重庆市教委科研基金(KJ110308)
- 作品数：6 被引量：39H指数：3
- 相关作者：陈地龙李静游智梅李丹阳夏菁更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆北部新区第一人民医院重庆两江新区第一人民医院更多>>
- 发文基金：重庆市教委科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人PGI基因siRNA慢病毒质粒的构建及对白血病细胞增殖的影响被引量：2
- 2013年
- 目的构建共表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和人磷酸葡萄糖异构酶(phosphoglucose isomerase,PGI)基因的慢病毒载体,初步探讨干扰人PGI基因对白血病细胞增殖的影响。方法 RT-PCR、Westernblot检测人单核细胞、K562、KG1-α、HL-60细胞中PGI mRNA和蛋白表达水平,筛选高表达PGI的白血病细胞系;构建人PGI基因siRNA的慢病毒载体及阴性对照,经293T细胞包装后,获得可表达人PGI基因siRNA的慢病毒载体及阴性对照;分别使用重组病毒(干扰组)、原始病毒(阴性对照组)和等量PBS(空白对照组)转染白血病KG1-α细胞,筛选稳定转染细胞株。RT-PCR和Western blot检测干扰组、阴性对照组及空白对照组KG1-α细胞PGI基因表达水平;CCK-8检测各组细胞增殖情况并作生长曲线。结果 PGI基因在白血病KG1-a细胞中高表达;成功构建了稳定低表达PGI的白血病细胞株(KG1-α-siPGI);低表达PGI基因的KG1-α细胞增殖能力较空白对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了低表达PGI基因的白血病KG1-α细胞株,干扰PGI基因的表达能够抑制KG1-α细胞的生长。
- 赵亮李静魏强游智梅夏菁李丹阳陈地龙
- 关键词：白血病慢病毒载体RNA干扰细胞增殖
- MAPK信号转导通路在人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡中的作用被引量：18
- 2013年
- 目的探讨人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡的机制。方法将对数生长期K562细胞分成对照组和人参多糖组,对照组细胞常规培养,人参多糖组细胞培养体系中加入人参多糖0.4 g/L。各组细胞培养48 h后,流式细胞术和Hoechst 33258染色法检测K562细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞p38、JNK基因表达;采用免疫荧光实验检测细胞中p-p38、p-JNK蛋白表达,测定Caspase-3的活性;Western blotting检测细胞中p38、JNK、p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3蛋白的变化。结果与对照组比较,人参多糖组K562细胞凋亡率显著增加(P<0.05),出现明显的细胞核固缩现象,K562细胞p38 mRNA与JNK mRNA明显增多。免疫荧光检测显示,p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3表达明显增强且向胞核转移;Western blotting检测显示,人参多糖组K562细胞p38、JNK总蛋白无明显变化(P>0.05);p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3有增加的趋势(P<0.05)。结论人参多糖能促进K562细胞凋亡,其作用可能是通过影响MAPK信号传导通路实现的。
- 魏强李静刘艺赵亮夏菁游智梅李丹阳陈地龙
- 关键词：人参多糖细胞凋亡MAPK信号传导通路JNK
- 温胃调肠颗粒对炎症诱导的肠易激综合征大鼠胃肠激素紊乱和HPA轴亢进的影响被引量：7
- 2019年
