国家自然科学基金(30872214)
- 作品数：4 被引量：251H指数：3
- 相关作者：高琪曹俊周华云刘耀宝朱京京更多>>
- 相关机构：江苏省血吸虫病防治研究所中国检验检疫科学研究院无锡出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 恶性疟原虫红内期不同发育阶段PfRON4基因转录水平分析被引量：1
- 2009年
- 目的分析恶性疟原虫棒状体颈部蛋白4基因(PfRON4)在红内期不同发育阶段的转录水平。方法用山梨醇结合等渗细胞分离液(Percoll)对实验室体外培养的恶性疟原虫进行均一化处理,收集间隔为6h不同发育阶段的疟原虫,提取RNA。根据PfRON4基因及相关基因(PfAMA1和PfRhopH2)的序列设计特异性引物,构建标准质粒并制作标准曲线,对PfRON4及相关基因的mRNA进行定量检测分析。结果纯化并同步后的疟原虫生长发育较为同步均一,用于定量分析的标准曲线相关性较好,PfRON4、PfAMA1和PfRhopH2的相关系数(r值)分别为-1.00、-0.98和-0.98。产物熔解曲线分析结果均显示为单一波峰。定量分析结果显示,在恶性疟原虫红内期发育过程中,PfRON4基因的转录水平在裂殖子入侵红细胞后36～40h(即成熟裂殖体阶段)达到高峰。结论恶性疟原虫PfRON4基因在成熟裂殖体阶段高表达。
- 曹俊金子修高琪周华云夏超明诸葛洪祥坪井敬文鸟居本美
- 关键词：恶性疟原虫实时定量PCR转录
- 我国消除疟疾面临的机遇与挑战被引量：236
- 2011年
- 我国于2010年7月启动了消除疟疾行动,计划于2020年在全国范围内消除疟疾,很多人对此充满信心,也有不少人对此心存疑虑。本文就我国当前消除疟疾工作的外部环境、机构建设和技术支撑等方面的优势进行了介绍,同时对消除疟疾的观念和认识、技术措施等方面的不足进行了剖析,并对我国当前消除疟疾的形势进行了客观分析。提出目前是我国实施消除疟疾行动计划的有利时机,但必须及时转变观念,抓住机遇,科学应对挑战,同时加快技术创新,才能如期实现消除疟疾的目标。
- 高琪
- 关键词：疟疾
- SYBR GreenⅠ染料法定量PCR用于人体疟原虫定量检测及虫种鉴别的研究被引量：15
- 2011年
- 目的建立一种可用于疟原虫检测并同时鉴别虫种的荧光定量PCR方法。方法根据人体疟原虫18SrRNA基因序列特征,在疟原虫种特异性区域两侧的属特异性保守区设计引物,对4种人体疟原虫进行PCR扩增,将得到的扩增产物采用TA克隆法插入pGEMT载体制备标准质粒,用于制备标准曲线进行定量分析,并进行熔解曲线分析,测定各虫种扩增产物的熔解温度。结果 4种人体疟原虫均能扩增得到特异性片断,荧光定量PCR方法中建立的标准曲线相关关系较好(相关系数r=-1.00),熔解曲线分析结果显示,4种人体疟原虫的熔解温度相差较大,分别为三日疟原虫71.3℃、恶性疟原虫72.8℃、卵形疟原虫74.6℃和间日疟原虫75.8℃。结论建立的SYBR GreenI染料法荧光定量PCR技术可同时进行人体疟原虫的定量检测和虫种鉴别。
- 汪圣强周华云李宗刘耀宝傅旭峰朱京京曹俊高琪
- 关键词：疟原虫荧光定量PCR
- 荧光定量PCR用于按蚊体内疟原虫子孢子检测的研究被引量：3
- 2012年
- 目的建立一种用于按蚊体内疟原虫子孢子定量检测和虫种鉴别的荧光定量PCR方法。方法采用针对4种人体疟原虫18S rRNA基因属特异性保守区的1对引物,以疟原虫18S rRNA基因重组质粒与按蚊DNA的混合物为模板,进行反应体系和反应条件优化,验证方法的特异性,并通过熔解曲线分析进行虫种鉴别。应用阴性按蚊DNA稀释的间日疟原虫18S rRNA基因重组质粒为模板制作标准曲线,并分别以质粒DNA和实验室子孢子感染阳性的按蚊DNA为模板分析建立的荧光定量PCR方法的敏感性。在反应体系中加入不同部位、不同用量按蚊DNA,以探讨按蚊DNA对检测效果的影响。结果该方法对按蚊、人血DNA均无扩增,对4种疟原虫DNA均有特异性扩增且扩增产物的熔解温度(Tm)易于区分,三日疟原虫、恶性疟原虫、卵形疟原虫和间日疟原虫的Tm值分别为71.0、72.7、73.9℃和75.9℃。标准曲线中循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的相关性(相关系数r=-0.99)。最低可以检出含50拷贝的质粒DNA或32倍稀释的子孢子阳性按蚊DNA样本。按蚊DNA对荧光定量PCR反应具有抑制作用。荧光定量PCR的Ct值在实验内和实验间均具有良好的重现性。结论新建立的SYBR Green I染料荧光定量PCR方法具有较高的敏感性和特异性,可用于按蚊体内疟原虫子孢子的检测,并可同时对4种人体疟原虫进行鉴别。
- 刘耀宝周华云汪圣强李菊林朱韩武朱国鼎顾亚萍王伟明曹俊高琪
- 关键词：荧光定量PCR按蚊疟原虫子孢子
