国家自然科学基金(30130070)
- 作品数：33 被引量：114H指数：6
- 相关作者：董小平韩俊张宝云高晨高建梅更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心西安交通大学中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 羊瘙痒病小鼠适应株ME7可突破种属屏障颅内感染金黄地鼠被引量：1
- 2003年
- 目的 羊瘙痒病感染因子在哺乳动物种属间的传播认为受种属屏障的限制 ,研究羊瘙痒病小鼠适应株ME7在仓鼠中的发病特征。方法 ME7毒株颅内接种至金黄地鼠 ,观测疾病发生的潜伏期、临床病程和主要症状 ;Westernblot和电子显微镜动态观测脑组织中PrPSc和痒病相关纤维的出现和分子特征。结果 与以往报道的金黄地鼠适应株 2 6 3K和小鼠适应株 139A不同 ,在接种后 4 6 0～ 5 30d后 ,感染动物出现明显的症状 ,主要为消瘦、嗜睡、运动迟缓 ;感染动物脑组织中存在有羊瘙痒病相关纤维和PrP -res;羊瘙痒病相关纤维和PrP -res的出现明显早于临床发病 ;比较三种毒株在仓鼠和小鼠脑组织中出现的PrP -res发现虽然在电泳移动位置上无差异 ,但ME7和 139A的无糖分子比例明显降低。结论 小鼠适应株ME7可突破种属屏障感染金黄地鼠 ;不同毒株在潜伏期、主要临床症状和临床病程等方面有明显差异 ;PrP -res的形成不仅受接种毒株的影响 。
- 张瑾张宝云高建梅高晨周晓勃刘勇董小平
- 关键词：羊瘙痒病小鼠颅内感染
- 微管相关蛋白tau与朊蛋白的相互作用被引量：6
- 2006年
- 微管相关蛋白tau参与了许多神经退行性疾病的发生, 其中包括一些人类可传播性海绵状脑病. 为了探讨tau与朊蛋白（PrP）之间可能存在的关系, 首先通过GST pull-down和免疫共沉淀等技术发现重组tau蛋白可通过微管结合区与来源于正常叙利亚仓鼠脑组织中的正常细胞膜朊蛋白（PrP^C）和羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织的异常朊蛋白（PrP^Sc）相结合. 利用免疫共沉淀实验发现在正常和羊瘙痒因子感染的仓鼠脑组织中存在tau蛋白与PrP^C和PrP^Sc的相互作用, 并且利用激光共聚焦方法检测到PrP和tau蛋白在CHO细胞内具有共定位的关系. 为了确定PrP与tau蛋白相互作用的部位, 构建了不同区域的PrP片段, 从而证明PrP与tau蛋白相互作用的区域位于PrP的N端序列（23～91 aa）. PrP与tau蛋白分子间相互作用的直接实验证据提示tau蛋白可能参与PrP的正常生理功能以及朊病毒病的病理过程.
- 韩俊张瑾姚海兰王小凡李锋高晨周伟张宝云董小平
- 关键词：朊蛋白蛋白相互作用
- Doppel(叠朊蛋白)与Prion疾病
- 2004年
- Doppel是近年发现的朊蛋白(PrP)类似蛋白,一级结构与PrPcC端的2/3有25％的同源性。一些PrP基因敲除的转基因小鼠由于Doppel高表达,引起神经细胞变性导致小鼠发生共济失调,从而推测Doppel可能与PrP一样在Prion疾病中发挥重要作用。
- 肖新莉刘勇董小平
- 关键词：DOPPEL转基因小鼠
- 超声处理对羊瘙痒病脑组织中PrP^(Sc)聚集状态的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 研究超声处理对感染羊瘙痒症仓鼠脑组织中PrPSc聚集状态的影响 ,寻找产生PrPSc低聚体的条件。方法 裂解液制备脑组织提取物 ,用各种超声条件处理不同阶段的脑组织提取物 ;以蛋白酶消化后的Westernblot方法和图象分析系统观测PrPSc蛋白的分布和聚集状态。结果 适当的超声处理 (15s共 30次 )可增加脑组织匀浆上清中PrPSc含量 1 2 9～ 1 5 8倍 ;同样条件下超声处理可明显增加羊瘙痒因子 2 6 3K感染仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量 ,而对正常对照仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量影响不大 ;对经常规高速离心获得的PrPSc的超声处理显示约 90 %的PrPSc存在于离心上清液中。结论 对感染动物脑组织进行超声处理可增加PrPSc 的提取量 ,利于实验室检测。适当的超声处理可破碎大的相对分子质量的PrPSc聚集物 ,产生小的相对分子质量的PrPSc产物。
- 周晓勃高建梅高晨张宝云袁育康董小平
- 关键词：超声处理瘙痒病脑组织
- 中国不同民族人群中PrP蛋白基因第129位氨基酸多态性分析被引量：22
- 2002年
