天津市自然科学基金(05YFJMJC03200)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 重组腺病毒表达载体pDC316/PEDF的构建
- 2007年
- 目的:构建色素上皮衍生因子(PEDF)基因腺病毒表达载体,为老年性黄斑变性基因治疗奠定基础。方法:从大鼠视网膜组织中提取总RNA,RT-PCR扩增PEDF基因cDNA,并将回收的PEDF基因克隆入质粒pGEM-Teasy载体中,亚克隆入腺病毒表达载体质粒pDC316中,并以DNA序列分析加以证实。结果:基因测序结果表明,所克隆的PEDF基因包含了大鼠PEDF基因阅读框内的全部序列,与NCBISequenceViewer中公布的大鼠PEDFmRNA序列(NM-177927)完全一致。结论:PEDF基因腺病毒表达载体的成功构建,为下一步体外包装成病毒颗粒研究基因治疗脉络膜新生血管奠定了基础。
- 于燕萍崔靖王颖颜华
- 关键词：神经生长因子类重组蛋白质类腺病毒科克隆脉络膜新生血管化
- 大鼠PEDF基因的克隆及腺病毒表达载体的构建被引量：1
- 2007年
- 目的构建PEDF基因腺病毒表达载体,为基因治疗年龄相关性黄斑变性(AMD)奠定基础。方法从大鼠视网膜组织中提取总RNA,RT-PCR扩增PEDF基因cDNA,并将回收的PEDF基因克隆入质粒pGEM-Teasy载体中,亚克隆入腺病毒表达载体质粒pDC316中,DNA序列分析加以证实。利用腺病毒Admax系统,通过含有目的基因片段PEDF的穿梭载体pDC316/PEDF和病毒骨架质粒共转染293细胞的方法包装出重组腺病毒AdPEDF。Western Blot对重组腺病毒进行鉴定。结果基因测序表明PEDF基因包含了大鼠PEDF基因阅读框内的全部序列,与NCBI Sequence Viewer中公布的大鼠PEDF mRNA序列(NM-177927)完全一致。获得了表达PEDF蛋白的重组腺病毒。结论成功构建了PEDF基因腺病毒表达载体,为进一步研究基因治疗脉络膜新生血管奠定了基础。
- 于燕萍崔靖王颖颜华
- 关键词：色素上皮衍生因子腺病毒载体克隆脉络膜新生血管
