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拟穴青蟹14-3-3ζ基因cDNA的克隆和表达分析被引量：1: 2013年; 利用SMART RACE技术克隆得到拟穴青蟹ERK信号通路的酪氨酸3-加单氧酶/色氨酸5-加单氧酶激活蛋白ζ(14-3-3ζ蛋白)基因。其cDNA全长1 092 bp,编码248个氨基酸。实时定量PCR结果显示14-3-3ζ基因在各组织器官均有表达,但在卵巢中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),在卵黄发生中期14-3-3ζ的表达量显著高于增殖期(P<0.05),推测其在青蟹卵巢中发挥重要作用。; 王晓伟高洁张子平邹志华贾锡伟林鹏王艺磊; 关键词：拟穴青蟹卵巢发育

拟穴青蟹泛素基因的克隆及其在性腺发育过程中的表达被引量：9: 2012年; 在实验室所构建的拟穴青蟹（Scylla paramamosain）EST文库基础上筛选出泛素基因（Ubquitin,Sp-Ub）片段,利用RACE技术克隆其全长cDNA序列,并对其结构进行分析;利用实时定量PCR技术检测该基因在雌蟹各组织及性腺不同发育阶段中的表达情况。结果显示,Sp-Ub基因全长555 bp,编码154个氨基酸,其第1~76个氨基酸为高度保守的泛素结构域,第101~147的氨基酸残基为典型的核糖体蛋白S27a的保守区域;预测的泛素结构域二级结构由5个延伸链,1个α-螺旋及其连接的无规卷曲构成,Sp Ub三维结构由1个α-螺旋以及5个β片层。多重比对表明不同物种的泛素结构域和核糖体蛋白S27a结构域在进化过程中高度保守。定量PCR结果显示,Sp-Ub在鳃中的表达水平最高,卵巢次之,各组织间的表达无显著性差异,说明Sp-Ub基因在各组织中的表达恒定,且具有普遍作用;在卵巢发育过程中,Sp-Ub在O5期的表达水平最高,O1、O4期次之,O2期表达量最低且与O5期具有显著差异（P〈0.05）;在精巢发育过程中,Sp-Ub在T2期的表达量最高,其次为T1期,T3期表达最低且与T2期具有显著差异（P〈0.05）。本研究结果说明了Sp-Ub对拟穴青蟹生殖细胞的生长和发育可能具有重要作用。本研究将为甲壳动物性腺发育调控的分子机制奠定基础。; 戴燕彬韩坤煌颜素芬邹志华张子平王艺磊; 关键词：拟穴青蟹泛素基因性腺发育

Cloning and Expression of erk2 in the Developing Ovary of Mud Crab Scylla paramamosain: ＜正＞In our previous project,identified partial sequence of extracellular signal-regulated kinase 2（erk2） was id...; Ani Ma~1,Ziping Zhang~2,Yilei Wang~(1*),Zhihua Zou~1,Mingjun Fu~1,Peng Lin~1 1.The Key Laboratory of Science and Technology for Aquaculture and Food Safety, Fisheries College,Jimei University,Xiamen,China.361021 2.Department of Chemistry & Biochemistry,Texas State University,San Marcos,TX,78666,USA; 文献传递

拟穴青蟹OTUB的分子克隆及其在性腺发育过程中的表达被引量：1: 2013年; OTUB1是哺乳动物雌激素信号通路中的一个关键因子,它可以使雌激素受体α(ERα)去泛素化并抑制其转录活性。本研究从实验室拟穴青蟹(Scylla paramamosain)转录组测序数据库中筛选出OTUB基因片段,利用SMART RACE技术克隆得到Sp-OTUB的cDNA全长。该序列全长1 261 bp,包括5'非编码区(5'-UTR)40 bp,开放阅读框(ORF)804 bp和3'非编码区(3'-UTR)417 bp。其ORF编码267个氨基酸,预测其分子量为31 ku。该蛋白序列中包含一个OTU样的半胱氨酸蛋白酶催化结构域和一个由半胱氨酸(C)、天冬氨酸(D)和组氨酸(H)组成的催化三联体。实时定量PCR结果显示,Sp-OTUB在成熟拟穴青蟹各组织器官中均有表达,其中在血淋巴中的表达量最大,精巢中表达量最低。在卵巢发育过程中,Sp-OTUB的表达量在卵巢增值期为最大,与其他各时期具有显著差异;在精巢发育各阶段,Sp-OTUB表达量在精子细胞期达到最大,显著高于精母细胞期和成熟精子期。同源系统进化分析Sp-OTUB与大多数物种的OTUB1聚为一支,与肩突硬蜱(Ixodes scapularis)和紫海胆(Strongylocentrotuspurpuratus)亲缘关系最近。实验结果初步显示Sp-OTUB在拟穴青蟹生殖调控方面可能发挥重要作用。; 高洁邹志华贾锡伟林鹏张子平王艺磊; 关键词：拟穴青蟹性腺发育

