内蒙古自治区自然科学基金(2010MS0514)
- 作品数：6 被引量：21H指数：3
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- 病原菌毒力因子诱导宿主细胞凋亡机理的研究进展被引量：3
- 2013年
- 细胞凋亡可能在病理条件下发生,其中细菌感染在引起细胞凋亡方面扮演着非常重要的角色。致病菌可通过激活某些促凋亡因子或者抑制某些抗凋亡因子的活性,改变宿主细胞信号通路进而诱发细胞凋亡。近些年,研究者对细菌诱导宿主细胞凋亡的机理进行了大量研究发现,细胞凋亡主要与致病菌的毒力因子有关。结合当前的研究成果,对病原菌毒力因子诱导机体细胞凋亡的作用机理进行归纳总结,并对病原菌毒力因子诱导宿主细胞凋亡机理在癌症及某些抗药性细菌性疾病方面治疗的应用前景进行探讨与展望。
- 胡庆亮李凌娟王潇
- 关键词：细菌毒力因子宿主细胞凋亡
- 金黄色葡萄球菌诱导牛原代乳腺上皮细胞的凋亡被引量：7
- 2013年
- 【目的】观察金黄色葡萄球菌能否诱导牛原代乳腺上皮细胞发生凋亡。【方法】先以新鲜牛奶为材料分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定,然后用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的形态学变化;用流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)定量检测金黄色葡萄球菌感染对牛乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR检测细胞凋亡通路中关键蛋白caspase 3和caspase 8的变化情况。【结果】从乳汁中分离的细胞经原代培养后,细胞呈典型的铺路石状,细胞表层可产生大小不等的乳滴,RT-PCR法扩增出乳腺上皮细胞的骨架蛋白8特异性条带;免疫荧光细胞染色法结果显示分离培养的牛乳腺上皮细胞表达角蛋白8;金黄色葡萄球菌感染牛乳腺上皮细胞3 h后,可诱导牛乳腺上皮细胞发生凋亡,表现为细胞核皱缩,染色质边缘化和细胞浆内空泡增多等典型凋亡特征;Annexin V/PI双染法检测后发现,与对照组相比,感染组细胞凋亡率明显升高,差异极显著(P﹤0.01);与对照组相比,感染组细胞caspase3及caspase 8表达量明显增高。【结论】金黄色葡萄球菌可以诱导牛原代乳腺上皮细胞凋亡,具有细胞凋亡的典型形态特征和生化特性,凋亡通路可能涉及caspase 3和caspase 8参与的外源性凋亡途径。
- 崔新洁胡庆亮李奕平陶琳修磊刘秉春陈媛王潇
- 关键词：金黄色葡萄球菌牛乳腺上皮细胞细胞凋亡
- 牛奶中乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定被引量：6
- 2013年
- 旨在建立简便、经济、纯净的牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,并对所培养细胞进行鉴定。以新鲜牛奶为材料,离心收集细胞进行原代培养并传代,通过测定生长曲线、乳腺上皮细胞骨架蛋白-角蛋白8和18、β-酪蛋白、核型等对所培养细胞进行鉴定,以确定其为乳腺上皮细胞。离心收集到的细胞原代培养3 d后形成多个单克隆,细胞呈典型的铺路石状,同时伴随少量的吞噬细胞,继续培养至单克隆汇合时,细胞表层产生大小不等的乳滴,吞噬细胞大多转移到乳滴中,传代后,得到纯净的乳腺上皮细胞,吞噬细胞随传代而消失;细胞生长曲线呈"S"型,RT-PCR法扩增到了乳腺上皮细胞的骨架蛋白8、18以及β-酪蛋白,细胞免疫组化检测到了细胞角蛋白8,核型为29对端着丝粒常染色体,1对近端着丝粒性染色体。通过以上试验证明,乳汁分离法可以培养纯净的、具有正常分裂增生能力的牛乳腺上皮细胞,建立了乳腺上皮细胞的体外培养模型。
- 崔新洁王婷刘秉春陶林王潇
- 关键词：乳汁牛乳腺上皮细胞细胞骨架蛋白泌乳
- 金黄色葡萄球菌黏附素及其靶位疫苗的研究进展被引量：2
- 2013年
- 金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳腺炎的主要病原体,因其具有细胞内定殖和对抗生素极易产生耐药性的特点,使得用抗生素治疗的效果越来越差,为此疫苗防治成为首选。黏附素在金黄色葡萄球菌致病过程中起着至关重要的作用,在金黄色葡萄球菌感染的早期,黏附素是最重要的致病因子,只有当金黄色葡萄球菌黏附到宿主细胞上,毒素和荚膜才能开始表达。因此阻断金黄色葡萄球菌感染的初始阶段,特别是阻止细菌黏附到细胞和定殖在黏膜表面,将是预防和治疗奶牛乳腺炎的最有效途径。因此近些年研究者致力于黏附素的结构及功能的研究,试图以黏附素为靶点设计金黄色葡萄球菌疫苗。本研究对近几年黏附素的种类和作用,以及其相关疫苗的研究进行了综述。
- 李凌娟胡庆亮王潇
- 关键词：金黄色葡萄球菌黏附素乳腺炎
- 核苷酸结合寡聚化结构域NOD样受体(NLRs)研究进展被引量：3
- 2013年
- 先天免疫系统是防御微生物的第一道防线。最近几年,人们发现一种新的蛋白家族——核苷酸结合寡聚化结构域NOD样受体(NLRs),可以识别、抵御微生物病原体,在动物和植物体内的先天免疫中起重要作用。NLR蛋白激活后导致NF-κB,MAPK或半胱氨酸天冬氨酸酶的激活,从而介导炎症反应。对NLR家族及与之相关的炎症性疾病进行论述,并对NLR家族在炎症性疾病治疗的应用前景作展望。
- 李奕平王潇
- 关键词：先天免疫NLRSNOD2炎症疾病
- 牛白细胞介素-17真核表达载体的构建及在牛乳腺上皮细胞中的表达
- 2014年
- 【目的】在体外分离培养牛乳腺上皮原代细胞,并构建牛白细胞介素-17(bIL-17)基因真核表达质粒,观察重组质粒在牛乳腺上皮细胞的表达.【方法】提取牛脾脏细胞总RNA,通过RT-PCR扩增bIL-17,将bIL-17连入pMD19-T进行测序,测序成功后将bIL-17插入含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-N3上,构建真核表达质粒pEGFP-N3-bIL-17.用脂质体法将pEGFP-N3-bIL-17质粒转染于牛乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达,RT-PCR检测bIL-17基因在细胞内的转录,定量ELISA检测bIL-17蛋白在细胞内的表达情况.【结果和结论】成功构建具有绿色荧光和新霉素抗性的双选择标记的牛白细胞介素-17真核表达载体,并可在牛乳腺上皮细胞成功表达.
- 王婷崔新洁刘秉春陶琳胡庆亮修磊王潇
- 关键词：牛乳腺上皮细胞转染
