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抗原致敏树突状细胞诱导CIK对胃癌细胞杀伤作用的研究被引量：6: 2006年; [目的]探讨抗原致敏的树突状细胞(DC)诱导CIK(cytok ineinduced killer)的杀伤作用。[方法]联合应用粒/巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素-4(IL-4)从外周血单个核细胞中培养DC,用人胃癌细胞SGC提取肿瘤抗原致敏DC,流式细胞仪检测致敏前后DC表型的变化,用人胃癌细胞SGC提取肿瘤抗原致敏DC诱导CIK,用MTT法检测淋巴细胞的增殖及原致敏DC诱导CIK对SGC的杀伤效应。[结果]①利用GM-CSF及IL-4可从外周血单个核细胞中获取DC,肿瘤抗原可促进DC的成熟,肿瘤抗原致敏可促进DC成熟,细胞表面分子HLA-DR、CD83、CD86升高,CD14下降。②混合淋巴细胞反应提示成熟的DC可促进CIK细胞增殖。③SGC肿瘤抗原致敏DC诱导CIK对胃癌细胞SGC有特异性的杀伤作用,随着效靶比的升高,杀伤效应随之增强。[结论]抗原致敏的DC可通过诱导特异性CIK细胞及促进CIK细胞增殖两方面显著提高CIK细胞的杀瘤效应。; 胡廷辉应敏刚郑秋红龚福生谢云青; 关键词：树突状细胞 CIK

人热休克蛋白70的原核表达和纯化的实验研究被引量：1: 2007年; 目的在大肠杆菌中表达人源性热休克蛋白70基因并纯化表达产物。方法以人HSP0 cDNA为模板,采用PCR方法进行扩增,将PCR产物克隆到表达载体pET30a上,将重组质粒pET30a-HSP70转化大肠杆菌BL21上,经IPTG诱导后,表达产物进行SDS-PAGE及Western blot验证并纯化。结果应用PCR方法扩增出约1900bp的目的片段;经酶切鉴定和DNA测序证实,HSP70基因成功地克隆到原核表达载体pET-30a上;转入重组质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE,发现在分子量约为70kD处有蛋白表达,Western blot证实其为目的蛋白,纯化后的HSP70纯度达到90%以上。结论在大肠杆菌中已成功地表达了HSP70蛋白并且经过纯化,为研究HSP70的结构、功能及临床应用提供了必要条件。; 应敏刚林绍峰谢云青郑秋红; 关键词：热休克蛋白70 基因重组原核表达纯化

小鼠肠癌HSP70多肽复合物的纯化及其抗肿瘤免疫效应被引量：2: 2007年; 目的:应用AKTA-purifier100液相层析系统,建立分离和纯化热休克蛋白70(HSP70)多肽复合物的方法,并观察其抗肿瘤免疫保护效应。方法:采用DE-AE-Sepharose离子交换层析和ADP-Ag-arose亲和层析,从热处理的BALB/c鼠源性结肠癌细胞(CT26)制备裂解液中分离、纯化HSP70多肽复合物,并通过主动免疫保护实验观察其抗肿瘤免疫效应。结果:纯化蛋白经鉴定为相对分子质量70×103左右的HSP70多肽复合物;平均1g湿重肿瘤细胞可获得63.63μgHSP70多肽复合物;HSP70主动免疫的小鼠可抵抗CT26细胞的攻击。结论:用此层析法可分离纯度较高的HSP70,并可诱导明显的抗肿瘤免疫保护效应。; 龚福生郑秋红应敏刚刘胜谢云青陈蓉明; 关键词：免疫色谱法小鼠