拟穴青蟹PHGPx基因的克隆及其表达分析被引量：4: 2015年; 为了探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase,PHGPx)在拟穴青蟹免疫防御反应和精巢发育中的作用,实验从拟穴青蟹转录组数据库中筛选出PHGPx基因的EST序列,利用SM ART-RACE技术克隆得到该基因的全长cDNA,命名为SpPHGPx。通过相关生物信息学软件对该序列进行分析,运用实时荧光定量技术对Sp-PHGPx mRNA在成熟雌雄拟穴青蟹各组织、性腺不同发育时期以及H2O2和脂多糖(LPS)应激下鳃和肝胰腺组织中的表达情况进行分析。结果发现,Sp-PHGPx基因的cDNA全长为1 024 bp,编码180个氨基酸。同源性分析和系统进化树分析表明,Sp-PHGPx与其他物种的PHGPx(GPx4)亲缘关系较近。实时定量PCR结果显示,Sp-PHGPx在成熟拟穴青蟹雌雄各组织中均有不同程度的表达,其中精巢的表达量最高。在性腺不同发育阶段,Sp-PHGPx在卵巢发育过程中的表达量差异不显著;而在精巢发育过程中,其表达量在精子细胞期(T2期)显著高于精母细胞期(T1期)和成熟精子期(T3期),同时也显著高于卵巢发育各时期的表达量。在LPS应激下,鳃和肝胰腺中Sp-PHGPx的表达量分别在6和12 h显著上调;H2O2应激下,鳃中的表达量在3 h显著升高,肝胰腺中的表达量在被检测的各时相中无显著差异。研究表明,Sp-PHGPx可能在免疫防御反应以及精巢的发育和成熟等过程中发挥着重要作用。; 刘春云傅明骏张子平邹志华贾锡伟王艺磊; 关键词：拟穴青蟹基因克隆性腺发育

Cloning and characterization of a vasa gene from the green mud crab Scylla paramamosain and its expression during gonadal development and gametogenesis: ＜正＞VASA is an important member of DEAD-box family,and it is one of the important regulatory factors which dete...; Yi-Lei WANG~1,Yu-Dong CHEN~1,Zhi-HuaZOU~1,Zi-PingZHANG~2 1 The Key Laboratory of Science and Technology for Aquaculture and Food Safety,Fisheries College,Jimei University,Xiamen 361021,China; 文献传递

拟穴青蟹卵巢蛋白质双向电泳的样品制备方法被引量：4: 2011年; 为探索适用于拟穴青蟹卵巢蛋白质双向电泳的样品制备方法,比较了TCA/丙酮沉淀法和3种裂解液抽提法对总蛋白的提取效果,4种方法分别得到133、369、306和417个蛋白点。采用裂解液Ⅲ(7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4% CHAPS、40 mmol/L Tris-base、65 mmol/L DTT、2% IPG Buffer、Protease in hibitor cocktail、1 mmol/L EDTA)提取蛋白所得图谱效果最好,背景清晰,蛋白点最多。; 王为刚王艺磊张子平冯建军陈锦民邹志华谢芳靖林鹏; 关键词：拟穴青蟹卵巢蛋白质组双向电泳

拟穴青蟹性腺发育的分子机制研究—从单个基因到转录组: ＜正＞拟穴青蟹是我国重要的水产养殖对象。雌蟹的营养价值和市场价格均远高于同龄雄蟹。若能培育出雌蟹并进行单性化养殖将可大幅度提高养殖产量、商品的规格和价值。同时,甲壳动物性腺发育调控的机制仍然有许多未解之处,限制了苗种培育...; 王艺磊张子平邹志华傅明骏韩坤煌马阿妮陈玉冬戴燕彬; 文献传递

拟穴青蟹受精膜形成过程中线粒体的变化及功能: 2011年; 采用透射电子显微镜研究了拟穴青蟹受精膜形成过程中线粒体的变化及其功能。结果显示,大量线粒体首先高度密集于即将发生胞吐的皮质中;随着胞吐的发生,线粒体也随之快速分散到皮层反应部位,线粒体通过分裂、出芽等方式而迅速增多,内质中的线粒体大量向皮质迁移,参与皮层反应;当受精膜开始举起时,线粒体多聚集在新质膜下,参与新质膜的修复和形成;受精膜完全举起后,皮质中的线粒体迅速减少。线粒体在形态、数量及分布等方面的变化,能够反映受精膜形成不同阶段生理活动的旺盛程度以及需能情况,并从细胞水平阐释受精膜形成机制。; 陈锦民李少菁王桂忠叶海辉王艺磊; 关键词：拟穴青蟹线粒体皮层反应

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国家自然科学基金(31072200)

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