国家自然科学基金(30770089)
- 作品数：8 被引量：51H指数：5
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- 黄瓜绿斑驳花叶病毒的生物学与分子检测鉴定被引量：4
- 2011年
- 根据已报道的黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)外壳蛋白(CP)基因序列合成1对引物,对侵染黄瓜的CGMMV广西分离物CP基因片段进行扩增和序列分析,结果表明该分离物与CGMMV-GX-G(DQ647384)同源性最高,达100%。将病毒分离物摩擦接种于5种葫芦科植物、普通烟、心叶烟及苋色藜上,结果表明在葫芦科植物上均表现症状,在苋色藜上产生局部侵染,不侵染普通烟和心叶烟。接种实验发现不同植物及接种时间对寄主的发病有一定影响。上述植物接种后进行RT-PCR检测,结果表明,从接种病毒的葫芦科植物上和苋色藜上均扩增到该病毒的特异性条带,而普通烟、心叶烟和健康对照没有扩增出目的条带。生物学与分子检测鉴定结果表明CGMMV-GX属于CGMMV西瓜株系。
- 李海明吴祖建陈启建沈建国
- 关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒生物学检测分子检测RT-PCR
- 金鸡菊(Coreopsis drummondii)的抗TMV活性物质被引量：15
- 2009年
- 采用活性跟踪法从金鸡菊根中分离获得抗病毒活性物质,经质谱和核磁共振分析,鉴定该物质为1-苯基-1,3,5-三庚炔.采用半叶枯斑法、叶圆盘法测定了该物质对烟草花叶病毒的抑制效果,结果表明,0.2mg/mL的该化合物对TMV表现出较好的体外抑制侵染和增殖活性,其对TMV侵染和复制的抑制率分别为73.5%和84.3%.实时荧光定量PCR测定结果表明,该化合物对TMV外壳蛋白基因的表达有明显的抑制作用,0.2mg/mL的该化合物对TMV外壳蛋白基因表达的抑制率为79.8%.
- 陈启建欧阳明安吴祖建谢联辉林奇英
- 银胶菊(Parthenium hysterophorus)中抗TMV活性成分的分离及活性测定被引量：9
- 2008年
- 采用活性跟踪法从银胶菊中分离获得抗病毒活性物质,经质谱和核磁共振分析,确定该物质为小白菊内酯。采用半叶枯斑法和叶圆盘法测定了其对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抑制效果,结果表明:0.2 mg/mL的小白菊内酯在混合接种和药液浸泡两种处理中均表现出较好的体外抑制TMV活性,其抑制率分别为69.0%和72.1%;在离体条件下对烟草叶圆盘中的烟草花叶病毒复制也具有良好的抑制效果,抑制率为72.3%。
- 陈启建欧阳明安谢联辉林奇英
- 关键词：银胶菊小白菊内酯
- 鸦胆子素D抗黄瓜绿斑驳花叶病毒的活性
- 2010年
- 采用半叶枯斑法、叶圆盘法测定了鸦胆子素D对黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)的抑制效果,结果表明,20μg.mL-1的鸦胆子素D对CGMMV的侵染和增殖均有较强的抑制活性,其对CGMMV侵染和复制抑制率分别为92.6%和88.3%;实时荧光定量PCR测定结果表明,20μg.mL-1该化合物对CGMMV复制酶基因、运动蛋白基因和外壳蛋白基因表达的抑制率分别为88.8%、92.1%和90.5%.采用Western blot方法测定的结果表明,鸦胆子素D可显著抑制黄瓜叶片中CGMMV CP和MP蛋白的表达.
- 陈启建刘莉莉欧阳明安林奇英
- 关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒抗病毒活性
- 鸦胆子素D对烟草抗烟草花叶病毒的诱导抗性和保护作用被引量：14
- 2008年
- 为明确植物源抗病毒化合物鸦胆子素D(Bruceine D)对烟草抗烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV)的诱导抗性及其对TMV感染后的保护作用,本研究分别设置清水处理作为阴性对照,接种TMV作为阳性对照,检测施用Bruceine D对烟草体内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)以及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化,并检测了Bruceine D对烟草感染TMV后体内叶绿素、丙二醛(MDA)、可溶性糖和可溶性蛋白含量的影响,以及对烟草POD和PPO同工酶的诱导作用。结果表明,Bruceine D能够系统性地诱导烟草体内POD,PPO,PAL以及SOD活性的提高;能够抑制烟草因感染TMV造成的叶绿素含量的下降以及MDA含量的升高;诱导烟草产生新的POD和PPO的同工酶;阻止TMV造成的烟草体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的降低。Bruceine D能够诱导烟草产生对TMV的抗性并对感染TMV的烟草起到保护作用。
- 张正坤沈建国谢荔岩谢联辉林奇英
- 关键词：诱导抗性TMV防御酶可溶性蛋白
- 绿色荧光蛋白标记检测鸦胆子素D抗TMV活性
- 2010年
- 以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)为报告基因,将含TMV表达载体的质粒p35S-30B:GFP转化农杆菌EHA 105,通过渗透法把经MMA诱导后的农杆菌悬浮液注射到本氏烟叶片内,测定了鸦胆子素D(Bruceine D)对烟草植株内TMV的增殖和运动的抑制作用;通过PEG介导法把p35S-30B:GFP转化到本氏烟叶肉细胞原生质体内,测定了Bruceine D对烟草原生质体中TMV增殖的抑制效果。结果表明,在10μg/mL浓度下,Bruceine D不仅可抑制烟草叶肉细胞原生质体中TMV的增殖,还可以抑制烟草接种叶中TMV向茎部及植株上部叶片移动,且对寄主植物不造成明显的毒害。
- 陈启建董雷欧阳明安谢联辉林奇英
- 关键词：绿色荧光蛋白烟草花叶病毒
- 3种方法检测黄瓜绿斑驳花叶病毒的灵敏度对比分析被引量：7
- 2010年
- 以带有黄瓜绿斑驳花叶病毒的黄瓜叶片为材料,应用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA)、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、核酸斑点杂交(NASH)技术,进行检测灵敏度比较研究。3种方法检测灵敏度试验结果表明:DAS-ELISA、RT-PCR和斑点杂交可以检测出黄瓜病叶的最小量分别是39.6μg、0.25ng和5ng。RT-PCR检测灵敏度高于地高辛标记的核酸斑点杂交技术,DAS-ELISA检测灵敏度最低。
- 李海明沈建国吴祖建陈启建
- 关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒反转录-聚合酶链式反应核酸斑点杂交
- 诱导提取的dsRNA粗提液对黄瓜绿斑驳花叶病毒的抑制作用被引量：9
- 2011年
- 在已测序的黄瓜绿斑驳花叶病毒运动蛋白基因序列的基础上,设计特异引物,扩增全长基因,将其插入到原核表达载体L4440的2个T7启动子之间,构建能诱导形成双链RNA(dsRNA)的原核表达载体L4440-MP,并转化大肠杆菌HT115(DE3),经IPTG诱导,提取了高质量的dsRNA.将提取的dsRNA对黄瓜进行抗病性鉴定,ELISA检测结果表明,提取的dsR-NA能有效地抑制黄瓜绿斑驳花叶病毒的侵染,抗病率达到40%左右.
- 郑海刚陈启建
- 关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒RNA沉默双链RNA
