBH构建正确并能在IPTG诱导下表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表明表达产物分子量与预期分子量(Mr=48500)一致,酶学测定显示表达产物有GAMMA-BBH的酶活性,荧光定量PCR方法检测结果显示GAMMA-BBH在虫体不同虫龄期表达量不一致。结论目的基因能正确编码并表达具有酶活性的GAMMA-BBH,该酶的表达量与虫龄和寄生部位可能有关。
- 孟锦绣何蔼程梅甘明徐贵峰李卓雅余细勇蒋文玲李运雄詹希美
- 关键词：广州管圆线虫克隆
- 广州管圆线虫中间纤维蛋白的体外表达和初步免疫学鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的对广州管圆线虫中间纤维蛋白(intermediate filament,IF)基因进行体外表达、纯化、鉴定和抗原性质分析。方法将IF基因的重组表达载体pET-IF在大肠杆菌中表达,表达产物经组氨酸亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定蛋白质分子量,质谱分析氨基酸序列,生物信息学分析蛋白质结构,Western blot鉴定与人、大鼠和小鼠感染血清及人IgG4亚类的抗原反应性。结果SDS-PAGE、质谱分析和Western blot证明本研究获得的纯化蛋白为预期蛋白IF,其分子量为47.8kDa,肽指纹图谱与秀丽杆线虫IF蛋白家族具有高度同源性,并具有典型的IF结构特征,且IF结构的尾部存在抗原决定簇,融合蛋白IF能与大鼠感染血清、小鼠感染血清和患者血清IgG结合,也能与患者IgG4亚类结合。结论体外获得了抗原IF纯化蛋白,研究显示其可用于人类外周血检测并有助于检测现症感染和疗效考核。
- 孟锦绣何蔼程梅徐贵峰李卓雅余细勇蒋文玲李运雄詹希美
- 关键词：广州管圆线虫抗原基因
- 广州市褐云玛瑙螺感染广州管圆线虫的调查分析被引量：18
- 2007年
- 目的对广州市褐云玛瑙螺(Achatina fulica)感染广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)第Ⅲ期幼虫的情况进行调查和比较,填补广州市广州管圆线虫病的流行病学资料。方法分别于2000年7月和2004年7月对广州市天河区、海珠区和越秀区褐云玛瑙螺进行采样收集,消化法分离第Ⅲ期幼虫,计算感染率和感染度并与过去及国内其它地区进行比较,用灌胃法构建大鼠和小鼠动物模型,检测脑部和心肺晚期虫体。结果广州市褐云玛瑙螺广州管圆线虫感染率,2000年为44.2%(57/129),感染度401条/螺,而2004年为27.3%(33/121),感染度为72条/螺,2次感染率差异有显著性(χ2=7.5,P<0.01),各区褐云玛瑙螺的感染率差异较大,最高达65.9%。褐云玛瑙螺的感染率与其螺重呈正比。用分离的第Ⅲ期幼虫构建了小鼠和大鼠动物模型,分别从脑部和心肺检出较晚期虫体。结论广州市褐云玛瑙螺的广州管圆线虫感染率和感染度2004年较2000年有明显下降,2004年感染率低于曾发生过广州管圆线虫病暴发流行的地区;小鼠适于构建广州管圆线虫第Ⅳ、Ⅴ期模型,大鼠适于构建第Ⅴ期和成虫模型。
- 孟锦绣詹希美程梅梁瑜李素丽甘明徐贵峰李卓雅余细勇蒋文玲李运雄何蔼
- 关键词：广州管圆线虫褐云玛瑙螺流行病学