- 目的探讨温胃调肠颗粒对炎症诱导的肠易激综合征(IBS)大鼠模型胃肠激素紊乱和下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴亢进的影响。方法将50只SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组和温胃调肠颗粒高剂量组、温胃调肠颗粒低剂量组,每组10只。除了空白对照组,其余大鼠连续7 d给予乙酸灌肠造模。空白对照组和模型对照组给予生理盐水灌胃,阳性对照组给予舒丽启能片62.5 mg/kg灌胃,温胃调肠颗粒高剂量组、低剂量组分别给予温胃调肠颗粒12 g/kg、3 g/kg灌胃,给药14 d。观察大鼠腹部回缩反射(AWR)和束缚应激实验(RSP)。地塞米松/促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)测定大鼠各阶段血清皮质醇含量。ELISA法检测各组大鼠腹主动脉血白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、P物质(SP)、生长抑素(SS)含量。免疫组化法检测大鼠结肠组织中CRH表达量。结果温胃调肠颗粒高剂量组大鼠抬腹阈值、拱背阈值以及成形便次数少于空白对照组,但是均多于模型对照组,不成形便次数虽然多于空白对照组,但少于模型对照组(P<0.05)。温胃调肠颗粒高剂量组血清中皮质醇含量以及腹主动脉血IL-1β、IL-6、SP、SS含量较模型对照组明显降低,而腹主动脉血GAS和MTL含量较模型对照组升高(P<0.05)。温胃调肠颗粒高剂量组大鼠结肠黏膜组织CRH表达水平明显低于模型对照组,但仍然高于空白对照组(P<0.05),与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论温胃调肠颗粒能够从抑制IL-1β、IL-6水平、正常化HPA轴以及平衡胃肠激素分泌方面改善感染后肠易激综合征大鼠模型的内脏高敏感性以及肠运动障碍。
- 杨梅李玉先石庆强
- 关键词：感染后肠易激综合征胃肠激素下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴
- 人参皂苷Rh_2通过激活GSK-3β降解β-catenin发挥抗肝癌作用研究被引量：9
- 2016年
- 目的探讨人参皂苷Rh2抗肝癌作用机制。方法 HE染色观察HepG2和HepG2-β-catenin荷瘤裸鼠肿瘤组织的细胞形态;免疫组化检测GSK-3β、β-catenin和MMP-3表达;ELISA法检测肿瘤细胞GSK-3β活性;PCR检测GSK-3β、β-catenin、Bcl-2、Cyclin D1、Bax和MMP-3基因的表达;Western blotting蛋白印迹法检测GSK-3β和β-catenin的表达。结果 HepG2组和HepG2-β-catenin组荷瘤裸鼠肿瘤细胞核成异型性,占整个细胞比例大,但HepG2-β-catenin组更明显。HepG2-β-catenin+人参皂苷Rh2组和HepG2+人参皂苷Rh2组肿瘤细胞胞核固缩,出现大量破碎细胞,而HepG2+人参皂苷Rh2组肿瘤细胞核固缩及破碎细胞更明显。免疫组化结果显示人参皂苷Rh2诱导HepG2及HepG2-β-catenin荷瘤裸鼠后,GSK-3β表达增强,β-catenin、MMP-3表达降低;HepG2+人参皂苷Rh2组中β-catenin、MMP-3表达弱于HepG2-β-catenin+人参皂苷Rh2组,而GSK-3β表达则无明显差异。ELISA结果显示,人参皂苷Rh2诱导HepG2及HepG2-β-catenin荷瘤裸鼠后,GSK-3β的活性均升高。PCR结果显示,HepG2+人参皂苷Rh2组中β-catenin、Cyclin D1、Bcl-2基因表达弱于HepG2-β-catenin+人参皂苷Rh2组,Bax基因表达增强更明显,而GSK-3β基因表达无明显差异。Western blotting结果显示,HepG2+人参皂苷Rh2组中β-catenin蛋白表达弱于HepG2-β-catenin+人参皂苷Rh2组,而GSK-3β蛋白表达无明显差异。结论人参皂苷Rh2对肝癌的抑制作用是通过激活GSK-3β降解β-catenin而实现的,且能抑制肿瘤的转移。
- 石庆强左国伟冯子强赵绿翠李静陈地龙
- 关键词：人参皂苷RH2HEPG2糖原合成酶激酶-3ΒΒ-链蛋白肝癌
- 人参皂苷Rh2通过激活Gsk-3β削弱β-catenin在肝癌HepG2细胞中的作用被引量：1
- 2015年
