吉林省科技厅重点项目(20050402-3)
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
- 相关作者：谭岩刘力华方艳秋段秀梅许淑芬更多>>
- 相关机构：吉林大学第一医院吉林大学吉林大学中日联谊医院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅重点项目吉林省科技厅国际合作项目长春市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人肝细胞癌相关抗原661基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化被引量：1
- 2007年
- 目的:构建人肝细胞癌相关抗原661(Hepatocellular carcinoma-associated antigens661,HCA661)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白。方法:人肝细胞癌SMMC7721细胞基因组DNA经PCR扩增HCA661基因,克隆到pGEM-Teasy中进行酶切、PCR和测序鉴定;构建重组质粒pQE-HCA661,并转化大肠杆菌M15[pREP4],经IPTG诱导表达目的蛋白;镍离子亲和层析柱(Ni2+-NTA)纯化靶蛋白后进行Western blot鉴定。结果:目的基因经酶切和PCR鉴定结果与预期相符,测序结果显示目的基因与GeneBank登录的序列完全一致;工程化大肠杆菌M15[pREP4]经IPTG诱导表达约39kD的目的蛋白。Western blot鉴定结果显示,纯化重组蛋白能够分别与抗His单克隆抗体和抗HCA661多克隆抗体特异性结合。结论:本实验成功地构建了重组原核表达质粒pQE-HCA661,工程菌表达的重组HCA661带有6×His标签,并具有免疫原性,可以用于制备单克隆抗体,或用于检测患者血清中肝细胞癌抗体以预测肿瘤恶性程度。
- 李树蕾谭岩刘力华段秀梅方艳秋许淑芬
- 关键词：基因克隆原核表达蛋白纯化免疫原性
- CEA抗原表位串联体与FL共表达基因疫苗抑制小鼠肝癌细胞体内生长的研究被引量：2
- 2010年
- 目的:观察CEA抗原表位串联体与FL共表达基因疫苗抑制荷瘤小鼠肿瘤生长。方法:利用基因重组技术将CEA抗原表位三串联体和FL基因片段克隆到质粒pcDNA3.0上,肌注免疫BALB/c小鼠,观察重组基因疫苗对CEA阳性肿瘤的抑制作用、小鼠生存时间及其诱导小鼠杀伤效应细胞的活性。结果:pcDNA-triCEA625-667-sFL免疫组小鼠生存时间延长,肿瘤生长速度缓慢,瘤块较小,与对照组小鼠比较有显著性差异(P<0.01);经pcDNA-triCEA625-667-sFL免疫的小鼠脾细胞对H22-CEA+的杀伤率明显升高,差异有显著性(P<0.01)。结论:共表达三倍体CEA抗原表位和FL的基因疫苗可以有效抑制CEA阳性肿瘤在小鼠体内的生长,并增强小鼠杀伤效应细胞的活性。
- 段秀梅车媛媛黄晶石旭李丹刘力华方艳秋谭岩宋燕
- 关键词：癌胚抗原FLT3配体抗原表位基因疫苗
- CEA串连表位-HSP70融合基因疫苗诱导小鼠的表位特异性免疫应答被引量：1
- 2008年
- 目的:观察癌胚抗原(CEA)串联表位-HSP70融合基因疫苗诱导的免疫应答,为开发新型肿瘤特异性基因疫苗奠定基础。方法:在已经构建含有变异热休克蛋白(HSP)序列的基础上,插入重组CEA串联表位的编码片段获得CEA串联表位-HSP融合基因疫苗。3次肌肉注射免疫Balb/c小鼠,设立注射生理盐水的阴性对照组、注射氢氧化铝佐剂混悬CEA串联表位的阳性对照组及注射pCITriCEA625-667-mtHSP70的实验组。FCM分析脾脏T细胞亚群;体外培养脾细胞,ELISA检测培养上清中干扰素γ(IFNγ)的相对含量;同时测定小鼠血清CEA特异性抗体的滴度。结果:阴性对照组脾细胞中CD3+和CD4+T细胞分别为55.1%±6.1%和30.2%±4.1%;实验组脾细胞中CD3+和CD4+T细胞分别为78.7%±9.2%和48.9%±4.7%,两组比较差异有显著性(P<0.01)。其体外特异性抗原肽诱导的IFNγ分泌处于本底水平,可视为生理性参数,体外非特异性和特异性的IFNγ分泌分别增加3和6倍(P<0.01)。血清中CEA表位特异性抗体滴度阴性对照组为0,阳性对照组<1:500,而融合基因疫苗免疫组达到1:4000。结论:CEA串联表位-HSP融合基因疫苗在体内诱导以激发辅助性T细胞为特征的免疫应答。