pIRES-CEA-HSP70核酸疫苗诱导杀伤结肠癌细胞的研究: 2006年; 目的:观察核酸疫苗pIRES-CEA-HSP70诱导小鼠产生的细胞免疫应答,以探索结肠癌术后复发的防治新途径。方法:将pIRES、pIRES-CEA、pIRES-HSP70、pIRES-CEA-HSP70制作核酸疫苗免疫小鼠,采用MTT比色法,检测小鼠脾淋巴细胞对结肠癌细胞CW-2的杀伤效应。结果:核酸疫苗pIRES-CEA-HSP70免疫组的小鼠脾淋巴细胞,在效靶比50∶1、25∶1、12.5∶1、6.25∶1下,对CW-2的杀伤率分别为(35.43±3.88)%(、26.88±3.17)%(、20.33±1.92)%(、15.55±0.76)%,均明显高于其余3组,差异有统计学显著性(P<0.01)。pIRES、pIRES-CEA、pIRES-HSP70 3组杀伤率差异无显著性(P>0.05)。结论:核酸疫苗pIRES-CEA-HSP70可诱导小鼠产生特异性细胞免疫应答,为其用于结肠癌的治疗提供实验基础。; 应敏刚蔡述华郑秋红陈蓉明龚福生谢云青; 关键词：热休克蛋白质类70

HSP70-TKD诱导的NK细胞杀伤肝癌细胞的实验研究被引量：6: 2008年; 目的:探讨从人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中获得足够数量和高细胞毒活性的CD3-CD56+NK细胞的方法,并观察其对肝癌细胞HepG2杀伤效应。方法:以干细胞培养基(SCGM)为基础培养基,在不同浓度的抗CD3单抗、IL-2和PHA的培养条件下,从健康人PBMC中高效扩增获得CD3-CD56+NK细胞;以不同剂量的HSP70-TKD诱导NK细胞的活性,MTT法测定HSP70-TKD诱导的NK细胞对HepG2和榄香烯处理的HepG2细胞的杀伤活性。结果:建立了从人PBMC体外扩增CD3-CD56+NK细胞体系:以SCGM为基础培养基,在600U/mLIL-2、500μg/L抗CD3单抗和50mg/LPHA联合作用下,培养14d细胞扩增了116倍,含有(66.97±8.76)%CD3-CD56+NK细胞;HSP70-TKD诱导的NK细胞对HepG2杀伤活性低,与未经TKD诱导的NK细胞之间差异无统计学意义,P=0.298;而对榄香烯处理过的HepG2杀伤活性高,诱导组与未诱导组之间差异有统计学意义,P=0.008;当TKD浓度为2.0mg/L时,杀伤活性最高为(58.8±3.4)%。结论:以干细胞生长培养基为基础培养基,在抗CD3单抗和IL-2协同刺激下体外大量扩增NK细胞,HSP70-TKD诱导的NK细胞对细胞膜HSP70阳性的肿瘤细胞杀伤活性高,而对于细胞膜HSP70低表达的肿瘤细胞杀伤活性低。; 陈蓉明郑秋红应敏刚龚福生汪相如; 关键词：肝肿瘤肿瘤细胞杀伤细胞

真核双表达载体pIRES-CEA-HSP70的构建与鉴定被引量：1: 2005年; 目的构建癌胚抗原(CEA)与热休克蛋白70(HSP70)的真核双表达质粒,并检测其在体外的表达。方法从结肠癌及正常肝组织中经RTPCR扩增获得CEA及HSP70cDNA,并将其定向克隆至真核双表达质粒pIRES中,重组质粒pIRESCEA及pIRESCEAHSP70,经酶切及测序鉴定后,分别转染仓鼠卵巢细胞(CHO);经RTPCR及ELISA法检测,CEA和HSP70在CHO细胞中得到有效表达。结果真核双表达载体pIRESCEAHSP70构建成功且CEA和HSP70在CHO细胞中得到有效表达。结论真核表达载体pIRESCEAHSP70的成功构建为治疗CEA阳性肿瘤提供一定的实验基础。; 蔡述华应敏刚郑秋红陈蓉明龚福生谢云青; 关键词：癌胚抗原热休克蛋白质类

热休克蛋白70与肿瘤免疫被引量：2: 2007年; 热休克蛋白可以与肿瘤抗原多肽结合,形成热休克蛋白-多肽复合物,抗原性由多肽所决定,而热休克蛋白作为分子伴侣,可以增强肿瘤免疫。这种特性可以用于治疗肿瘤。; 林绍峰应敏刚; 关键词：肿瘤免疫热休克蛋白70

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福建省自然科学基金(C0410043)