国家自然科学基金(30901005)
- 作品数：12 被引量：105H指数：7
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- 相关机构：华南农业大学新乡医学院更多>>
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- 相关领域：轻工技术与工程理学农业科学医药卫生更多>>
- 硫代磷酸二乙酯类农药半抗原设计及抗体识别特性被引量：16
- 2009年
- 通过分析硫代磷酸二乙酯类农药的结构特点,设计并合成了系列半抗原;采用活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了系列免疫原和包被原;通过免疫新西兰大白兔获得了相应抗硫代磷酸二乙酯类农药的类特异性抗体.建立检测硫代磷酸二乙酯类农药的间接竞争酶联免疫分析(ELISA)方法,分析探讨了免疫半抗原结构对抗体特性的影响,并阐述了包被半抗原结构对ELISA灵敏度的影响规律.结果表明,手臂取代位置在苯环对位且手臂较短的免疫原具有较好的免疫效果,同时异源包被可以显著提高ELISA方法的灵敏度.由抗体PAb-H1和包被原H6-OVA建立的间接竞争ELISA方法可以同时检测7个广泛使用的有机磷农药,其半抑制浓度(IC50)分别为蝇毒磷(0.013 mg/L)、对硫磷(0.348 mg/L)、喹硫磷(0.022 mg/L)、三唑磷(0.035 mg/L)、甲拌磷(0.751 mg/L)、除线磷(0.850 mg/L)及辛硫磷(1.301mg/L),最低检测限符合国内外相关有机磷药物最大允许残留限量标准(MRLS)的检测要求.
- 谢桂勉孙远明徐振林李永祥雷红涛王弘沈玉栋
- 关键词：有机磷农药酶联免疫分析
- 3-氨基-2-嗯唑烷酮半抗原、人工抗原的合成及鉴定被引量：4
- 2012年
- 以2,4-二硝基氟苯为衍生剂,建立了3-氨基-2-噁唑烷酮(AOZ)的高效衍生方法,成功获得了衍生物F-AOZ,并进一步通过硝基的选择性还原合成了新的半抗原AM-AOZ,经电喷雾电离质谱(ESI-MS)和核磁共振(NMR)鉴定F-AOZ与AM-AOZ合成成功;采用重氮化法和戊二醛交联法将半抗原AM-AOZ分别与牛血清蛋白BSA和卵清白蛋白OVA进行偶联,合成了AOZ免疫原和包被原,经紫外吸收法进行成功鉴定;同时,分别采用紫外扫描法和三硝基苯磺酸法(TNBS)测定偶联比。另外,采用分子模拟手段对抗原表面半抗原决定簇的前线分子轨道分布情况进行了模拟分析,讨论了前线轨道的分布对可能获得的抗体特性的影响,为进一步制备高质量抗体提供理论支持。
- 李丽华徐振林孙远明杨金易王弘雷红涛沈玉栋
- 关键词：二硝基氟苯半抗原分子模拟
- 呋喃唑酮代谢物单克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法被引量：14
- 2012年
- 本研究针对呋喃唑酮代谢物(AOZ),设计合成了系列半抗原,进一步通过偶联牛血清白蛋白(BSA)免疫Balb/c小鼠、细胞融合、筛选和亚克隆等过程成功获得了源于新颖半抗原H3的具有高亲和力(亲和力常数6.68×1010 L/mol)和高特异性(与其它功能类似物交叉反应小于0.1%)抗AOZ单克隆抗体。同时,基于设计合成的系列同/异源半抗原/包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA方法灵敏度的影响。另外,采用最佳的特征结构异源包被原H5-OVA,建立了以对硝基苯甲醛(p-NP)为衍生剂的AOZ间接竞争ELISA(icELISA)和直接竞争ELISA(dcELISA)检测方法。结果表明:icELISA模式的AOZ检测IC50为0.503μg/L,定量检测线性范围(IC20～IC80)为0.06～14.0μg/L,检出限(IC10)达0.017μg/L;dcELISA模式的AOZ检测IC50为1.19μg/L,定量检测线性范围为0.14～23.6μg/L,检出限为0.056μg/L。两种方法对AOZ的检测灵敏度和定量线性范围均达到相关检测限量要求,可满足不同需求的实际样品检测。
