吉林省科委基金(98579)
- 作品数：4 被引量：22H指数：3
- 相关作者：刘维全殷震江禹李华王本旭更多>>
- 相关机构：解放军军需大学中国农业大学中国医科大学更多>>
- 发文基金：吉林省科委基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程医药卫生更多>>
- 人胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中的表达及其降血糖效应(英文)被引量：3
- 2006年
- 背景:随着分子生物学和分子遗传学技术的发展和应用,人们利用基因工程方法进行人胰岛素的生产研究,并从分子水平再造分泌胰岛素的克隆细胞系来替代胰岛素注射和胰岛移植治疗糖尿病。目的:构建并筛选人胰岛素基因真核高效表达载体。设计:随机对照实验研究。单位:中国医科大学实验动物部。材料:实验选取健康成年清洁级昆明小鼠40只,雌雄各半,自由饮水,自由采食人工颗粒料,每日光照14h,实验动物由长春解放军军需大学实验动物中心提供。大肠肝菌DH5α和幼仓鼠细胞系由实验动物中心保存。方法:常规法构建重组质粒pEF1α-ImINS。将重组质粒pEF1α-ImINS和胰岛素其他3个重组质粒分别转染幼仓鼠肾细胞,经G418筛选,阳性克隆传至20代,分别用放射免疫和免疫组织化学技术方法分析胰岛素和/或胰岛素原在幼仓鼠肾细胞中表达的情况。并用重组质粒pEF1α-ImINS转染幼仓鼠肾细胞的阳性克隆20代的PBS细胞悬浮液(5×107细胞/只)及其培养上清(0.5mL/只)对昆明小鼠行腹腔注射,通过对注射前后小鼠血糖值测定,分析转基因产物降血糖的生物学效应。主要观察指标:胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中整合和表达的结果,以及注射前后血糖的变化。结果:胰岛素的表达量最高为7.984mIU/L,胰岛素表达水平的灰度值在幼仓鼠肾细胞质中为177.50±15.10,细胞核中为150.30±21.43;昆明小鼠注射pEF1α-ImINS转染幼仓鼠肾克隆细胞株的悬浮液后6h血糖值明显下降,与注射前24h比较,差异有极显著性意义(P<0.01)。结论:幼仓鼠肾细胞中重组质粒pEF1α-ImINS是胰岛素表达量最高的质粒;pEF1α-ImINS转染的克隆细胞株在小鼠体内有胰岛素表达,并且对正常小鼠有降血糖的作用。
- 李华王苹刘维全王吉贵
- 关键词：胰岛素基因仓鼠血糖
- 人胰岛素基因杆状病毒表达载体的构建及其在Sf_9细胞中的表达被引量：9
- 2001年
- 对人胰岛素基因组基因真核表达载体 ( p CMA/m INS)进行 Xho 酶切 ,回收的含人胰岛素基因组基因的 1 60 8bp片段与线性化的杆状病毒载体 p Fast Bac 进行连接 ,获得重组载体 p Fast/m INS。将该重组载体转化 DH1 0 Bac感受态细菌 ,在体内进行重组 ,并经 2次抗性与蓝白斑筛选 ,得到杆状病毒重组载体 Bacmid/m INS。将该载体转染 Sf9细胞 ,获得了重组杆状病毒 ,经 Tricine-SDS-PAGE和 Western-blotting检测 ,重组杆状病毒在 Sf9细胞中的表达产物是胰岛素原 。
- 李华刘维全王吉贵江禹王本旭王萍齐顺章殷震
- 关键词：人胰岛素基因杆状病毒表达系统SF9细胞基因表达
- 家蝇基因组文库的构建被引量：7
- 2003年
- 从孵化 36 h的蝇蛆中提取基因组 DNA,用限制性内切酶 Bcl 随机酶切 ,回收 10～ 2 3kb的酶切 DNA片段 ,通过匹配粘性末端与磷酸化的 EMBL3Bam H 酶切载体臂连接 ,在体外经包装系统包装成活的重组噬菌体 ,成功地构建了家蝇基因组文库。重组噬菌体转染 KW2 51 宿主菌 ,测定文库效价为 5× 10 4 pfu/m
- 夏平安刘维全江禹李晓艳殷震
- 关键词：家蝇基因组文库基因转化昆虫抗菌肽生物反应器抗生素
- 家蝇卵黄蛋白基因的克隆与结构序列分析被引量：3
- 2003年
- 家蝇卵黄蛋白基因编码的卵黄蛋白是家蝇胚胎发育的重要营养来源 .根据 3种家蝇卵黄蛋白cDNA保守序列设计引物 ,用PCR技术从家蝇基因组DNA中扩增到大小为 76 8bp的mdYP1基因的部分DNA片段 .经地高辛标记成特异性探针 ,从构建的家蝇基因组文库中筛选出一个阳性克隆 ,并从该克隆中分离到大小为 3991bp的mdYP1基因组基因 .序列分析显示 ,该基因组序列含有约1 6kb的 5′ 上游区和 1 0kb的 3′ 下游区 ,编码区由一个 6 1bp的内含子和大小分别为 2 2 2bp和10 2 8bp的 2个外显子组成 .5′ 上游区含有典型的CAAT TATA盒 .
- 夏平安刘维全江禹王本旭刘海鹏牛建强殷震
- 关键词：家蝇卵黄蛋白基因克隆基因组文库
