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CHO细胞中VMAT_2的鉴定及应用: 2008年; 目的鉴定转染囊泡单胺转运体(vesicular monoamine transporter-2,VMAT2)基因在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)细胞中VMAT2的表达情况。方法采用细胞免疫荧光染色、RT-PCR、免疫电镜的方法,分别从形态学、分子生物学和微观亚细胞结构角度来确定VMAT2的表达。结果免疫荧光染色显示VMAT2-CHO表达明亮的绿色荧光;逆转录聚合酶链反应电泳显示VMAT2-CHO出现180 bp的阳性条带;VMAT2-CHO细胞中免疫胶体金颗粒分布在细胞核周膜性结构上。结论转染VMAT2基因的CHO细胞可以稳定且大量表达VMAT2,有望成为研究VMAT2功能与帕金森病关系的单一的细胞模型。; 王铭维刘力顾平崔冬生王彦永; 关键词：帕金森病转染仓鼠

利血平对转染VMAT_2基因的CHO细胞抵抗鱼藤酮及多巴胺毒性作用的研究: 2009年; 目的研究单胺囊泡转运蛋白-2(VMAT2)抑制剂利血平(RE)作用于转染VMAT2基因的中国仓鼠卵巢细胞(VMAT2-CHO)时,VMAT2-CHO对鱼藤酮(Rotenone)、多巴胺(DA)的毒性抵抗作用。方法采用MTT比色法检测RE与不同浓度Rotenone及DA共同作用下的VMAT2-CHO细胞存活率;采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果Rotenone对VMAT2-CHO细胞有毒性作用,随浓度增大,细胞存活率下降;Rotenone和DA对细胞有协同毒性作用。随DA浓度增大,VMAT2-CHO细胞产生的ROS增加;VMAT2抑制剂利血平增加DA的毒性,使同样浓度的DA诱发VMAT2-CHO细胞产生的ROS增加,存活率下降。结论RE使VMAT2功能抑制时DA在胞浆内聚集,触发DA内源性毒性,通过氧化应激系统而发挥毒性作用。DA内源性毒性可协同环境毒物Rotenone增加对细胞的毒性作用。; 王铭维马晓伟刘力顾平耿媛崔冬生; 关键词：利血平多巴胺鱼藤酮

鱼藤酮对大鼠中脑原代培养细胞的毒性: 2007年; 目的研究植物杀虫剂鱼藤酮(Rotenone)对大鼠中脑原代培养细胞的毒性作用。方法采用大鼠胚胎中脑原代细胞培养法,用0.01、0.10、1.00μmol/L鱼藤酮对体外培养中脑原代培养细胞染毒24h,通过免疫细胞化学的方法观察神经细胞的存活数及形态学改变。结果与对照(0μmol/L)组比较,0.10和1.00μmol/L鱼藤酮染毒组多巴胺神经元数目明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);1.00μmol/L鱼藤酮染毒组星型胶质细胞数目明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。随着鱼藤酮染毒浓度的升高,存活的多巴胺(DA)能神经元体积变小,突起减少、变短或断裂。结论多巴胺神经元对鱼藤酮的毒性作用更敏感。; 王铭维王彦永顾平崔冬生刘力马晓伟; 关键词：鱼藤酮中脑多巴胺能神经元神经毒性

转染VMAT_2基因的CHO细胞抵抗多巴胺毒性作用的研究被引量：2: 2007年; 目的：探讨囊泡单胺转运体（vesicular monamine transporter-2，VMAT2）对多巴胺（dopamine，DA）毒性的抵抗作用。方法：采用细胞免疫荧光染色法测定VMAT2基因在转染的CHO细胞（VMAT2-CHO）中的表达：MTF比色法检测不同浓度DA作用下的野生型CHO（WT-CHO）和VMAT2-CHO细胞存活率；应用ELISA法DA检测试剂盒测定细胞内DA的水平；采用活性氧检测试剂盒测定细胞内活性氧的水平。结果：VMAT2-CHO细胞内有较强的特异性荧光表达，主要定位在核周区域，胞浆中也有散在的荧光；0．25～0．4mmol／L DA作用72h，VMAT2-CHO细胞存活率显著高于WT-CHO细胞（P〈0．05）；0．4mmol／L DA作用于WT-CHO和VMAT2-CHO细胞24h，VMAT2-CHO细胞内DA为（199．33±15．155）ng／mi，显著高于WT-CHO细胞（141．4±8．784）ng／ml（P〈0．01）；而细胞内活性氧（ROS）水平则由（144．490±5．295）U／106 cells增加至WT-CHO细胞的（217．895±15．885）U／10^6cells（P〈0．01）。结论：转染VMAT2的CHO细胞对DA引起的毒性有显著的抵抗作用。; 王铭维顾平刘力王彦永崔冬生; 关键词：多巴胺中国仓鼠卵巢细胞

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河北省自然科学基金(C2006000828)