- 任海涛沈玉栋徐振林杨金易雷红涛肖治理王弘孙远明
- 关键词：呋喃唑酮单克隆抗体酶联免疫法
- 呋喃西林代谢物多克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法被引量：6
- 2012年
- 为了建立检测呋喃西林代谢物(SEM)的酶联免疫吸附分析方法(ELISA),将所设计合成的系列半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原并免疫新西兰大白兔,筛选获得源于新颖半抗原H3的具有高亲和力、高特异性抗SEM多克隆抗体。同时,基于设计合成的系列同/异源包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA灵敏度的影响,发现H4-OVA作为异源包被原建立SEM的ELISA检测方法可获得最佳的检测效果,结果显示:ELISA方法的半抑制浓度(IC50)为12.37ng/mL;定量检测线性范围(IC20～IC80)为0.439～110.78ng/mL;检测限(IC10)达0.07ng/mL,达到了国内外相关检测限量要求,可应用于实际食品样品检测。
- 任海涛沈玉栋徐振林杨金易雷红涛肖治理王弘孙远明
- 关键词：多克隆抗体
- 对硫磷化学发光酶联免疫吸附分析方法的建立和评价被引量：18
- 2013年
- 建立了基于多克隆抗体的对硫磷间接竞争化学发光酶联免疫吸附分析方法(icCLEIA)。以三氯硫磷为原料,经三步取代反应合成对硫磷半抗原,通过活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原和包被抗原。经免疫新西兰大白兔,获得对硫磷抗血清。通过优化条件参数,建立了对硫磷的icCLEIA分析方法。本方法的检测线性范围为0.24～15.83!g/L;半抑制浓度IC50为1.14!g/L;检出限为0.09!g/L;对蔬菜样品和水样品的平均添加回收率为74.6%～121.0%。本方法可用于实际样品中痕量对硫磷残留检测。
- 邓浩孔德彬杨金易徐振林沈玉栋杨星星孙远明
- 关键词：对硫磷农药残留
- 对硫磷酶联免疫吸附分析方法的建立和评价被引量：4
- 2012年
- 通过制备对硫磷的多克隆抗体,建立了对硫磷的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(icELISA)。通过活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,获得免疫抗原和包被抗原。使用对硫磷抗血清,经优化条件参数建立了对硫磷的icELISA分析方法。该方法检测线性范围为3.39～533.05ng/mL,最低检测限为0.90ng/mL,对蔬菜样品和水样品的平均添加回收率为75.6%～127.4%,能用于实际样品中对硫磷的检测。
- 邓浩丁飞杨星星徐振林黄玲沈玉栋孙远明
- 关键词：对硫磷酶联免疫吸附农药残留
- 二甲氧基硫代磷酸酯类农药多残留免疫分析方法研究被引量：12
- 2010年
