国家自然科学基金(30671886)
- 作品数：9 被引量：12H指数：2
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- 人BclG_L基因siRNA逆转录病毒的制备及其对T淋巴细胞增殖的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:制备表达针对BclGL基因的siRNA逆转录病毒,研究其对体外培养Jurkat细胞中BclGL基因的沉默效应及Jurkat细胞增殖的影响。方法:利用siRNA预测软件获取3条siRNA编码序列,插入pSilencer5.1-H1构建重组逆转录病毒siRNA表达质粒,脂质体法转染PT67细胞包装重组逆转录病毒pSilencer 5.1-H1-BclGL,体外感染Jurkat细胞,嘌呤霉素筛选病毒感染阳性细胞克隆,实时定量PCR及Western验证干扰效率;CCK-8法体外检测BclGL基因沉默后Jurkat细胞的增殖能力。结果:酶切及测序结果证实,表达siRNA的逆转录病毒构建成功,重组病毒表达的siRNA能有效干扰Jurkat细胞内BclGL基因的表达;BclGL表达下调可增强Jurkat细胞的增殖能力ela。结论:成功制备了表达人BclGL基因siRNA的重组逆转录病毒,并证实其对Jurkat细胞的生长抑制效应。
- 罗娜郭晟杨承英费蕾吴胜昔陈永文吴玉章郝飞
- 关键词：病毒SIRNAT淋巴细胞逆转录聚合酶链反应
- HAX-1对Jurkat细胞的抗凋亡作用研究
- 2008年
- 目的研究HAX-1过表达在T淋巴瘤细胞株Jurkat细胞中的抗凋亡作用。方法构建HAX-1真核表达载体pEGFP-C3-HAX-1并转染Jurkat细胞。分别采用RT-PCR以及Western blot从mRNA和蛋白水平上检测HAX-1的表达,然后通过光镜、电镜以及TUNEL法检测在去血清培养、电子线照射以及地塞米松诱导等不同处理因素下HAX-1过表达Jurkat细胞的凋亡情况。结果构建的表达载体经酶切和测序鉴定序列正确,载体构建成功;PCR及Western blot结果表明,转染后HAX-1的表达水平明显高于对照组(P<0.01);经检测过表达HAX-1的Jurkat细胞具有明显的抗凋亡作用,能够对抗去血清培养、电子线照射以及地塞米松诱导等的凋亡诱导作用。结论HAX-1基因在Jurkat细胞中过表达具有明显的抗凋亡作用。
- 翟志芳郝飞
- 关键词：JURKAT细胞细胞凋亡抗凋亡蛋白
- 短发夹状RNA特异性抑制HeLa细胞的Hax-1基因表达被引量：1
- 2007年
- 目的:构建靶向Hax-1基因的短发夹状干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体pGenesil-Hax-1,并探讨siRNA靶向抑制Hax-1基因表达的作用。方法:根据shRNA设计的原则,在Hax-1全长序列中选取含19个核苷酸靶序列,设计形成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pGenesil-1中,获得可靶向抑制Hax-1基因的重组shRNA表达载体。采用LipofectamineTM2000转染试剂将pGenesil-Hax-1导入HeLa细胞中;分别采用RT-PCR以及Western blot从mRNA和蛋白水平上检测干扰效果。结果:半定量PCR及Western blot结果表明,siRNA可使Hax-1mRNA的转录水平得到显著抑制(P<0.01),Hax-1蛋白的表达较对照组减少约70%。结论:靶向Hax-1基因的重组shRNA表达载体pGene-sil-Hax-1介导的siRNA可显著抑制Hax-1基因在人宫颈癌HeLa细胞中的表达。
- 翟志芳郝飞姜友昭钟白玉阎衡钟华
- 关键词：HELA细胞
- 小鼠HAX-1基因重组腺病毒载体的构建表达和鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的构建小鼠Hax-1基因的重组腺病毒载体,以期进一步进行系统性红斑狼疮模型BXSB小鼠的体内实验研究。方法用RT-PCR方法扩增小鼠全长Hax-1基因,经T/A克隆后,亚克隆至穿梭质粒pAdtrack-CMV上,在BJ5183细菌中和AdEasy-1进行同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确后,脂质体法转染AD-293细胞进行包装,扩增,氯化铯密度梯度离心纯化病毒并检测其滴度。RT-PCR鉴定重组腺病毒转染AD-293细胞后Hax-1的表达,同时进行野生型腺病毒的检测。结果经酶切及测序证实Hax-1基因重组腺病毒载体构建成功。PCR检测转染后AD-293细胞内Hax-1基因水平的表达,且无野生型腺病毒的产生。结论成功构建了含小鼠Hax-1基因的重组腺病毒载体,为探讨Hax-1的生物学功能奠定了基础。
- 翟志芳郝飞刘志君钟白玉王鹰
