国家自然科学基金(30700027)
- 作品数：10 被引量：37H指数：4
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- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江大学新疆农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省博士后基金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所所长基金更多>>
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- 流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构...
- 赵付荣周东辉华荣虹王斌陈娜莎阿合买提·买买提步志高
- 关键词：乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体
- 文献传递
- 抗乙型脑炎病毒非结构蛋白NS1单克隆抗体的制备与鉴定被引量：6
- 2009年
- 本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒(JEV)SA14-14-2株非结构蛋白NS1作为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,共获得4株特异性针对JEV NS1的杂交瘤细胞,分别命名为1H6、2C3、3A7、4C8,经测定1H6单抗亚类属于IgG2b,其他3株为IgG1,轻链均为κ链。4株杂交瘤细胞诱生小鼠腹水效价分别达1∶20480、1∶2560、1∶20480、1∶10240,western blot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体均可与JEV NS1蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光试验表明1H6、3A7、4C83株单抗能够识别天然的JEV NS1蛋白。本研究为进一步探究JEV NS1蛋白结构及其功能奠定了基础。
- 王斌华荣虹赵付荣刘天强于海杜鹃童光志
- 关键词：乙型脑炎病毒非结构蛋白单克隆抗体
- 乙型脑炎病毒NS1蛋白的可溶性表达与抗原性分析
- 2012年
- 为获得可溶性表达的乙型脑炎病毒(JEV)NS1蛋白,将编码JEV SA14-14-2株NS1蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-c5X中,构建重组融合表达质粒pc5X-NS1;用重组质粒转化宿主菌ER2523后,经IPTG诱导得到可溶性的融合蛋白MBP-NS1;优化诱导表达条件,于28℃、0.3 mmol/L IPTG诱导4 h;最后融合蛋白经直链淀粉树脂柱纯化。结果表明:重组融合蛋白MBP-NS1具有良好的抗原性和特异性。
- 刘立科陈振师任玉红步志高华荣虹
- 关键词：乙型脑炎病毒NS1蛋白原核表达
- 乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位多肽序列鉴定及分析被引量：3
- 2011年
- 为了对流行性乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白抗原表位E19进行核心序列定位,本研究设计了一系列编码相互部分重叠短肽核苷酸序列,原核融合表达后经westernblot分析,确定其抗原表位核心序列为150ENHGNYS156。该表位在乙型脑炎不同基因型的各种病毒株间为高度保守序列;根据JEVE19表位与同一血清群其他黄病毒之间的差异,在同源序列位置设计了系列突变短肽,融合表达后western blot分析的结果表明,其他黄病毒属病毒同源序列不能与抗JEV阳性血清反应。本实验结果表明JEVE蛋白抗原表位E19具有鉴别检测JEV与西尼罗病毒等其它黄病毒的意义。本实验为进一步研究E蛋白结构和功能以及建立乙型脑炎临床鉴别诊断方法奠定了分子生物学基础。
- 陈娜莎华荣虹闫丽萍赵付荣王斌杜鹃王云峰童光志
- 关键词：乙型脑炎病毒抗原表位
- 流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2010年
- 流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒SA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,经有限稀释法获得1株特异性针对JEV E蛋白的杂交瘤细胞,命名为5D4,经测定5D4单抗亚类属于IgG2a,轻链为κ链。经Western blot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体可特异地与JEV E蛋白结合。结果表明,所制备的抗JEV E蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性,为JEV准确快速的病原诊断和JEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。
