国家自然科学基金(81171606)
- 作品数：33 被引量：121H指数：6
- 相关作者：徐元宏黄颖沈继龙王刚王晓玮更多>>
- 相关机构：安徽医科大学第一附属医院安徽医科大学同济大学附属东方医院更多>>
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- 结核患者CD4＋ T淋巴细胞CFP-10蛋白刺激前后基因表达谱分析
- 2017年
- 结核病严重危害人类健康,目前全球每年新增活动性结核患者约1 040万,年死亡约140万,全球超过1/3的人口感染过结核分枝杆菌,同时随着合并HIV感染和多重耐药病例的增多,使得结核病的全球防治形势依旧严峻.培养滤液蛋白10（10-kDa culture filtrate protein, CFP-10）由结核分枝杆菌基因组差异区1（region of difference 1, RD1） Rv 3874编码产生,并且RD 1区只出现在致病结核分枝杆菌中,其他分枝杆菌和卡介苗（bacillus Calmette-Guerin, BCG） 不表达CFP-10,是结核病诊断的特异性蛋白抗原.CFP-10可诱发结核纯蛋白衍生物（purified protein derivative,PPD） 皮肤试验阳性患者外周血单个核细胞增殖并产生γ-干扰素（interferon γ,IFN-γ）[4].本研究基于全基因组表达谱芯片,检测CFP-10刺激结核患者外周血CD4＋ T淋巴细胞前后的基因表达谱的变化,就IFN-γ的释放进行探讨,为进一步研究结核发病机制提供分子生物学基础.
- 张焰王晓玮程筱雯徐东芳王东萍韦薇王庆徐元宏
- 关键词：CFP-10结核病诊断T淋巴细胞CD4+表达谱分析
- 肾透明细胞癌患者肿瘤组织中CD146mRNA的表达及意义被引量：1
- 2014年
- 目的探讨肾透明细胞癌(CCRCC)患者肿瘤组织中CD146 mRNA的表达及意义。方法用ELISA法定量检测CD146蛋白含量及Real-Time PCR技术检测102例CCRCC患者肿瘤组织中CD146 mRNA的表达,并以51例肾脏良性病变患者手术正常肾组织作为对照。结果发现存在转移的CCRCC患者,CD146蛋白浓度与对照组比较差异有统计学意义(F=52.1,P<0.01),CD146 mRNA的平均表达值(0.043 8±0.002 4)明显高于原位CCRCC患者(0.038 2±0.001 1,P=0.018)和对照组患者(0.034 4±0.001 0,P=0.001)。结论 CD146 mRNA表达上调与CCRCC的病理分级及淋巴结转移相关,有望成为评判CCRCC恶性程度、转移潜能及预后的一个新指标,为临床的干预性治疗提供可靠依据。
- 陈慧春徐元宏
- 关键词：MRNA肾透明细胞癌肿瘤组织
- 迟缓埃格特菌的MALDI-TOF MS和16S rRNA鉴定及生物学特征研究
- 2021年
- 目的鉴定两株迟缓埃格特菌临床分离株。方法选取两株厌氧血培养瓶培养出的分离菌株,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和革兰染色鉴定分离株,药敏实验采用琼脂稀释法。同时提取菌株基因组DNA,选用16S rRNA通用引物进行PCR扩增,回收和纯化产物后进行测序,与GeneBank数据库中已知菌序列进行比对,并构建系统发育树。结果 MALDI-TOF MS与16S rRNA基因检测均鉴定分离株是迟缓埃格特菌。药敏实验显示该菌对青霉素、哌拉西林-他唑巴坦、氨苄西林-舒巴坦、亚胺培南、美罗培南、甲硝唑和克林霉素敏感。结论 MALDI-TOF MS和16S rRNA检测可用于迟缓埃格特菌等罕见菌的鉴定。
- 李祥云王中新朱帮强潘亚萍周寅第胡媛媛宋国滨徐元宏
- 关键词：药敏实验
- 合肥地区2558例体检女性HPV感染及亚型分布情况被引量：13
