国家教育部博士点基金(20104105120005)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：河南农业大学河南省动物性食品安全重点实验室更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金河南省教育厅自然科学基金国家自然科学基金更多>>
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- 猪传染性胃肠炎病毒SYBR-Green I荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5
- 2011年
- 为了建立猪传染性胃肠炎病毒SYBR-Green I荧光定量PCR检测方法,利用RT-PCR技术扩增出猪传染性胃肠炎病毒N基因中324 bp的片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,纯化的质粒作为模板进行SYBR Green I荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了猪传染性胃肠炎病毒的荧光定量PCR检测方法.该方法检测灵敏度可达5×101拷贝数.μL-1,与猪伪狂犬病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒均不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性.结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床TGEVN基因的检测.
- 李金磊王亚宾崔保安陈丽颖张红英李珂珂魏战勇
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒N基因I荧光定量PCR
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测被引量：3
- 2011年
- 为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank收录的TGEV-Miller毒株的S基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从疫苗株中扩增TGEV S基因的部分保守片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,得到重组质粒作为荧光定量RT-PCR检测的标准模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR扩增,并制作标准曲线,建立TGEV的荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明:该方法检测灵敏度可达30拷贝/μL,与猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒和猪流感病毒和猪细小病毒不发生交叉反应,具有重复性好、特异性强、灵敏度高等优点,可用于临床TGEV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。
- 张云王亚宾陈丽颖张红英侯贝贝崔保安胡慧
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒S基因
- 猪传染性胃肠炎病毒HN-2012分离株S基因的遗传变异分析及其真核表达被引量：2
- 2015年
- 以猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)HN-2012株的cDNA为模板,经克隆测序后,将得到的S基因序列及其推导的氨基酸序列与NCBI中不同来源的TGEV毒株的相应序列进行同源性和亲缘关系的比较分析,构建系统进化树进行遗传变异分析;然后将S基因亚克隆至真核表达载体pCAGGS-S-flag中,转染293T细胞进行表达,利用flag标签抗体进行Western-blot分析。结果显示,TGEV HN-2012株的S基因与其他毒株间核苷酸和氨基酸的同源性分别为95.1%~99.1%和93.6%~95.2%,与H株的亲缘关系较近,与我国其他毒株的亲缘关系较远。Western-blot分析中可见大小约为160ku的目的条带,表明S基因成功在293T细胞中表达。本试验结果为深入研究TGEV S蛋白的生物学功能奠定了基础。
- 陈雅君程慧芳徐卫松刘中原寇亚楠张莉娟崔保安胡慧
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒293T细胞真核表达
