福建省卫生厅青年科研基金(2005-1-20)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 相关作者：吴守丽严延生何似李世清陈亮更多>>
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- 双抗原夹心法ELISA在肾综合征出血热诊断中的应用被引量：3
- 2007年
- 目的建立一种敏感、特异的检测肾综合征出血热(HFRS)血清总抗体的双抗原夹心法ELISA。方法应用重组汉坦病毒(HV)NP抗原e1.3S作为包被抗原和e6-119-HRP作为酶标抗原建立双抗原夹心法ELISA,检测血清总抗体,并与间接免疫荧光法(IFA)相比较。结果共检测188份人血清和378份鼠血清标本,2种方法的总符合率为97.70%。以IFA为参照标准,双抗原夹心法ELISA的敏感性为97.54%,特异性为97.87%。结论双抗原夹心法ELISA检测HFRS血清总抗体具有很高的敏感性和特异性,适用于大规模的流行病学调查。
- 吴守丽何似李世清林代华李述扬陈亮严延生
- 关键词：肾综合征出血热血清学诊断
- 汉坦病毒A_(537)核蛋白基因的分段表达及其产物抗原活性的研究被引量：4
- 2007年
- 目的构建汉坦病毒S基因不同截短片段的重组表达质粒,并选择表达高活性的重组抗原应用于血清学诊断。方法从HTN型A537株基因组中扩增出S全长基因,构建TA-A537S克隆;以此为模板扩增出不同长度的截短的S片段,定向插入表达载体pET-30a,获得含不同片段的重组表达载体(pET-1-112,pET-1-119,pET-1-137,pET-1-200,pET-1-292,pET-1-316,pET-1-429,pET-6-119,pET-6-137,pET-6-200,pET-6-292,pET-6-405,pET-16-112,pET-16-137,pET-26-137),并在大肠杆菌BL21(DE3)中分别进行了表达;应用SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况,应用Western blot分析重组抗原的活性,采用电洗脱、亲和层析等方法纯化重组蛋白,用间接ELISA法对重组蛋白的抗原性及抗原特异性进行检测。结果成功构建了含HV S全基因的TA-A537S克隆质粒;以截短的S基因片段构建的重组表达质粒中,既有表达又有活性的有pET-1-112,pET-1-119,pET-1-200,pET-1-292,pET-1-429,pET-6-119,pET-6-200,pET-6-292,pET-6-405;其中pET-6-119表达量最高且活性强;经电洗脱或Ni-NTA亲和层析可获得高纯度的重组蛋白e6-119;纯化的e6-119重组蛋白应用于ELISA检测疑似HFRS和不明原因的发热病人血清IgG,与IFAT比较,其敏感性和特异性分别为94.7%,95.6%。结论pET-6-119表达量高,易于纯化,并且具有良好的抗原性,是一种廉价、安全、可靠的诊断抗原。
- 吴守丽严延生李世清何似
- 关键词：汉坦病毒原核表达间接酶联免疫吸附试验