- 2018年
- 目的分析合肥地区常规体检女性的人乳头瘤病毒(HPV)感染及亚型分布情况。方法在Luminex 200平台上,用透景27型HPV分型试剂盒对2 558例常规体检女性的宫颈脱落细胞进行HPV基因型检测,按照年龄段分类统计数据,计算感染的阳性率,同时统计其亚型分布特点。结果HPV阳性者397例,阳性率15. 52%。样本被分为4个年龄段组:21～30岁组、31～40岁组、41～50岁组、> 50岁组,阳性率分别为13. 85%、14. 01%、16. 39%和17. 16%;高危型HPV例数与低危型HPV例数的阳性率分别为13. 02%和6. 61%。χ2检验的结果显示,各年龄段之间,总阳性率(χ2=3. 624,P=0. 305)、高危型例数的阳性率(χ2=1. 975,P=0. 578)和低危型例数的阳性率(χ2=4. 507,P=0. 212)差异无统计学意义。各年龄段单一感染率均高于多重感染率。高危型中HPV检出率较高的型别是52 (9. 76%)、16(9. 16%)、58 (6. 77%)、53 (5. 98%),低危型中HPV检出率较高的型别是61 (6. 77%)、81 (5. 78%)、55(5. 38%)。结论合肥地区女性HPV感染的年龄段和型别分布均有不同于其他地区的基因型分布情况,建议本地区人群接种含52、16、58、53型的九价HPV疫苗。
- 吴丹丹彭丽朵乔金平徐元宏
- 关键词：人乳头瘤病毒HPV疫苗宫颈癌
- 万古霉素对hVISA生物膜构成的影响被引量：1
- 2019年
- 目的探讨万古霉素对异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)生物膜构成的影响,及其与万古霉素治疗hVISA失败率高的关系。方法将临床菌株hVISA(05307)和Mu3(ATCC 700698,hVISA的参考菌株)暴露于不同浓度的万古霉素。单独的肉汤和不含抗生素的细菌悬浮液分别作为阴性和阳性对照组。使用结晶紫(CV)染色测量hVISA的生物膜总量,并且使用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察生物膜的三维结构。细胞外基质(ECM)中的蛋白质组分,细胞外多糖黏附素(PIA)和细胞外DNA(eDNA)分别采用直接和间接的方法定量.结果与阳性对照组相比,只有1倍最低抑菌浓度(MIC)的万古霉素处理组增加了hVISA的生物膜总量。另外,各组提取的ECM中PC和蛋白质的表达没有明显区别。加入DNase I处理后,1×MIC万古霉素处理组的生物膜总量被显著抑制到与万古霉素未处理组相近的水平。结论1×MIC的万古霉素诱导的eDNA释放是万古霉素增强hVISA生物膜形成主要因素,这可能是万古霉素治疗hVISA感染失败率高的原因之一。
- 桑瑞瑞郜梦露夏金星沈继龙徐元宏
- 关键词：金黄色葡萄球菌生物膜万古霉素细胞外基质
- 日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶的重组表达及其在血吸虫生活史各阶段的表达分析
- 2015年
- 目的在大肠杆菌中原核表达、纯化日本血吸虫果糖二磷酸醛缩酶(rSjFBPA),观察其在血吸虫生活史各阶段的表达。方法以日本血吸虫成虫c DNA为模板扩增rSjFBPA基因,克隆至pET28a(+)质粒后,再转化入E.coli BL21。含重组质粒的菌株经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定重组蛋白rSjFBPA是否表达,用层析法纯化rSjFBPA并用SDS-PAGE鉴定其纯度。同时,用RT-PCR方法分析SjFBPA在血吸虫尾蚴、童虫、成虫和虫卵各阶段的表达情况。结果经PCR扩增出目的基因,含目的基因的TA克隆质粒经双酶切和测序鉴定,证明插入片段与预期目的基因序列相符。Western blotting结果显示,表达后的重组蛋白可与His-tag单克隆抗体发生特异性反应。经镍亲和层析法制备了纯化的重组SjFBPA蛋白,纯化重组蛋白浓度达4 mg/ml。RT-PCR结果显示,SjFBPA在日本血吸虫尾蚴、童虫、成虫和虫卵阶段均有表达。结论 SjFBPA基因被成功克隆和表达,其在日本血吸虫尾蚴、童虫、成虫和虫卵各阶段均有表达。
