广东省自然科学基金([2001]10-010371)
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
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- 丙型肝炎病毒NS3基因真核质粒的构建及其在人肝细胞中的诱导表达
- 2005年
- 目的:进行丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因真核表达载体的构建,并分析其在体外培养的人肝细胞中的表达。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011表达载体中PCR扩增出HCV NS3基因片段,将其与表达载体pcDNA3.1(-)重组,得到重组的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,以免疫组织化学SP法及Western Blotting检测HCV NS3蛋白的表达。结果:所得到的NS3片段正确,序列正确,所构建的真核质粒成功转染QSG7701细胞并表达蛋白,表达的NS3蛋白相对分子质量为70 000。结论:成功构建了丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3,并且该载体在体外培养的人肝细胞中能有效表达特异性HCV NS3蛋白。
- 李君武江静许小亮
- 关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白3蛋白表达
- HCV-C蛋白抗原在人肝细胞株中的表达和鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:构建HCV-C蛋白基因的真核表达载体,并在正常人肝细胞HL-7702中表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中,扩增HCVcore基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人正常肝细胞HL-7702,用免疫组化染色(SP)法检测HCVC蛋白的表达,并通过Westernblot进行鉴定。结果:所克隆的HCV-C基因片段的大小为573bp,序列正确。成功地构建了pcDNA3.1(-)/core重组表达质粒。以其转染HL-7702细胞后,用SP免疫组化染色法检测到了C蛋白的表达。Westernblot显示,其相对分子质量(Mr)约为21000。结论:构建的真核表达载体pcD-NA3.1(-)/core在人肝细胞中能有效表达HCV-C蛋白,为以后相应抗体的制备打下了基础。
- 李君武许小亮李科
- 关键词：HCVC蛋白真核表达
- 丙型肝炎病毒非结构蛋白3蛋白酶抑制剂的研究进展被引量：4
- 2005年
- 面对丙型肝炎的流行,至今缺少理想的治疗药物和方案,丙型肝炎病毒(HCV)的非结构蛋白3(NS3)蛋白酶是近年来抗丙型肝炎药物研究的重要靶点。作者综述了NS3蛋白酶抑制剂的作用机制和活性特点。
- 许小亮李君武
- 关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白蛋白酶抑制剂
- HCVcore真核表达质粒pcDNA3.1(-)/core的构建被引量：1
- 2005年
- 目的构建HCVcore基因真核表达质粒,为进一步研究和解析HCV诱发人不死化肝细胞癌化的机制,HCV感染的检测及疫苗和药物研发做好前期基础。方法将含HCV全长基因的pBRTM/HCV1 -3011质粒于大肠杆菌JM109内扩增;提取pBRTM/HCV1-3011质粒;从pBRTM/HCV1-3011质粒中PCR扩增出HCVcore片段并将其插入pGEM-T克隆载体;再与表达载体pcDNA3. 1( -)重组,以得到重组的真核表达载体pcDNA3. 1 ( -) /core;最后限制性酶切鉴定HCVcore表达载体。结果从pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出的HCVcore片段大小正确,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列;凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3. 1 /core内。结论 成功的构建了HCVcore基因的真核表达载体pcDNA3. 1( -) /core。
- 李君武江静王志鹏许小亮林绍强黄泽棋韦静李小兰
- 关键词：HCV基因非结构蛋白
- 丙型肝炎病毒主要酶区结构及功能的研究进展
- 2004年
- 江静李君武
- 关键词：NS3蛋白
- 丙型肝炎病毒核心蛋白在QSG7701细胞中的表达和鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的:进行丙型病毒肝炎核心蛋白真核表达载体的构建,并在人源肝细胞QSG7701中进行表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出HCV核心(core)基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,用免疫组织化学SP法检测丙型肝炎病毒核心蛋白的表达,再通过Westernblot印迹法进行鉴定。结果:所克隆的core片段大小正确,序列正确;成功的构建了pcDNA3.1(-)/core重组表达质粒,瞬时转染QSG7701细胞,用SP免疫组化检测到了核心蛋白的表达,Westernblot印迹法显示其分子量约为21000。结论:丙型病毒肝炎核心蛋白的真核表达载体pcDNA3.1(-)/core在人肝细胞中能有效表达HCV核心蛋白,从而为进一步研究和解析核心蛋白在肝细胞癌变机制中的所起的作用提供了良好的核心蛋白表达系统,同时也为开发丙型肝炎DNA疫苗提供了前期条件。
- 李君武许小亮江静王志鹏林绍强黄泽棋韦静李小兰
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白真核表达
- HCV非结构蛋白3真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3的构建
- 2004年
- 目的 :构建HCVNS3基因真核表达载体 ,为进一步研究和解析HCVNS3基因诱发不死化人肝细胞癌化的机制准备了条件。方法 :将含HCV全长基因的pBRTM/HCV1- 30 11质粒转化感受态菌JM10 9并扩增 ;提取pBRTM/HCV1- 30 11质粒 ;从pBRTM/HCV1- 30 11质粒中PCR扩增出HCVNS3片段 ;并将其插入到克隆载体pMD18-T中 ,再与表达载体pcDNA3 1(- )重组 ,以得到重组的真核表达载体pcDNA3 1(- ) /NS3;最后限制性酶切鉴定HCVNS3表达载体。结果 :从pBRTM/HCV1- 30 11质粒中扩增出的HCVNS3片段大小正确 ,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列 ;凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3 1/NS3内。结论 :成功地构建了HCVNS3基因的真核表达载体pcDNA3 1(- )
- 李君武江静王志鹏许小亮林绍强黄泽棋韦静李小兰
- 关键词：肝炎病毒丙型
