山西省自然科学基金(20011061)
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
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- 用醋酸锂法转化巴氏毕赤酵母表达人核心蛋白聚糖被引量：1
- 2010年
- 目的用醋酸锂法转化巴氏毕赤酵母表达人核心蛋白聚糖(DCN)。方法将重组体pPic9k-DCN经BglⅡ酶切线性化,通过醋酸锂法转入酵母宿主HIS-/GS115细胞中,然后在含不同浓度G418的YPD平板上筛选阳性克隆;用含1%甲醇的BMMY培养基诱导表达该蛋白;并观察表达产物对HepG2细胞生长的影响。结果①通过醋酸锂法将酶切线性化的重组载体成功转入酵母菌HIS-/GS115,并用聚合酶链反应(PCR)法进行了鉴定;②用含1%甲醇的BMMY培养基诱导表达出目的蛋白;③用表达产物与HepG2细胞共同孵育,发现其对HepG2细胞增生有抑制作用。结论本实验成功地用真核表达系统表达了人核心蛋白聚糖,并观察到其对HepG2细胞生长有抑制作用。
- 郝小夏
- 关键词：蛋白聚糖类毕赤酵母
- 核心蛋白聚糖在毕赤酵母中的表达及活性检测
- 2008年
- 目的利用巴氏毕赤酵母真核表达系统表达人核心蛋白聚糖DCN,并检测其抗肿瘤活性。方法利用DCN的特异引物,通过RT-PCR扩增人DCN基因,与载体pPIC9K连接,将序列正确的重组体扩增后,酶切线性化,通过醋酸锂法转化酵母菌HIS-/GS115,G418筛选阳性克隆,用含1%甲醇的BMMY培养基诱导表达,并观察纯化的表达产物对人肝母细胞瘤细胞(HepG2)增殖的影响。结果表达产物作用于HepG2细胞后,与对照组相比,细胞增殖数量及速度均显著降低。随着表达产物浓度的升高及作用时间的延长,抑制作用也增强,并表现出浓度和时间依赖性关系。细胞形态学观察表明DCN对HepG2生长有明显抑制作用。结论已成功构建了pPIC9K-DCN真核表达载体,并表达了有活性的蛋白产物。
- 郝小夏王桂琴王艳红李凌霞郭松佳兰晶
- 关键词：核心蛋白聚糖巴氏毕赤酵母活性
- 核心蛋白聚糖抑制肿瘤生长的研究进展被引量：7
- 2005年
- 王艳红郝小夏王桂琴
- 关键词：核心蛋白聚糖抑制肿瘤生长DECORIN酪氨酸激酶受体蛋白多糖器官纤维化
- 核心蛋白聚糖和细胞因子的相互作用
- 2006年
- 郝小夏王桂琴肖青
- 关键词：核心蛋白聚糖细胞因子相互作用(TNF)-ΑDECORIN饰胶蛋白聚糖
- Decorin对肝癌细胞株凋亡作用的研究被引量：11
- 2002年
- 目的 :探讨decorin对肝癌细胞株增殖及细胞凋亡的作用。方法 :用不同浓度的decorin和正常肝细胞株 (L 0 2细胞 )、肝癌细胞株 (SMMC 772 1、MM4 5 )共同孵育一定时间后 ,观察细胞的存活情况、形态学改变 ,用流式细胞仪分析DNA的分布。结果 :Decorin在体外能抑制肝癌细胞的增殖 ,诱导肝癌细胞出现典型的凋亡细胞特征 :细胞核浓缩、细胞膜皱摺、凋亡小体形成 ,而且其诱导凋亡作用呈剂量效应。结论 :Decorin作为一种生物制剂可诱导肝癌细胞凋亡。
- 赵素莲王桂琴田树华
- 关键词：多糖类细胞学肝肿瘤
- 核心蛋白聚糖原核表达体系的构建被引量：9
- 2006年
- 目的通过克隆核心蛋白聚糖(decorin,DCN)基因,构建原核表达体系并表达DCN蛋白。方法利用特异引物,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增编码DCN分子的外显子序列,与表达载体pET-21a(+)重组,构建原核表达体系pET-21a(+)-DCN的重组质粒。经双酶切、测序鉴定基因序列,将重组质粒转入E.coliBL21(DE3)中,用IPTG37℃诱导获得DCN融合蛋白。结果克隆了hDCN基因,成功构建了pET-21a(+)-DCN重组质粒,获得了稳定的pET-21a(+)-DCN原核表达体系,并得到了纯化的融合蛋白。结论建立了pET-21a(+)-DCN稳定的原核表达体系,表达并纯化了DCN。
- 王艳红王桂琴郝小夏
- 关键词：蛋白聚糖类质粒原核表达载体