- 关键词：腺病毒细胞凋亡
- HAX-1在SLE患者外周血单一核细胞中的表达及其亚细胞定位被引量：1
- 2008年
- 目的检测活动期SLE患者PBMC中抗凋亡基因HAX-1的表达水平，并进行亚细胞定位分析。方法分别采用半定量PCR以及Western印迹试验从mRNA和蛋白水平上检测活动期SLE患者及正常人对照组PBMC中HAX-1的表达，并通过激光共聚焦显微镜观察HAX-1在SLE患者PBMC中的亚细胞定位。结果活动期SLE患者PBMC中HAX-1在mRNA水平以及蛋白水平的表达均明显高于健康正常人（P值分别=0．000、0．007），且其相对表达水平与SLEDAI之间呈线性正相关；HAX-1在SLE患者PBMC中主要分布于线粒体内及内质网。结论HAX-1可能通过抗凋亡机制抑制SLE患者体内淋巴细胞凋亡而导致其过度活化，从而参与SLE疾病发生发展过程。
- 翟志芳郝飞钟白玉夏汝山
- 关键词：红斑狼疮单一核细胞细胞凋亡
- 人BclGL基因慢病毒表达载体构建及其对T淋巴细胞凋亡的影响被引量：3
- 2009年
- 目的构建针对人BclGL的慢病毒表达载体,检测其对Jurkat T淋巴细胞系凋亡的影响,为进一步研究BclGL在细胞内信号转导及分子功能奠定基础。方法RT-PCR方法扩增人全长BclGL基因,克隆于pGFP-N1质粒中构建BclGL绿色荧光蛋白融合基因(BclGL-GFP),将融合基因克隆于慢病毒载体FUGW并转染293FT细胞包装浓缩慢病毒颗粒。将浓缩慢病毒感染Jurkat细胞,同时设立PBS对照及FUGW病毒阴性对照组,流式细胞术及荧光定量PCR鉴定BclGL在Jurkat细胞中的表达,Annexin V-APC/PI双染检测细胞凋亡变化。结果酶切及测序证实人BclGL慢病毒表达载体构建成功,转染Jurkat细胞72h后Jurkat细胞凋亡明显增加。结论成功构建了高效稳定表达人BclGL的重组慢病毒转染系统,并证实其对Jurkat淋巴细胞的促凋亡效应,为进一步探讨BclGL的生物学功能奠定了基础。
- 罗娜吴毅费蕾郭晟杨承英吴胜昔陈永文吴玉章郝飞
- 关键词：慢病毒表达载体JURKAT细胞凋亡
- HAX-1的研究进展被引量：2
- 2007年
- 翟志芳郝飞
- 关键词：细胞凋亡抗凋亡蛋白
- HAX-1对MRL／lpr小鼠狼疮活动性影响的研究被引量：1
- 2008年
- 目的观察抗凋亡蛋白HAX-1对MRL／lpr狼疮鼠狼疮活动性的影响。方法重组腺病毒AdHAX-1经腹腔注射MRL／lpr小鼠，每周2次，连续注射4周。分别在注射前、注射2周后及4周后检测小鼠血清中抗核抗体（ANA）、循环免疫复合物（CIC）、抗双链DNA抗体（抗dsDNA抗体）、抗组蛋白抗体和干扰素γ（IFN-γ）水平，并检测注射前及注射后外周血的白细胞计数及尿蛋白水平；经RNAi使HAX-1表达下调后，观察脾脏淋巴细胞的增殖以及IFN-γ的分泌水平。结果HAX-1可使MRL／lpr小鼠的尿蛋白以及抗dsDNA抗体、ANA、抗组蛋白抗体、CIC明显升高，且产生IFN-γ水平升高，除抗组蛋白抗体及CIC外，其余指标与磷酸盐缓冲液对照组（PBS组）及对照腺病毒组（AdEGFP组）相比较，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。重组腺病毒组（AdHax-1组）小鼠肾小球内免疫复合物沉积强度明显较强且阳性肾小球数目较多，与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。AdHax-1组肾小球的平均病变积分达1．50±0．34，与对照组（PBS组：0．67±0．14；AdEGFP组：0．81±0．26）比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。pGenesil-HAX-1可使淋巴细胞的增殖率明显降低（P〈0．05），IFN-γ分泌水平明显下降（P〈0．01）。结论HAX-1是调节系统性红斑狼疮淋巴细胞凋亡的一个重要因素，重组AdHAX-1可使MRL／lpr小鼠狼疮样症状加重，下调HAX-1表达可使病情减轻。
- 翟志芳周春丽钟白玉敖俊红郝飞
- 关键词：红斑狼疮小鼠
- 短发夹状RNA靶向抑制HaCaT细胞Hax-1基因的表达研究
- 2010年
- 目的观察短发夹状干扰RNA靶向抑制Hax-1基因诱导HaCaT细胞凋亡的作用。方法构建特异性抑制Hax-1的shRNA表达载体并转染HaCaT细胞;分别采用半定量PCR以及Western blot从mRNA和蛋白水平检测干扰效果;流式细胞术检测HaCaT细胞的凋亡。结果 Hax-1基因mRNA水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制,HaCaT细胞凋亡率明显升高。结论靶向Hax-1的shRNA显著抑制了Hax-1基因在HaCaT细胞中的表达,并明显诱导HaCaT细胞凋亡。
- 翟志芳王莉钟华钟白玉郝飞
- 关键词：HACAT细胞细胞凋亡