- 以二甲氧基硫代磷酸酯类农药为目标,设计合成了系列半抗原及抗原,制备了4种宽谱特异性抗体。研究结果表明,含不饱和烷烃手臂的半抗原所制备的抗体宽谱特异性优于含酰胺键手臂的半抗原所制备的抗体。采用目标待测物的特征"次级结构"作为包被半抗原可显著提高ELISA检测灵敏度。经条件优化建立的最佳间接竞争ELISA多残留检测方法可同时检测8种常用高毒农药,其检出限(LOD)在2.6～104μg/kg之间,符合相关限量标准要求。生菜样品药物添加平均回收率为73.9%～121.4%;平均相对标准偏差为10.6%～18.4%。菜心样品药物添加平均回收率为80.4%～121.2%;平均相对标准偏差为13.5%～24.4%。方法精密度均达到气相色谱法的检测水平。
- 李永祥徐振林王弘雷红涛孙远明沈丹杨金易沈玉栋
- 关键词：有机磷农药多残留检测酶联免疫吸附分析
- 细交链孢菌酮酸酶联免疫吸附分析方法研究被引量：9
- 2012年
- 采用水合肼和乙醛酸依次对细交链孢菌酮酸(Tenuazonic acid,TeA)进行衍生化,设计合成了含有氮杂共轭双键偶联手臂,可增强免疫效果的半抗原TeAHGA。通过偶联载体蛋白BSA后的免疫原TeAHGA-BSA免疫新西兰大白兔,成功制备了特异性识别TeA水合肼衍生物TeAH的多克隆抗体;优化确立了ELISA最佳反应条件(TeAH-OVA为异源包被原、包被浓度0.156"g/L、药物稀释及反应缓冲液为PBS、一抗反应时间40min、二抗反应时间20min),建立了TeA间接竞争ELISA(icELISA)检测方法,其抑制中浓度(IC50)为1.61"g/L,检出限(LOD)为0.08"g/L,定量线性检测范围为0.19～12.89"g/L(IC20～IC80)。番茄、面粉样品平均添加回收率分别为67.2%～89.8%和74.8%～93.7%。
- 杨星星刘细霞王弘徐振林沈玉栋孙远明
- 关键词：半抗原多克隆抗体免疫分析
- 化学发光酶免疫法检测猪肉中氯丙嗪残留被引量：16
- 2012年
- 采用棋盘滴定法确定包被抗原浓度和抗体稀释倍数,通过单因素实验优化了竞争反应时间、磷酸盐缓冲液浓度、甲醇含量、pH值等参数,建立了氯丙嗪的间接竞争化学发光酶免疫检测方法,并考察了方法的特异性、灵敏度和稳定性。结果表明,最佳反应条件为包被抗原浓度为0.05!g/L;氯丙嗪抗体稀释32000倍;体系缓冲液为含10%甲醇、0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.0)。本方法的IC50为0.12!g/L;检出限为0.02!g/L;线性范围0.02～24.78!g/L;批内和批间相对标准偏差均小于10%。与其它结构类似物没有明显交叉反应。猪肉检测的平均回收率为87.4%～105.6%,与高效液相色谱方法的相关性良好。本方法具有较高的灵敏度和较好的稳定性。
- 孙文佳沈玉栋孙远明雷红涛王弘曾道平杨金易
- 关键词：氯丙嗪猪肉
- 己烯雌酚残留检测ELISA试剂盒的研制及应用被引量：3
- 2011年
- 在实验室前期制备的己烯雌酚多克隆抗体基础上建立间接竞争ELISA检测方法,研制出己烯雌酚残留ELISA快速检测试剂盒,并对其性能参数进行测定。结果表明,所选用的抗体对己烯雌酚亲和力高,除了与双烯雌酚、己烷雌酚的交叉反应率分别为6.83%和2.56%外,与其他结构类似物或功能类似物交叉反应率均小于0.01%;己烯雌酚残留检测的标准曲线为y=-28.71x＋59.37,R2为0.9895,线性范围为0.08~8.17ng/mL,检测限IC10为0.05ng/mL,灵敏度IC50为1.09ng/mL,样品的加标回收率为80.04%~107.91%,平均批内和批间变异系数分别为6.41%和8.83%;与HPLC测定方法比对具有较高的相符性,相关系数R2为0.9882;该试剂盒在4℃下至少可保存6个月,可用于批量猪肉、鸡肉、鱼肉、饲料等样品中己烯雌酚残留的检测。
- 梁康建白瑞樱宋利君沈玉栋徐振林王弘雷红涛杨金易
- 关键词：己烯雌酚多克隆抗体间接竞争ELISA试剂盒
