内蒙古自治区自然科学基金(2012ZD03)
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
- 相关作者：刘宗正张焱如周欢敏高晋芳韦林盖更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学青岛市畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金内蒙古自治区高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 蒙古羊脂肪来源间充质干细胞的分离培养及体外分化诱导被引量：1
- 2014年
- 建立蒙古羊脂肪间充质干细胞(Adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)体外分离培养方法,并对其生物学特性和多向分化潜能进行鉴定。利用I型胶原酶将蒙古羊脂肪组织消化后,离心得到单核细胞,并进行传代培养,测定其倍增时间。采用甲苯胺蓝染色和PAS染色法以及RT-PCR法,分别从组织学水平和基因水平对第3代蒙古羊ADSCs向成神经和成心肌的诱导分化情况进行鉴定。结果显示,分离得到的脂肪间充质干细胞大小较为均匀,呈梭形或星形的成纤维细胞样;传代接种后第4天细胞进入指数生长期,第8天进入平台期,前10代ADSCs的倍增时间平均为34.1 h;经成神经诱导后,细胞呈胶质细胞状,RT-PCR检测ENO2和GFAP基因表达呈阳性;心肌诱导后,细胞体积增大,多呈长梭形,平行排列,诱导15 d后部分细胞可见类肌管样结构,PAS染色可见明显的糖原沉积,RT-PCR检测NKX2.5和GATA-4基因表达呈阳性。表明获得的蒙古羊ADSCs具有多向分化潜能。
- 高晋芳刘宗正韦林盖周欢敏张焱如曹俊伟
- 关键词：蒙古羊脂肪间充质干细胞脂肪组织诱导分化
- 端粒逆转录酶基因修饰对绵羊骨髓间充质干细胞端粒酶活性影响的研究被引量：1
- 2015年
- 骨髓间充质干细胞(BMSC)具有多向分化的特性,但其生命周期有限,为进一步探讨端粒逆转录酶(TERT)对端粒酶活性的影响,本试验利用将外源性TERT导入间充质干细胞技术,构建重组表达载体pcDNA3.1-EGFP-TERT,将其转染BMSC,通过筛选及鉴定,结果显示成功构建了重组表达载体pcDNA3.1-EGFP-TERT。将TERT-BMSCs在体外进行传代培养及生长曲线的测定,利用PCR技术对其原有干细胞因子的表达情况进行了鉴定。结果显示,TERT-BMSC具有快速扩增的能力,细胞形态良好,且仍具有干细胞特性。本试验结果揭示了外源性TERT基因的表达能激活绵羊BMSC的端粒酶活性。
- 崔岩李浩天刘宗正曹俊伟张焱如
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- 骨髓间充质干细胞为核供体的克隆绵羊的生产与鉴定
- 2016年
- 本研究旨在采用骨髓间充质干细胞(BMSCs)为核供体进行体细胞核移植,以获得成体干细胞克隆绵羊。选择幼体绵羊BMSCs为核供体,构建重构胚进行克隆胚胎移植,克隆绵羊诞生后,选取IASG上公布的绵羊10个微卫星标记位点,PCR扩增克隆羊、供体细胞及代孕母羊微卫星DNA,利用Quantity One软件进行基因分型,计算供体细胞与克隆羊之间的父子关系相对机会(RCP)值。结果显示,以幼体绵羊BMSCs为核供体,与去核成熟卵母细胞进行核移植,构建重构胚进行电融合,其融合率达80.62%,重构胚发育至桑椹胚阶段,经手术植入20只代孕母羊,获得克隆绵羊5只,成活3只。克隆羊基因型与供体细胞一致,供体细胞与克隆羊之间的RCP≥99.999%,证明克隆羊来自幼体绵羊BMSCs。本试验最终成功获得了首例以BMSCs为核供体的克隆绵羊。
- 郭园刘宗正刘乐孟凡华张焱如周欢敏刘春霞
- 关键词：骨髓间充质干细胞体细胞核移植克隆绵羊
- 蒙古羊骨髓间充质干细胞的分离培养及多向诱导分化被引量：6
- 2013年
- 本研究旨在建立蒙古羊骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)体外分离、纯化、增殖方法,诱导其向脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞分化。穿刺法抽取蒙古羊骨髓组织,采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化BMSC,增殖,并测定其生长曲线及细胞倍增时间。对第3代蒙古羊BMSC进行成脂、成骨及成软骨诱导,观察诱导后的细胞形态。采用油红O、茜素红、HE等染色法在组织学水平对BMSC进行成脂、成骨和成软骨分化鉴定。结果显示,蒙古羊BMSC呈现均一梭形成纤维细胞样生长,生长曲线呈S型,生长增殖能力良好。在不同分化诱导之后,细胞呈现脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞的表型特征。表明获得的蒙古羊BMSC具有多向分化潜能,所分离细胞确为骨髓间充质干细胞。
- 韦林盖刘宗正高晋芳周欢敏张焱如
- 关键词：蒙古羊骨髓间充质干细胞细胞培养多向分化