- 目的 研究人类PrP基因 (PRNP)第 1 2 9位氨基酸多态性在中国汉族及维吾尔族人群中的分布。方法 从抽样人群外周血中提取白细胞DNA ,进行聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP) ,使用SASforWindows 6 1 2对结果进行分析。结果 83例汉族人群 1 2 9Met基因频率为 97 0 % ,1 2 9Val为 3 0 % ;35例维吾尔族人群 1 2 9Met基因频率为 91 4% ,1 2 9Val为 8 6 %。分别比较不同人群PRNP第 1 2 9位氨基酸基因型的分布情况 ,结果显示汉族人群和维吾尔族人群 (P =0 0 4 90 )、汉族人群和高加索人群 (P =0 0 0 0 5)、维吾尔族人群和高加索人群间 (P =0 0 0 1 0 )差异有显著性 ,而汉族人群与大和民族人群间差异无显著性 (P =0 50 4 0 )。结论 中国汉族人群PRNP第 1 2 9位氨基酸基因型的分布与大和民族人群相似 。
- 侯星生高晨张宝云周伟董小平刘红
- 关键词：朊病毒多态现象遗传学
- 羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠后半数致死量(LD_(50))的测定被引量：9
- 2006年
- 目的测定羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠后的LD50。方法将感染羊瘙痒因子263K的仓鼠脑组织用生理盐水制成10%(w/v)脑组织匀浆,梯度稀释后感染仓鼠,观察仓鼠的发病情况。以Reed-Muench公式计算LD50,用West-ern blot方法检测观察期结束后发病及仍存活的仓鼠脑组织、脾组织中抵抗蛋白酶K的PrPSc。结果当颅内接种稀释度由低到高变化时,仓鼠发病的潜伏期及病程同时也由短到长发生变化。发病仓鼠脑组织中可以检测到PrPSc,但是PrPSc的量在不同的组之间无太大差别。观察期结束后,仍存活的仓鼠脑组织中未检测到具有PK抗性的PrP信号。结论本实验室保存的羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠的LD50为9.2-log10LD50i.c.units/0.001g brain,即当对仓鼠颅内接种10μl羊瘙痒因子263K的10-9.2稀释液时,50%的仓鼠会死亡。
- 石琦张宝云高晨韩俊高永军周玉玲董小平
- 关键词：半数致死量
- 脂筏与感染性疾病被引量：4
- 2006年
- 脂筏是生物膜中含有特殊脂质和蛋白质的微区,不仅是跨膜信号转导等多种生命活动的重要参与者,而且在感染性疾病的发生和发展中扮演了重要的角色。脂筏是多种病原体进入宿主细胞的位点,支持病毒粒子的组装和出芽,其信号转导功能一方面可以启动宿主细胞的保护性免疫应答,另一方面也被病原体利用,以利于病原体的传播和疾病发生。此外,脂筏在朊蛋白感染、HCV基因组复制、多种细菌毒素作用以及维持疟原虫的胞内寄生生活等方面也都有重要作用。脂筏在感染性疾病中的重要作用提示,它很有可能成为扭转这些疾病发生和进程以及治疗这些疾病的重要入手点。
- 华方圆许彩民潘华珍
- 关键词：脂筏感染性疾病胆固醇
- 亚硒酸钠诱导白血病NB4细胞凋亡的蛋白质组学初步分析
- 目的:研究亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡蛋白质组的变化。本研究工作是在本课题组前期应用基因芯片分析亚硒酸钠诱白血病NB4细胞调亡工作的基础上,发现有34个差异基因改变。这些差异基因主要是细胞周期蛋白,线立体调亡信号通路相关蛋...
- 董华天翼王恒樑许彩民
- 关键词：亚硒酸钠白血病NB4细胞凋亡
- 脑脊液127份14-3-3蛋白检测结果及分析被引量：2
- 2005年
- 郭燕军周伟冯子敬韩俊李伟荣赵伟秦王得新董小平
- 关键词：脑脊液实验室诊断方法病理检测CJD克雅病
- 多种缺损及突变的PrP蛋白在杆状病毒中的表达和纯化被引量：9
- 2003年
- PrP蛋白多肽序列上存在有不同的功能区域 ,影响着蛋白质构象、理化特性和生物学功能。为了获得不同缺损及突变的仓鼠PrP蛋白 ,以PCR方法获得不同大小的PrP基因片段 ,利用PCR大引物点诱变法获得带有突变糖基化位点PrP序列。所有PCR产物测序鉴定正确后 ,分别与pFASTBAC Hb质粒连接 ,与穿梭载体DH10BAC转座 ,构建各种重组病毒。Westernblot证实 ,8种不同长度的仓鼠PrP蛋白可在昆虫细胞Sf9中表达 ,包括全序列的PrP1 2 31,信号肽缺失的PrP2 3 2 31;N端缺损的PrP90 2 31和PrP12 0 2 31;C端缺损的PrP1 199、PrP1 174和PrP1 16 0。糖基化位点突变 :PrP2 3 2 31(N181Q)。其中不带信号肽序列的PrP蛋白均呈HIS融合蛋白 ,而N端带有信号肽的PrP蛋白则不能与Ni NTA琼脂糖亲和层析柱结合 ,但可以同PrP特异性抗体发生免疫沉淀反应。这提示PrP信号肽序列在昆虫细胞中可能也发挥着与哺乳动物细胞相似的作用。不同缺损及突变的PrP蛋白的表达和纯化为进行蛋白生物学性状研究奠定了基础。
- 张瑾张福萍聂凯陈岚周伟刘勇董小平
- 关键词：PRP杆状病毒信号肽
