国家自然科学基金(30700398)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：中山大学附属第一医院中山大学暨南大学更多>>
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- 上皮型钙黏蛋白对小鼠胚胎干细胞向肝细胞分化的增强调控作用被引量：1
- 2012年
- 目的观察上皮型钙黏蛋白（E-cad）对小鼠胚胎干细胞（ESC）在体外向肝细胞分化的增强调控作用。方法将E-cad转染入BALB／c小鼠ESC使其稳定表达，再利用肝细胞生长因子（HGF）等诱导其向肝细胞分化。然后用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝细胞标记基因ALB、TAT、Cyp7a1的表达，用RIA法检测培养液ALB和尿素合成情况，显微镜观察分化细胞数量和黏附状态。结果（1）普通ESC在拟胚体（EB）形成后表达E-cad最强，其后表达降低至17d不再表达，而E-cad-ESC则稳定表达E-cad；（2）肝细胞标记基因ALB、TAT和Cyp7a1在E-cad—ESC组表达要早于或强于普通ESC组，ALB和尿素合成方面，E-cad-ESC组早于普通ESC组[普通ESC组，ALB最早出现于第11天，浓度为（0．20±0．03）mg／L，在17d达到最高为（3．71±0．45）mg／L；尿素最早出现于第12天，浓度为（8．01±1．21）μmol／L，在17d达到最高为（45．01±8．01）μmol／L。E-cad—ESC组，ALB最早出现于第9天，浓度为（0．19±0．03）mg／L，在17d达到最高为（5．52±0．82）mg／L；尿素最早出现于第10天，浓度为（5．90±1．21）μmol／L，在17d达到最高为（56．93±9．03）μmol／L]，差异有统计学意义；（3）普通ESC在分化后期表现为松散的细胞群落，分化细胞数量稀少，E—cad—ESC分化细胞数量明显增多，细胞黏附能力增强并呈紧密的多层生长。结论E—cad可增强ESC向肝细胞的分化作用，表现为分化细胞数量增多并呈多层生长，ALB及尿素合成能力增强，有望成为一种在ESC向肝脏方向分化研究中的重要调控因子。
- 胡安斌商昌珍闵军蔡继业何晓顺
- 关键词：胚胎干细胞上皮型钙黏蛋白细胞分化肝细胞
- 肝移植术后激素七天撤离方案的临床疗效评价被引量：2
- 2008年
- 目的评价肝移植术后激素7d撤离方案的临床有效性及安全性。方法将2005年10月至2007年10月收治的76例供受者血型相同的首次肝移植患者动态随机法分为两组：术后7d激素撤离组（7d组，40例）和术后3个月激素撤离组（3个月组，36例），两组均采用以他克莫司（FK506）为基础的免疫抑制方案。7d组激素用法：术中静脉滴注1000mg甲泼尼龙，术后按500、240、200、160、80．40和20mg依次递减，7d后停用；3个月组激素用法：按7d组方案静脉滴注甲泼尼龙7d后，改用甲泼尼龙口服，每隔3d依次按48、40、32、24、16、8和4mg递减18d，然后4mg口服至术后3个月。随访6个月并评价术后急性排斥反应发生率和不良反应发生率。结果共有69例完成全部随访，7例患者因死亡和严重细菌感染等原因于相应时间终止实验。两组患者在术后急性排斥反应、高脂血症、高血压发生率方面的差异均无统计学意义（P〉0．05）；7d组术后糖尿病的发生率（17．5％比38．9％,X^2=4．335，P=0．047）明显低于3个月组。结论供受者血型相同的肝移植采用以FK506为基础的免疫抑制方案时，术后7d激素撤离是安全有效的，不增加急性排斥反应发生率，并可以明显降低术后糖尿病发生率。
- 胡安斌何晓顺吴志鹏朱晓峰马毅王东平王国栋邰强鞠卫强巫林伟黄洁夫
- 关键词：肝移植有效性安全性
- 半成熟树突状细胞在胚胎干细胞源性肝细胞移植中诱导耐受的研究被引量：2
- 2012年
- 目的在小鼠胚胎干细胞（ESC）源性肝细胞移植中，应用半成熟树突状细胞（smDC）诱导免疫耐受。方法绿色荧光蛋白（GFP）标记的129小鼠ESC按前期方法向肝细胞诱导分化，129小鼠smDC亦按前期方法由骨髓单核细胞诱导获得。smDC注入BALB／C小鼠3d后，再将ESC分化的肝细胞移植人BALB／C小鼠肝被膜下。检测肝转氨酶、外周血白细胞介素-2（IL）-2和IL-10水平变化，观察移植细胞生长及淋巴细胞浸润情况。结果移植后7d，smDC组肝功能指标丙氨酸转氨酶（ALT）为212．58U／L，较对照组512．27U／L明显改善（P〈0．05），7d和14d外周血IL-10水平较对照组明显升高，而IL-2水平较对照组明显降低（P〈0．05）。移植细胞存活率在14、21dsmDC组较对照组明显增高，CD4＋T细胞浸润较对照组明显减轻。结论在ESC源性肝细胞异基因移植中，smDC预输注可诱导部分免疫耐受，有望作为一种良好的移植耐受原应用于ESC分化细胞移植研究中。
