四川省科技支撑计划(2013NZ0016)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：徐志文朱玲方和俊李萍周远成更多>>
- 相关机构：四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室更多>>
- 发文基金：四川省科技支撑计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 伪狂犬病毒表达载体的研究进展被引量：4
- 2016年
- 随着生物工程技术的逐步发展和完善,利用伪狂犬病毒作为载体的相关研究也取得了一定突破,为后续的伪狂犬基因工程疫苗研制奠定了基础。文中以缺失处理相关基因的伪狂犬病毒作为载体,与构建的携带外源基因的质粒在细胞内同源重组的研究现状进行了综述。
- 赵军黄剑波朱玲徐志文
- 关键词：伪狂犬病毒
- 一例猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及综合防治措施被引量：1
- 2015年
- 无菌采集疑似猪伪狂犬病病猪脑组织,进行病毒的分离鉴定。经PCR检测为阳性的病料接种PK-15细胞进行病毒分离,将所分病毒暂命名为SC株。蚀斑实验测定病毒滴度,并采用PCR和琼扩实验对其进行进一步鉴定。结果:PRV阳性病料接种PK-15细胞,传至第5代后产生稳定细胞病变,主要表现为细胞变圆、变亮、聚堆且可见典型的空斑,而对照组细胞贴壁生长良好;基于PRV gE基因的PCR检测,扩增产物为378 bp,与预期目的条带一致;用病毒蚀斑技术测定该分离株的滴度为2.65×104 PFU/mL;琼扩实验显示病毒原液至32倍稀释后均能与PRV阳性血清形成可见沉淀线。以上结果均表明所送检病猪为PRV阳性,据此为猪场提出综合防治措施。
- 杨凡徐志文李萍方和俊郭博周远成
- 关键词：猪伪狂犬病病毒
- 猪伪狂犬病毒Fa株侵染对PK-15细胞microRNAs表达谱的影响
- 2016年
- 【目的】分析猪伪狂犬病毒Fa株(PRV-Fa)侵染对猪肾传代细胞PK-15 microRNAs(miRNAs)表达谱的影响。【方法】利用Illumina高通量测序技术,鉴定感染和非感染PRV-Fa的PK-15细胞的miRNAs;筛选并利用实时荧光定量RT-PCR(RT-q PCR)验证差异表达miRNAs;对差异miRNAs进行靶基因预测和Gene ontology(GO)分析。【结果】在感染和未感染PK-15细胞中分别检测到384个和405个miRNAs,其中感染PRV-Fa后差异表达的miRNAs共127个(60个上调,67个下调)。荧光定量结果显示差异miRNAs的表达趋势与高通量测序结果一致。GO分析显示,miRNAs广泛参与信号传导、细胞代谢、免疫反应、基因表达等生物学进程,其中miR-10b、miR-16、miR-18a、miR-19b、miR-20a、miR-145-5p、miR-146a、miR-181a、miR-499-5p等miRNAs与免疫相关。在靶基因调控网络图中,ssc-miR-30a-5p与ssc-miR-30d处于关键位置。研究鉴定出5个新的病毒编码miRNAs,其中PRV-miR-LLT2与PRV-miR-LLT4靶向PRV早期蛋白基因EPO。【结论】伪狂犬病毒Fa株感染对PK-15细胞编码miRNAs有显著影响。
- 刘鹏娟乔小改李萍黄剑波卓秀萍方和俊邓益超徐志文朱玲
- 关键词：猪伪狂犬病毒MICRORNASPK-15细胞
- 一例猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及综合防治措施被引量：2
- 2016年
- 无菌采集疑似猪伪狂犬病病猪脑组织，进行病毒的分离鉴定。经PCR检测为阳性的病料接种PK-15细胞进行病毒分离，将所分病毒暂命名为SC株。蚀斑实验测定病毒滴度，并采用PCR和琼扩实验对其进行进一步鉴定。结果：PRV阳性病料接种PK-15细胞，传至第5代后产生稳定细胞病变，主要表现为细胞变圆、变亮、聚堆且可见典型的空斑，而对照组细胞贴壁生长良好；基于PRVgE基因的PCR检测，扩增产物为378bp，与预期目的条带一致；用病毒蚀斑技术测定该分离株的滴度为2.65×104PFU／mL；琼扩实验显示病毒原液至32倍稀释后均能与PRV阳性血清形成可见沉淀线。以上结果均表明所送检病猪为PRV阳性，据此为猪场提出综合防治措施。
- 杨凡徐志文李萍方和俊郭博周远成
- 关键词：猪伪狂犬病病毒
- 伪狂犬病毒SL株gL基因的克隆、原核表达、抗体制备及亚细胞定位
- 2014年
- 通过PCR从伪狂犬病毒(PRV)SL株基因组中扩增出gL基因,将产物亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,测序验证后将重组质粒转化至E.coli Rosseta,进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白约33 000,同预期大小相符,通过Western blot检测可知重组蛋白具有较好的抗原性。使用Ni 2+-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化重组蛋白,纯化后的重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,经琼脂扩散试验测定,效价达1∶8。通过免疫荧光技术进行PRV gL亚细胞定位检测,结果显示最早可在感染后4h的细胞质中检测到特异性荧光,并随着PRV的复制gL表达增加。试验结果为进一步研究gL基因的功能和PRV的致病机理提供了重要依据。
- 乔小改年阳阳朱玲徐志文郭万柱周远成易悦
- 关键词：伪狂犬病毒原核表达抗体制备亚细胞定位
