转基因生物新品种培育专项(2009ZX08010-023B)
- 作品数：10 被引量：32H指数：4
- 相关作者：卢晟盛卢克焕王献伟梁世忠何若钢更多>>
- 相关机构：广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室西藏农牧学院更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 广西巴马小型猪成纤维细胞体外培养体系的建立被引量：3
- 2011年
- 为建立广西巴马小型猪腹部成纤维细胞、耳成纤维细胞、睾丸成纤维细胞、肺部成纤维细胞及脾成纤维细胞体外培养体系,以新生巴马小型猪为试验材料,使用微量液体组织块贴壁法原代培养分离几种成纤维细胞,进行常规传代培养、冷冻和复苏;根据细胞的形态、生长特性等观察其体外生长能力和增殖寿命。结果显示,广西巴马小型猪腹部成纤维细胞、耳成纤维细胞、睾丸成纤维细胞、肺部成纤维细胞及脾成纤维细胞获得成功分离,体外可以传代和冷冻;冷冻复苏后仍可以正常培养和传代;腹部成纤维细胞免疫荧光检测结果显示波形蛋白表达阳性,角形蛋白表达阴性。研究成果可为显微操作核移植、手工核移植和转基因相关操作等提供不同类型的供体材料。
- 王献伟卢晟盛卢克焕
- 关键词：广西巴马小型猪成纤维细胞细胞体外培养
- 猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究被引量：5
- 2011年
- 本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70%～80%汇合、血清饥饿法和100%接触抑制法)对重构胚发育能力的影响。结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44h的卵母细胞以浓度0.4μg.mL-1作用0.5～1h为宜。(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11%vs 9.25%,P>0.05)。(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05)。(4)用70%～80%汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P<0.05);在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考。
- 任子利赵彦玲杨小淦陆阳清卢晟盛卢克焕
- 5-Aza-dc和TSA处理巴马小型猪体细胞对其表观遗传修饰和核移植效果的影响
- 【目的】探讨5-Aza-dc(5-氮-2-脱氧胞苷,DNA甲基化转移酶抑制剂)和TSA(Trichostatin A,去乙酰化酶抑制剂)对广西巴马小型猪肾脏成纤维细胞表观遗传修饰及核移植胚胎早期发育的影响。【方法】分别用...
- 宁淑芳李青洋梁明明杨小淦陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：巴马小型猪5-AZA-DCTSA
- 文献传递
- 转红色荧光蛋白基因细胞非侵入式人工智能检测与预测体系的建立
- 本研究利用激光光镊拉曼光谱结合基于主成分分析的BP人工神经网络(feed-forward backpropagation network)对新生巴马小型猪肾脏转红色荧光蛋白成纤维细胞进行了光谱分析、模式识别和预测。本实验...
- 刘红波杨小淦吕培茹左二伟王献伟胡林林宁淑芳陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：转基因红色荧光蛋白主成分分析BP人工神经网络
- 文献传递
- 成熟液中不同来源促性腺激素对猪卵母细胞早期孤雌发育的影响被引量：6
- 2010年
- 为探讨不同来源的促性腺激素对猪卵母细胞早期孤雌发育的影响,将猪卵母细胞置于添加有不同来源促性腺激素(分别来自美国Sigma公司和中国科学院动物研究所)的成熟液中体外成熟40～44 h,成熟卵母细胞经化学孤雌激活后放入胚胎培养液中继续培养,分别于第48小时和第168小时统计卵裂率和囊胚发育率。结果发现,成熟液中同时添加0.5μg/mL中国科学院动物研究所生产的促性腺激素(FSH和LH)的卵裂率和囊胚发育率均略高于其他处理组,分别达到(65.68±24.13)%和(28.41±18.74)%;在囊胚细胞数方面,无论是添加中国科学院动物研究所还是Sigma公司生产的促性腺激素,均以添加浓度为0.5μg/mL时的囊胚细胞数最高。结果表明,两种来源促性腺激素对猪卵母细胞孤雌激活后早期发育的影响无显著差异,说明中国科学院动物研究所生产的促性腺激素(FSH和LH)能有效促进猪卵母细胞体外成熟和进一步孤雌发育效果,且以在成熟液中同时添加0.5μg/mL FSH和0.5μg/mL LH为宜。
- 兰宗宝韩晓慧梁世忠何若钢卢晟盛卢克焕
- 关键词：卵母细胞促性腺激素