- 胡安斌何晓顺付必莽商昌珍闵军蔡继业
- 关键词：树突状细胞胚胎干细胞肝细胞移植移植耐受
- 上皮型钙粘蛋白在小鼠胚胎干细胞体外分化中动态表达及与细胞黏附状态关系被引量：1
- 2009年
- 背景:体内胚胎期,上皮型钙粘蛋白对肝脏组织的发育起到决定作用,探讨其在胚胎干细胞分化中的动态表达对于肝脏组织的体外发育可行性具有重要意义。目的:观察上皮型钙粘蛋白在小鼠胚胎干细胞体外分化过程中的动态表达,及其与细胞间黏附状态的关系。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-12/2008-12在中山大学附属第一医院外科实验室完成。材料:BALB/c系小鼠胚胎干细胞由中山大学眼科中心黄冰教授建系和保存。清洁级BALB/c系孕13d小鼠20只,由中山大学实验动物中心提供。方法:BALB/c系小鼠胚胎干细胞克隆经胰酶消化后,利用含胎牛血清、2-巯基乙醇、HEPES、青霉素、链霉素的DMEM培养基悬浮培养,使其自然发育5d形成拟胚体,第6天转至培养板使其贴壁生长。取BALB/c系孕13d小鼠,取其胎鼠肝脏组织制备胎肝细胞及冰冻切片,作为对照组。主要观察指标:按胚胎干细胞初分化、拟胚体形成、细胞分化群落形成等阶段,于细胞分化第1,5,9,13,17天利用RT-PCR和免疫细胞化学法检测上皮型钙粘蛋白的表达,观察其表达水平与细胞黏附状态的关系。结果:RT-PCR检测结果显示,在胚胎干细胞自然分化系统中,上皮型钙粘蛋白mRNA于分化第1天未表达,在第5天拟胚体形成后表达最强,其后表达能力逐渐降低,至17d时不再表达,作为对照的BALB/c系小鼠胎肝细胞表达较强的上皮型钙粘蛋白mRNA。免疫细胞化学检测结果亦体现相同规律。胚胎干细胞在形态学上由单细胞发育为致密的包含3胚层结构的拟胚体,再继续分化为松散的细胞群落。结论:上皮型钙粘蛋白在胚胎干细胞体外培养系统中的表达水平与分化细胞间黏附状态变化呈一定的相关性,其在体外环境中丧失表达可能是分化细胞不能组织化的一个重要原因。
- 胡安斌何晓顺黄冰蔡继业
- 关键词：胚胎干细胞上皮型钙粘蛋白细胞分化细胞黏附
- 心脏死亡器官捐赠应用于腹部多器官移植二例被引量：2
- 2012年
- 目的探讨心脏死亡器官捐赠（DCD）应用于腹部多器官移植的可行性及疗效。方法2例乙型肝炎肝硬化、肝癌合并2型糖尿病患者接受保留自身胰腺的多器官（肝、胰和十二指肠）移植，供者为符合“中国心脏死亡器官捐献分类标准”中的中国三类（C-Ⅲ类）标准的2例男性捐献者。采取多器官联合切取法完整切取供者的肝脏、胰腺、十二指肠和部分空肠，利用供者的髂外、髂内动脉将供者的腹腔干和肠系膜上动脉成型为一个出口，与受者的腹主动脉行端侧吻合。受者的胰腺不切除，其门静脉与移植物的门静脉后壁行端侧吻合，供者的十二指肠降部与受者的上段空肠行侧侧吻合。结果2例的丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶及胆红素总量等肝功能指标在术后2周达正常水平；术后7d血糖恢复正常；术后4d血淀粉酶和脂肪酶恢复正常；术后1～2周空腹血C-肽和胰岛素达正常范围。1例术后出现肠吻合口瘘，经穿刺引流，4周后痊愈。2例受者分别在术后8周和5周康复，肝功能及胰腺功能正常，未再使用胰岛素。结论符合C-Ⅲ类DCD供者的器官可用于腹部多器官移植，术后移植物功能良好。
- 胡安斌何晓顺欧阳杰李强朱晓峰
- 关键词：心脏死亡供者肝硬化肝移植胰腺移植
- E-cadherin基因稳定转染小鼠胚胎干细胞及其对分化细胞黏附能力的影响被引量：3
- 2008年
- 目的转染上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）基因入小鼠胚胎干（Es）细胞，观察其对分化细胞间黏附能力变化的影响。方法构建E-cadherin的真核表达载体pEGFP-E-cadherin，转染小鼠ES细胞并进行体外分化。利用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）等检测E-cadherin在分化系统中的动态表达，同时观察分化细胞问黏附能力的变化情况。结果基因转染的ES细胞分化后第1～17天稳定表达E-cadherin，而普通ES细胞分化后则表达逐渐降低。稳定表达E-cadherin的分化细胞问黏附能力明显增强并在19d时仍能保持致密的细胞连接和多层生长状态，普通ES细胞则由拟胚体（EB）结构逐渐分化为松散的细胞群落。结论稳定表达E—cadherin的ES细胞分化后，细胞间黏附能力明显增强并保持多层细胞生长状态，这对于将ES细胞分化研究提升到组织水平具有积极的意义。
- 胡安斌何晓顺黄冰蔡继业谈雅莉
- 关键词：胚胎干细胞E-CADHERIN细胞黏附