- 安力彬刘力华方艳秋李丹段秀梅许淑芬李树蕾谭岩宋燕
- 关键词：热休克蛋白70
- CEA迷你基因原核表达及其诱导小鼠特异性淋巴细胞增殖的研究被引量：2
- 2008年
- 目的在原核细胞中表达人癌胚抗原（CEA）的迷你基因短肽，纯化及鉴定目的蛋白，并检测其在小鼠体内的抗原性。方法利用PCR技术从人基因组中得到一段来源于CEA的DNA序列，其中包含两个编码分别能被HLA—DR4／9、HLA—DR53以及HLA-DR4／7／9型别的人群所识别辅助性T细胞（HTL）表位的迷你基因，构建重组表达质粒pQE30-CEA625-667，在大肠杆菌M15中诱导表达。Westren Blot杂交鉴定、镍凝胶亲和层析法纯化目的蛋白。3H—TdR掺入法检测目的短肽诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应。结果CEA625-667短肽在大肠杆菌M15中以包涵体形式表达。Western—blot结果显示，在相对分子质量约6700处有表达产物与6×hismAb特异性结合带。镍柱纯化后可得到纯化的目的蛋白.3H-TdR掺入实验所得不同浓度的CEA625-667与小鼠脾细胞共孵育7～9d后的刺激指数相继达到对照组的10倍以上。结论成功诱导了CEA625-667短肽的原核表达，通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的CEA625-667短肽，并证明在一定浓度下目的短肽可于体外诱导小鼠的特异性淋巴细胞增殖。为CEA625-667迷你基因作为表位疫苗在抗肿瘤方面的进一步研究提供条件。
- 李丹方艳秋谭岩刘力华段秀梅许淑芬
- 关键词：癌胚抗原表位大肠杆菌
- 过继免疫治疗对手术后肺癌患者外周血免疫细胞表型影响的研究被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨C IK过继免疫治疗对手术后肺癌患者免疫功能的影响。方法:采用流式细胞术检测40例肺癌患者外周血T细胞、B细胞和NK细胞表型。结果:肺癌患者CD3+、CD4+、CD4/CD8比值明显低于对照组并呈显著性差异,而CD8+细胞高于对照组(P<0.01)。经C IK治疗后CD3+、CD4+、CD3-/CD16+56+细胞和CD4/CD8比值都升高,其中CD4+、CD3-/CD16+56+细胞与治疗前比较呈显著性差异(P<0.05),而CD8+细胞与治疗前比较降低(P<0.05);CD19在治疗后稍有增高趋势,但无显著性差异。结论:C IK过继免疫治疗对肺癌患者免疫功能的恢复具有促进作用。
- 卞隽谭岩方艳秋姜艳芳许淑芬刘力华段秀梅
- 关键词：过继免疫治疗CIK肺癌免疫表型
- 基因佐剂结核杆菌HSP70增强HCA661基因疫苗免疫应答被引量：7
- 2008年
- 目的:评价结核分枝杆菌HSP70(Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mtHSP70)羧基端作为基因佐剂对HCA661(Hepatocellular carcinoma associated antigens 661)基因疫苗免疫效果的影响。方法:将HCA661及与mtHSP70羧基端的串联体分别克隆到pCI-neo中构建基因疫苗;将eGFP及与mtHSP70羧基端的串联体分别克隆到pCI-neo,体外转染φA细胞,根据eGFP的表达评价重组质粒中靶基因的转录表达效率。基因疫苗免疫BALB/c小鼠,SABC、Western blot检测免疫血清中特异性HCA661抗体;流式细胞术、ELISA法检测免疫血清中特异性HCA661抗体水平。结果:重组质粒构建成功;80%φA细胞转染eGFP后呈现绿色荧光;单基因和融合基因疫苗组动物均产生了针对HCA661的特异性抗体,融合疫苗组诱导的抗体水平较单基因疫苗组显著增高,融合基因疫苗组未产生针对mtHSP70的抗体。结论:mtHSP70羧基端作为基因佐剂增强机体对HCA661融合基因疫苗的特异性免疫应答。
- 李树蕾谭岩刘力华段秀梅方艳秋许淑芬车媛媛
- 关键词：融合基因疫苗基因佐剂