- 猪手工体细胞核移植电融合/激活参数的优化被引量：4
- 2010年
- 通过对猪体细胞核移植中电融合及联合化学激活对猪重构胚发育能力进行探讨,为广西巴马小型猪的手工克隆搭建平台。利用手工克隆(HMC)技术对猪体细胞核移植胚胎采用不同的电融合方法和融合后化学激活不同时间,研究猪手工克隆胚胎的发育能力。结果表明:(1)对重构胚进行一步法电融合时,参数2(180V·mm-1,30μs×1次)与参数1(160·mm-1,30μs×1次)两组间的融合率差异显著(65.31%vs58.33%,P<0.05);(2)对重构胚进行两步法融合时,参数3(第一次:180V·mm-1,10μs×1次,融合60min后进行第二次融合;第二次:85V·mm-1,80μs×1次)和参数4(第一次:200V·mm-1,10μs×1次,融合60min后进行第二次融合;第二次:85V·mm-1,80μs×1次)两组间的总融合率差异不显著(75.88%vs81.20%,P>0.05);(3)采用参数4与采用参数2融合的重构胚其分裂率和囊胚率均差异不显著((79.98%vs72.66%)和(13.14%vs9.36%),P>0.05);(4)在电激活和CHX+CB联合激活4、5、6h这3组中,其分裂率和囊胚率均差异不显著(P>0.05)。相对而言,重构胚采用参数4的两步融合法和CHX+CB激活5h效果较好。
- 任子利赵彦玲杨小淦陆阳清卢晟盛卢克焕
- 关键词：卵母细胞体细胞核移植
- 广西巴马小型猪附睾成纤维细胞的分离培养和鉴定被引量：2
- 2010年
- 为了建立广西巴马小型猪附睾成纤维细胞体外培养体系,利用微量液体组织块贴壁法原代培养分离附睾成纤维细胞,进行常规传代培养、冷冻和复苏,并通过接触抑制和解除抑制研究细胞的增殖能力,以及通过免疫荧光对其进行鉴定。结果表明,该法成功分离获得广西巴马小型猪附睾成纤维细胞,并可以大量传代和冷冻,目前已经传至55代以上,生长良好;冷冻复苏和接触抑制解除后仍可以正常培养和传代;细胞免疫荧光检测,波形蛋白表达阳性。可见,通过微量液体组织块贴壁法能成功分离得到广西巴马小型猪附睾成纤维细胞,在体外能稳定培养和传代。
- 王献伟王宪梁世忠邹知明卢晟盛卢克焕
- 关键词：广西巴马小型猪附睾成纤维细胞
- 陆川猪耳部成纤维细胞的体外培养被引量：3
- 2011年
- 本研究建立陆川猪耳部成纤维细胞的体外培养体系,采用组织块培养法可以获得陆川猪耳部成纤维细胞。用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化液消化细胞、用含有10%FBS的DMEM对细胞进行培养,能很好的支持陆川猪耳部成纤维细胞的生长。传3代后,观察到培养的细胞形态逐渐均一,为典型的成纤维细胞,绝大部分呈梭形或不规则三角形。细胞生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走势。用间接免疫荧光法对细胞类型进行鉴定。抗波形蛋白免疫荧光染色显示为阳性,抗角形蛋白免疫荧光染色为阴性。结果,分离得到的细胞为成纤维细胞。结果表明,用组织块培养法,可以培养出陆川猪耳部成纤维细胞。
- 秦小娥胡林林卢晟盛卢克焕
- 关键词：陆川猪组织块培养间接免疫荧光
- FSH+LH添加方式、半胱氨酸、EGF对猪IVM卵母细胞早期孤雌发育的影响被引量：4
- 2010年
- 为探讨IVM液中FSH+LH添加方式、半胱氨酸和表皮生长因子(EGF)不同浓度对猪IVM卵母细胞早期孤雌发育的影响,将在不同成熟体系中IVM44 h后的卵母细胞经化学激活后放入NCSU-23中培养,分别于第2、7天统计分裂率和囊胚发育率。结果表明:①IVM液添加有FSH+LH且在培养22 h后更换添加有FSH+LH的IVM液继续培养22 h,其分裂率(83.76±9.95)%和囊胚发育率(23.49±7.74)%显著高于添加FSH+LH连续培养44 h、中间不换液的处理(P<0.05);②IVM液中添加1.2 mmol/L半胱氨酸的囊胚发育率(28.13±10.9)%显著高于添加0、0.3、0.6 mmol/L半胱氨酸的处理,差异显著(P<0.05);③IVM液中添加10 ng/mL EGF的囊胚发育率(23.49±7.74)%显著高于其他浓度处理(P<0.05)。可见:在该研究条件下,IVM液添加有FSH+LH且在培养22 h后更换添加有FSH+LH的IVM液继续培养22 h,并添加1.2 mmol/L半胱氨酸、10 ng/mL EGF,有利于促进猪IVM卵母细胞早期孤雌发育。
- 许惠艳苏克同何若钢梁世忠卢晟盛卢克焕
- 关键词：卵母细胞体外成熟半胱氨酸
- 5-Aza-dc和TSA对陆川猪体细胞核移植的影响
- 陆川猪是全国八大地方良种猪之一。肉质优味道好、母性好且繁殖力高、遗传性稳定,杂交优势明显。本研究选择陆川猪为研究对象,对地方优良品种的育种和保种研究和实际应用均具有特殊的意义。体细胞克隆效率低,普遍认为是由于移入受体的体...
- 胡林林秦小娥卢晟盛陆阳清卢克焕
- 文献传递
