国家高技术研究发展计划(2001AA217031)
- 作品数：18 被引量：75H指数：6
- 相关作者：钱其军苏长青吴孟超崔贞福王伟国更多>>
- 相关机构：第二军医大学香港大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金上海市青年科技启明星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 端粒酶逆转录酶启动子调控的肿瘤增殖腺病毒CNHK300对肝癌细胞的杀伤作用被引量：13
- 2005年
- 目的观察端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的肿瘤增殖腺病毒CNHK300对肝癌细胞的杀伤作用。方法采用Western印迹检测了腺病毒E1A在细胞中的表达;通过病毒增殖实验和细胞生长抑制实验,验证CNHK300选择性复制和杀伤能力,并与ONYX 015(E1B5 5000蛋白缺失的2型和5型嵌和型腺病毒)和wtAd5(野生型腺病毒)进行比较;用携带绿色荧光蛋白的CNHK300 EGFP感染BJ和Hep3B,直观的观察其增殖过程。结果CNHK300病毒48h在Hep3B和HepGII中的增殖倍数分别为40 625和65 326倍,与wtAd5增殖能力相近,较ONYX 015强几倍至十几倍。在BJ正常成纤维细胞中CNHK300病毒增殖能力减弱,CNHK300病毒48h增殖倍数为180倍,而wtAd5增殖能力仍可高达4000倍。CNHK300在MOI0 5集落形成单位/细胞以下就可以有效地杀伤肝癌细胞, MOI0 002集落形成单位/细胞时就可以杀伤半数Hep3B细胞,较ONYX 015具有更强的肿瘤杀伤能力。CNHK300对正常成纤维细胞的杀伤力明显弱于wtAd5, CNHK300在MOI100集落形成单位/细胞时BJ细胞存活率近50%。结论肿瘤选择性增殖腺病毒CNHK300可选择性地在端粒酶阳性的肝癌细胞中复制,并产生溶瘤作用,在正常细胞中复制能力和杀伤能力明显减弱,且无论选择性和杀伤能力均优于ONYX 015。
- 李月敏宋三泰江泽飞张琪苏长青徐建明钱炎珍钱其军
- 关键词：肝癌细胞端粒酶逆转录酶集落形成肿瘤增殖增殖倍数
- 腺病毒介导人血管抑素抑制乳腺癌生长的研究被引量：3
- 2003年
- 目的 :研究腺病毒介导的重组人血管抑素PlasminogenK5基因对乳腺癌的治疗作用。方法 :通过PCR将人血纤维蛋白酶原的信号肽基因加至Plasminogen的K5结构域基因 ,克隆到质粒pCA13,并在 2 93细胞中同源重组 ,得到腺病毒Ad K5。将Ad K5体外感染乳腺癌细胞B Cap 37和血管内皮细胞ECV30 4 ,观察其对细胞生长的影响 ,同时在乳腺癌的裸鼠动物模型上 ,检测其对肿瘤生长的抑制作用。结果 :在感染Ad K5的B Cap 37细胞中检测到K5基因mRNA的表达。Ad K5对血管内皮细胞ECV30 4有抑制作用 ,但对癌细胞B Cap 37没有直接抑制作用。动物实验表明Ad K5能显著抑制肿瘤的生长。结论 :K5基因能抑制乳腺癌实体瘤的生长。
- 罗春霞邹卫国邱松波马建岗刘新垣
- 关键词：腺病毒PLASMINOGENK5基因治疗乳腺癌
- E1B55kDa缺失的增殖腺病毒抗肿瘤效果差异及其分子机制
- 2007年
- 目的:观察E1B55kDa缺失的增殖腺病毒CNHK200和CNHK200-hA对A549肺癌和MBD-231乳腺癌动物模型的抗肿瘤效果,结合研究肿瘤细胞柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)的表达状态,分析腺病毒抗肿瘤效果的差别及其分子机制。方法:建立A549肺癌和MBD-231乳腺癌裸鼠模型,给予病毒总剂量1×109pfu的CNHK200和CNHK200-hA治疗。观察期结束,取肿瘤标本进行柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)和腺病毒壳蛋白Hexon的免疫组化定位。结果:在CAR水平高表达的A549细胞内,CNHK200-hA和CNHK200均可以有效增殖并杀伤肿瘤细胞,产生明显的疗效。相反,在CAR水平低下的MBD-231细胞内,CNHK200-hA和CNHK200没有增殖复制能力,CNHK200几乎没有任何治疗效果,CNHK200-hA的治疗效果仅由Angiostatin基因表达所产生。结论:CAR在E1B55kDa缺失的增殖腺病毒的感染和增殖过程中起着至关重要的作用,肿瘤细胞CAR表达低下可以影响腺病毒载体的感染力和增殖力,从而降低用腺病毒进行肿瘤基因治疗的疗效。
