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陕西省自然科学基金(2004C2-45)
陕西省自然科学基金(2004C2-45)
作品数:
1
被引量:3
H指数:1
相关作者:
安群星
徐志凯
尹文
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第四军医大学
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科学技术与工...
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2008
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HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在大肠杆菌中表达、纯化
被引量:3
2008年
在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化。根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因。合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶的编码基因,克隆入原核表达载体pRSET-A,将重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a转化BL211(DE3)大肠杆菌,并诱导表达与纯化。成功地构建了重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a;重组质粒转化的BL21工程菌经IPTG诱导表达后,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot证实为NS3/4A丝氨酸蛋白酶,并用镍离子亲和层析方法获得纯化蛋白酶。获得的纯化NS3/4A丝氨酸蛋白酶为建立其酶活性测定系统奠定了基础。
雷迎峰
尹文
杨敬
吕欣
韦三华
安群星
徐志凯
关键词:
丙型肝炎病毒
大肠杆菌
蛋白表达
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