- 目的：研究人参皂苷Rh2对HepG2细胞的作用机制。方法：用pLOV-EF1a-MCS-3FLAG-β-catenin慢病毒感染HepG2细胞,运用荧光显微镜观察细胞荧光强度变化。通过CCK-8法检测细胞增殖反应。采用FCM检测细胞周期及凋亡变化;利用ELISA法检测细胞产生Gsk-3β活性;用PCR法检测细胞Gsk-3β、β-catenin、Bcl2、CyclinD1、Bax、MMP3基因的表达;用CHIP法检测细胞Bcl2、CyclinD1、Bax、MMP3基因的表达;运用Western blot法检测细胞Gsk-3β、β-catenin、Bcl2、CyclinD1、Bax、MMP3蛋白的表达。结果：用pLOV-EF1a-MCS-3FLAG-β-catenin慢病毒感染HepG2细胞,被感染的HepG2细胞命名为HepG2-β-catenin;CCK-8分析结果显示,加药组给予（10-160μmol/L）Rh2后HepG2及HepG2-β-catenin细胞的增殖受到抑制,且Rh2对肝癌HepG2-β-catenin和HepG2细胞的生长抑制呈剂量和时间依赖。在HepG2细胞中48、72 h半数抑制率分别为100μmol/L,58.12μmol/L,在HepG2-β-catenin细胞中48、72 h半数抑制率分别是129.2μmol/L,83.33μmol/L,故Rh2作用于HepG2-β-catenin细胞浓度均高于HepG2细胞,与HepG2细胞组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）。FCM检测结果显示,Rh2可诱导HepG2和HepG2-β-catenin细胞周期阻滞在G0/G1期,HepG2＋Rh2组G0/G1期（64.57±0.65）,而HepG2-β-catenin＋Rh2组G0/G1期（58.61±2.01）;FCM检测结果显示,Rh2可诱导HepG2和HepG2-β-catenin细胞早期凋亡,HepG2＋Rh2组凋亡率（17.27±2.77）,而HepG2-β-catenin＋Rh2组凋亡率（9.02±1.76）。ELISA结果显示,Rh2作用HepG2细胞12、24、48、72 h后,Gsk-3β的活性随着作用时间延长,逐渐升高,在48 h最高,随后其活性开始降低。Rh2诱导HepG2和HepG2-β-catenin细胞48 h,与对照组相比,Gsk-3β的活性均增高,而加入Bio后其活性降低,HepG2＋Rh和HepG2-β-catenin＋Rh2组间无明显差异;PCR、CHIP、WB结果显示,人参皂苷Rh2诱导HepG2和HepG2-β-catenin细胞后,Gsk-3β、Bax基因及蛋白表达增加,而β-catenin、CyclinD1、Bcl2、MMP3基因及�
- 石庆强左国伟冯子强赵绿翠罗念游智梅夏菁李丹阳李静陈地龙
- 关键词：人参皂苷RH2HEPG2GSK-3ΒΒ-CATENIN
- 曲古抑菌素对HepG2细胞增殖的影响及相关机制被引量：2
- 2014年
- 目的：研究曲古抑菌素（TSA）对HepG2细胞凋亡的影响及可能的机制。方法取对数生长期HepG2细胞，TSA（50-500 nmol/L）诱导，同时设空白对照组，用CCK-8检测细胞增殖影响；流式细胞术检测细胞周期；Annexin V-FTIC/PI双染细胞检测凋亡；倒置显微镜观察细胞形态并采图；Western blot检测HepG2细胞中β-catenin、HDAC1、HDAC3、H3K9、CyclinD1、Bax等蛋白的表达。定量PCR方法检测HDAC1，HDAC3基因的表达。结果 CCK-8检测结果显示TSA对肝癌HepG2细胞生长抑制呈剂量和时间依赖性；流式细胞术检测细胞周期表明，药物组细胞G0/G1期所占比例增加，S期所占比例下降，G2/M所占比例增加；细胞凋亡检测表明，空白对照组凋亡率（6.22±0.25）%；250 nmol/L组凋亡率（7.17±0.20）%；500 nmol/L组凋亡率（18.14±0.42）%；倒置显微镜下观察可见，随着时间推移空白对照组细胞生长良好；而药物组细胞则出现变形，有大量漂浮细胞；Western blot检测结果显示β-catenin、H3K9和Bax蛋白表达水平均明显升高，CyclinD1、HDAC1、HDAC3的表达水平则呈下降趋势；定量PCR结果显示：HDAC1、HDAC3基因的表达无明显变化。结论 TSA可通过抑制HDAC的活性，促进组蛋白乙酰化，活化Wnt/β-catenin信号通路来发挥其抑制HepG2细胞增殖，诱导周期阻滞及凋亡的作用。
- 石庆强左国伟冯子强赵绿翠罗念游智梅夏菁李丹阳李静陈地龙
- 关键词：HEPG2细胞曲古抑菌素凋亡Β-CATENIN组蛋白乙酰化