- 赵付荣华荣虹王斌陈娜莎阿合买提.买买提步志高
- 关键词：乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体
- 乙型脑炎病毒结构蛋白基因的克隆表达与免疫特性分析被引量：1
- 2008年
- 研究分别克隆了乙型脑炎病毒SA14-14-2株的结构蛋白C、PrM/M及E蛋白基因。将3个结构蛋白基因分别插入表达质粒pET30(a)中,成功构建3个原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后利用IPGT诱导,SDS-PAGE分析结果表明,3个结构蛋白获得了表达,表达产物大小与预期一致。Western-blot分析结果表明:表达产物中PrM/M和E蛋白具有很好的免疫反应性,可被抗乙型脑炎病毒血清很好地识别;而C蛋白的免疫反应性较差,不能很好地被乙型脑炎病毒阳性血清识别。该结果提示,乙型脑炎病毒结构蛋白中除E蛋白外PrM/M蛋白也很可能具有诊断抗原的应用潜能。
- 华荣虹童光志刘娣
- 关键词：乙型脑炎病毒结构蛋白免疫
- 流行性乙型脑炎病毒一步法RT-LAMP检测方法的建立被引量：9
- 2010年
- 为建立一种简便、快速、灵敏、特异的乙型脑炎病毒(JEV)检测方法,本研究根据GenBank中登录的25株流行性JEV基因组序列,设计3对特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,优化反应体系,建立了一步法反转录-LAMP(RT-LAMP)检测方法。该方法检测时间短,灵敏度比常规RT-PCR方法高,可检测出103TCID50/0.2mL JEV;特异性强,对猪细小病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒等常见猪病毒均无交叉反应。结果判定时只需要在扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料,就可以直接在可见光或紫外光下观察颜色变化。该方法简便快捷,省时省力,是一种适用于基层实验室快速、准确检测流行性JEV的方法。
- 杜鹃宋永刘立科华荣虹
- 关键词：流行性乙型脑炎病毒
- 抗乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体5D4重链可变区基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2010年
- 赵付荣杜鹃王斌陈娜莎华荣虹步志高
- 关键词：乙型脑炎病毒单克隆抗体可变区基因E蛋白人兽共患传染病
- 流行性乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位鉴定与功能研究被引量：8
- 2008年
- 流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒.表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白.E蛋白在介导病毒与宿主细胞的吸附、融合,决定病毒的血凝活性、细胞嗜性以及决定病毒毒力和诱导宿主产生保护性免疫反应中起重要作用.E蛋白结构域Ⅲ(EⅢ)是诱导中和抗体的重要区域.为确定乙型脑炎EⅢ的抗原表位,实验首先克隆了JEV疫苗株SA14-14-2的EⅢ区域,并用pGEX-6P-1载体进行融合表达,免疫印迹分析表明,该融合蛋白能被抗JEV血清识别.为了进一步对该结构域进行抗原表位作图,设计了14个覆盖该区域且部分重叠的短肽.将各短肽与GST进行融合表达与纯化.短肽融合蛋白经JEV阳性血清免疫印迹和ELISA免疫反应性扫描分析,结果鉴定出,E39(305TEKFSFAKNPVDTGHG320)、E45-1(355VTVNPFVATSSA366)、E48-1(377PFGDSYIV384)和E49(385VGRGDKQINHHWHKAG400)4个线性抗原表位.分别将4个抗原表位融合蛋白免疫小鼠,制备各抗原表位单因子血清,结果经体外病毒中和试验表明,E39为具有病毒中和活性的抗原表位.试验结果为进一步分析JEVE蛋白结构与功能以及诊断试剂和表位疫苗的研究提供了重要工作基础.
- 闫丽萍华荣虹亓文宝童光志
- 关键词：流行性乙型脑炎抗原表位
- 稳定表达乙型脑炎病毒NS1蛋白细胞系的建立被引量：1
- 2011年
- 为建立稳定表达乙型脑炎病毒(JEV)NS1蛋白的真核细胞系,本研究将编码JEV NS1蛋白的人工合成基因克隆到真核表达载体pCAGG-TK-neo中,构建了重组质粒pCAGG-opti-NS1。重组质粒经脂质体转染RK-13细胞,以含G418的选择性培养基选择培养,经细胞克隆纯化,以间接免疫荧光试验(IFA)筛选表达目的基因的细胞。结果表明,转染的RK-13细胞经G418加压及IFA筛选后,获得表达JEV NS1蛋白的阳性RK-13细胞系。经RT-PCR、western blot和IFA鉴定,该细胞系在传代至第15代后仍然可以稳定表达NS1蛋白。本实验获得了能够稳定表达JEV NS1蛋白的细胞系,为进一步开展JEV相关的研究奠定了基础。
- 陈振师刘立科汪恩强李业南华荣虹
- 关键词：乙型脑炎病毒NS1蛋白细胞系