- 王伟国苏长青马炬明施建国胡慧珍李林芳姜梨华钱其军
- 关键词：增殖腺病毒肿瘤模型基因治疗
- 基因病毒治疗系统CNHK200-hA的构建及对结肠癌治疗作用的体内研究被引量：1
- 2006年
- 目的:构建一种结合抗肿瘤新生血管生成的基因治疗与病毒治疗优势的新型肿瘤基因-病毒治疗系统CNHK200hA,初步研究其在体内对结肠癌的治疗作用.方法:克隆人抗血管生成基因Angiostatin(k15),命名为hA.利用病毒重组技术将hA插入肿瘤特异性增殖型腺病毒和非增殖型腺病毒的病毒基因组中,通过动物试验观察其对结肠癌的体内治疗作用.结果:构建了一种新型的基因病毒治疗系统CNHK200hA.动物体内试验显示基因-病毒治疗系统CNHK200hA能在结肠癌HT29内高效表达K15蛋白,使肿瘤内血管明显减少,对结肠癌的疗效明显好于非增殖型腺病毒AdhA及肿瘤增殖型病毒ONYX015.结论:插入了抗肿瘤新生血管生成基因hA的基因病毒治疗系统CNHK200hA在体内对结肠癌的治疗作用较非增殖病毒AdhA及肿瘤增殖病毒ONYX-015进一步提高.
- 王伟国马炬明胡慧珍苏长青薛慧斌吴孟超钱其军
- 关键词：腺病毒科基因治疗肿瘤血管生成结肠癌
- 基因-病毒治疗系统CNHK200-hA对肿瘤的治疗作用被引量：1
- 2005年
- 王伟国苏长青刘永靖Jonathan Sham吴孟超钱其军
- 关键词：ANGIOSTATIN肿瘤细胞晚期肿瘤毒副作用基因治疗血管抑素
- 肿瘤生物治疗的新策略——基因-病毒治疗被引量：3
- 2002年
- 钱其军吴孟超岑信棠
- 关键词：肿瘤治疗学生物疗法
- 基因-病毒治疗系统CNHK200-hA对肺癌治疗的研究被引量：9
- 2005年
- 目的 构建抗肿瘤新生血管生成的基因治疗与病毒治疗相结合的基因 病毒治疗系统CNHK2 0 0 hA ,并对其肺癌的体内外治疗作用进行初步研究。方法 通过Westernblot分析 ,观察携带抗肿瘤新生血管生成基因angiostatink1 5 (hA)的基因 病毒治疗系统CNHK2 0 0 hA和非增殖型腺病毒对介导k1 5蛋白表达的影响 ;通过细胞病理作用及动物试验 ,比较CNHK2 0 0 hA和非增殖型腺病毒对人肺癌细胞株A5 4 9的杀伤作用及对肺癌裸鼠移植瘤的治疗作用。结果 基因 病毒治疗系统CNHK2 0 0 hA能够介导hA基因在肺癌细胞内高效表达k1 5蛋白 ,其表达量高于非增殖型腺病毒Ad hA。细胞病理效应显示 ,CNHK2 0 0 hA对A5 4 9的杀伤作用明显优于Ad hA ,CNHK2 0 0 hA在感染复数 (MOI)值为 1时可完全杀伤A5 4 9细胞 ,而达到相同杀伤效应的Ad hA的MOI值为 1 0 0。动物试验显示 ,CNHK2 0 0 hA对肺癌的疗效明显好于Ad hA及肿瘤增殖型病毒ONYX 0 1 5。结论 插入了抗肿瘤新生血管生成基因hA的基因 病毒治疗系统CNHK2 0 0 hA ,可明显提高hA基因的表达量 ,其在体内外的抗肺癌作用较非增殖型腺病毒Ad hA及肿瘤增殖型病毒ONYX 0 1 5进一步提高。
- 王伟国薛惠斌苏长青崔贞福聂明明Jonathan Sham吴孟超钱其军
- 关键词：病毒治疗肺癌增殖型腺病毒新生血管生成抗肿瘤表达量
- 肿瘤特异增殖腺病毒CNHK200-hEndo的构建及其抗裸鼠肺癌移植瘤疗效被引量：1
- 2008年