- 闫珂钟政荣徐云侠丁淑琴胡建国徐元宏罗庆礼沈继龙
- 关键词：日本血吸虫克隆纯化
- 肺炎克雷伯菌整合子携带情况及与毒力基因和耐药性的关系被引量：3
- 2021年
- 目的分析安徽医科大学第一附属医院临床分离肺炎克雷伯菌的耐药性,毒力基因、整合子携带情况,并重点比较分析整合子阳性和阴性菌株之间耐药性和毒力基因的差异性,探讨整合子在菌株耐药性以及整合毒力基因中的作用。方法收集临床分离保存的肺炎克雷伯菌72株,运用纸片扩散法和Vitek-2 compact仪器进行药物敏感性试验,聚合酶链式反应(PCR)技术扩增整合子基因(IntI1、IntI2、IntI3)、毒力基因(rmpA、aerobactin、alls、kfu、wcaG、magA、fimH、mrkD)。同时分析整合子阳性肺炎克雷伯菌和整合子阴性肺炎克雷伯菌之间毒力基因和耐药性的差异性。结果药敏试验结果表明72株肺炎克雷伯菌除对米诺还素、多黏菌素B、替加环素具有较高的敏感性外,对头孢菌素类、碳青霉烯类、喹诺酮类、氨基糖苷类抗菌药物耐药率均>30%,PCR技术检出整合子IntI1型共40株,未检出IntI2、IntI3型。毒力基因aerobactin、rmpA、wcaG、alls、kfu、fimH、mrkD、magA检出率分别为25.00%、44.44%、23.61%、19.44%、40.28%、98.61%、98.61%、12.50%。整合子阳性菌株和阴性菌株相比,对头孢菌素类,氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物具有较高的耐药性,且差异有统计学意义(P<0.05)。但是整合子阳性菌株和整合子阴性菌株毒力基因携带情况相比,除aerobactin及kfu基因具有统计学差异外,其他六种毒力基因在两者之间无统计学意义。结论医院肺炎克雷伯菌以携带整合子IntI1型为主,整合子阳性菌株对头孢菌素类,氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物耐药性更高,但对毒力基因的携带情况无差异。
- 宋国滨王刚黄颖吴文娟徐元宏
- 关键词：肺炎克雷伯菌整合子毒力基因耐药性
- 丙戊酸钠妊娠中期暴露对子代神经行为影响及其与肝脏功能相关性被引量：1
- 2014年
- 目的探讨丙戊酸钠(VPA)妊娠中期宫内暴露对子代肝脏损伤的影响与神经行为的相关性。方法取孕12.5d SD大鼠30只,随机分为低剂量组10只(腹腔注射VPA300 mg/kg),高剂量组10只(腹腔注射VPA 600 mg/kg);对照组10只(腹腔注射等量生理盐水)。分别对3组子代大鼠(低剂量组母鼠所产仔鼠编为VPA低剂量组,高剂量组母鼠所产仔鼠编为VPA高剂量组,对照组母鼠所产仔鼠编为对照组)。对各组进行神经行为学和肝脏功能等检查,同时进行相关性分析。结果 VPA高剂量组和VPA低剂量组的总蛋白和白蛋白的水平显著低于对照组,VPA高剂量组也显著低于VPA低剂量组(P<0.01),表明VPA妊娠中期宫内暴露可影响子代肝脏白蛋白的合成;VPA高剂量组和VPA低剂量组的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和血氨水平均显著高于对照组,VPA高剂量组又显著高于VPA低剂量组(P<0.01),表明VPA妊娠中期宫内暴露可导致子代的肝功能损害;VPA高剂量组和VPA低剂量组的血氨水平均明显高于对照组,VPA高剂量组也显著高于VPA低剂量组(P<0.01),表明VPA妊娠中期宫内暴露可导致子代的血氨显著增高;对子代大鼠的神经行为检测结果显示,VPA高剂量组和VPA低剂量组宫内暴露均导致子代的刻板动作发生的时间和次数较对照组显著增多(P<0.01)、Morris水迷宫中逃避潜伏期、游泳距离时间和目标象限游泳时间,VPA高剂量组和VPA低剂量组较对照组明显延长(P<0.05,P<0.01),而穿越平台次数较对照组显著减少(P<0.01),表明VPA妊娠中期宫内暴露可导致子代的神经行为异常;对血氨、肝功能与神经行为的相关性分析结果显示,VPA处理组的总蛋白和白蛋白的水平显著降低,与神经行为异常呈负相关;血氨、ALT、AST水平与刻板动作次数、时间、学习记忆的总路程、潜伏期、穿越平台次数均密切相关(P<0.01)。结论VPA妊娠中期宫内暴露可导致子代肝脏白蛋白减少,AL
- 唐瑾徐元宏
- 关键词：丙戊酸钠子代大鼠血氨神经行为
- 血吸虫果糖二磷酸醛缩酶诱导Th2免疫偏移的研究
- 2015年
- 目的分析日本血吸虫感染以及虫源性糖蛋白果糖二磷酸醛缩酶(Sj FBPA)刺激后小鼠脾脏细胞中白介素4(IL-4)、白细胞分化抗原CD8a因子表达量的动态变化,并探讨Sj FBPA与辅助型T细胞(Th2)免疫应答的关系。方法血吸虫尾蚴感染C57小鼠10只,设正常对照组。感染8周后处死小鼠,取脾脏制备淋巴细胞悬液;用藻红蛋白(PE)标记CD8a抗体,藻青蛋白(APC)标记IL-4抗体进行细胞染色;流式细胞仪检测细胞因子表达量的变化。10只正常C57小鼠处死后取脾脏制成淋巴细胞悬液,加Sj FBPA蛋白体外刺激,按上述流程刺激方法检测细胞。结果小鼠感染血吸虫8周后脾细胞中IL-4、CD8a的表达量分别为(22.39±5.93)%、(11.34±2.15)%,正常对照组脾细胞中IL-4、CD8a的表达量分别为(1.39±0.52)%、(1.98±0.84)%,差异有统计学意义(P<0.01)。Sj FBPA体外刺激小鼠脾细胞的IL-4、CD8a的表达量分别为(14.14±1.16)%、(8.99±0.81)%,正常对照组脾细胞中IL-4、CD8a的表达量分别为(1.86±0.93)%、(1.69±0.56)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Sj FBPA在血吸虫感染中具有诱导Th2免疫偏移的作用,树突状细胞作为提呈细胞参与该免疫反应。
- 胡媛媛徐元宏沈继龙陈鹤
- 关键词：日本血吸虫
- 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速检测产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌的研究被引量：2
- 2021年
- 随机收集54株产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)和24株对头孢菌素类抗生素敏感的肺炎克雷伯菌,通过PCR筛选ESBLs基因型,细菌与含有一定浓度的抗生素共同孵育一定时间后,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测抗生素水解产物的特征峰。头孢噻肟与头孢曲松水解试验分别在反应1 h与2 h后,能够很好地鉴别产ESBLs的肺炎克雷伯菌;与ESBLs基因型检测相比,特异性为100%,敏感性为96.3%。MALDI-TOF MS在临床上能够快速准确鉴定病原菌,并且在细菌耐药性检测方面具有巨大潜力,MALDI-TOF MS酶解法能够快速检测产ESBLs肺炎克雷伯菌。
- 王刚宋国滨黄颖徐元宏
- 关键词：肺炎克雷伯菌超广谱Β内酰胺酶基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