- 目的:构建一种携带抗肿瘤血管生成基因Endostatin的新型肿瘤基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndo,观察其对人肺癌细胞裸鼠移植瘤的治疗效果。方法:克隆人抗血管生成基因Endostatin,利用病毒重组技术将该基因插入肿瘤特异性增殖腺病毒CNHK200的基因组中,扩增并纯化CNHK200-hEndo病毒。建立裸鼠肺癌细胞移植瘤模型,观察CNHK200-hEndo抗肿瘤的效果,并与非增殖病毒Ad-hEndo对照。结果:成功构建一种新型的基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndo,其E1b55kDa蛋白表达缺失。CNHK200-hEndo能在肿瘤细胞内大量增殖并高效表达Endostatin蛋白,表达量明显高于非增殖病毒Ad-hEndo(P<0.05)。动物实验证实,CNHK200-hEndo对人类肺癌细胞的裸鼠移植瘤模型具有抑制肿瘤生长的疗效,与Ad-hEndo和空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:构建的基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndo能在肺癌细胞中增殖复制,提高Endostatin蛋白的表达,明显抑制肺癌细胞移植瘤的生长。
- 施军霞苏长青李林芳钱其军
- 关键词：腺病毒肺癌内皮抑素基因
- 新型增殖型腺病毒CNHK500-hγ对肝癌细胞的杀伤作用被引量：4
- 2011年
- 目的:探讨一种新型增殖型腺病毒CNHK500-hγ[腺病毒E1A、E1B基因分别由人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子和缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)启动子双重调控的、并携带hIFN-γ的重组腺病毒]对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法:TCID_(50)法和MTF检测增殖型腺病毒CNHK500-hγ在两种端粒酶阳性肝癌细胞株HepG2和Hep3B以及一株端粒酶阴性的成纤维细胞株BJ中的扩增能力和对细胞的杀伤作用。用携带绿色荧光蛋白的CNHK500-GFP感染BJ、Hep3B和HepG2细胞,观察其扩增情况。Western blotting和ELISA法检测CNHK500-hγ感染后细胞和细胞上清中hIFN-γ的表达。结果:CNHK500-hγ感染HepG2、Hep3B和BJ细胞48 h后,CNHK500-hγ在HepG2和Hep3B细胞中的扩增是BJ细胞中的16003和2116倍,对BJ细胞杀伤的ED_(50)值分别是杀伤HepG2和Hep3B细胞的500和10 000倍(P<0.01),且明显优于阳性对照增殖型腺病毒ONYX-015。CNHK500-hγ感染后HepG2及Hep3B细胞中hIFN-γ的表达显著高于非增殖型腺病毒Ad-hγ感染后细胞中hIFN-γ的表达(P<0.01)。结论:增殖型腺病毒CNHK500-hγ可在肝癌细胞内特异性扩殖,高效表达hIFN-γ基因,是一种具备治疗肝癌潜力的新型腺病毒。
- 孙立臣张柏和张琪苏长青李根丛吴红平吴孟超钱其军
- 关键词：病毒治疗端粒酶
- 端粒酶为靶点的溶瘤病毒的抗肿瘤作用研究被引量：1
- 2007年
- 目的:通过临床前体外实验研究观察溶瘤病毒CNHK300对各种乳腺癌细胞的特异性杀伤作用。方法:通过TRAP-ELISA方法,确认各种乳腺癌细胞和正常成纤维细胞中的端粒酶活性。Western印迹检测腺病毒CNHK300 E1A在端粒酶阳性肿瘤细胞和阴性正常成纤维细胞中的表达差异。通过荧光显微镜观察病毒在细胞中感染和复制的过程。行病毒增殖实验,验证溶瘤病毒CNHK300在端粒酶阳性乳腺癌细胞中选择性复制能力;MTT方法行细胞生长抑制实验,检测CNHK300对端粒酶阳性乳腺癌细胞的选择性杀伤能力。结果:各种乳腺癌细胞MCF-7、BT-549和SK-BR-3的端粒酶均为阳性,MRC-5和BJ细胞的端粒酶均为阴性。CNHK300病毒的E1A可以选择性在端粒酶阳性的乳腺癌细胞株和转染E1A的293细胞中表达,而在端粒酶阴性的正常成纤维细胞株中不表达。CNHK300病毒可以选择性在乳腺癌细胞中复制并杀伤肿瘤细胞,而在正常细胞中复制明显减弱,同时杀伤作用明显下降。结论:本研究证明,hTERT启动子可以用于调控腺病毒E1A选择性在端粒酶阳性肿瘤细胞中表达,并调控病毒在肿瘤细胞中选择性复制,最后产生溶瘤作用。溶瘤病毒可能为肿瘤治疗提供一种新的有力武器。
- 李月敏宋三泰龙旭梅江泽飞廖国清曲怡梅解国清葛飞娇张琪钱其军
- 关键词：溶瘤病毒肿瘤CNHK300HTERT
