国家自然科学基金(39770749)
- 作品数：12 被引量：29H指数：3
- 相关作者：王臻彭磊张志培王庆良吴银松更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 多西紫杉醇体外诱导骨肉瘤细胞系pl-1的凋亡被引量：13
- 2002年
- 目的 :研究多西紫杉醇对骨肉瘤细胞生长抑制及诱导凋亡作用。方法 :应用细胞计数、形态学观察、蛋白含量测定、流式细胞术和电镜等方法对多西紫杉醇诱导的骨肉瘤进行检测和观察。结果 :多西杉醇在浓度为 4mg·L- 1时 ,对骨肉瘤细胞有明显的生长抑制作用 ,并且存在着时间依赖关系和一定范围内的剂量依赖关系。多西紫杉醇可将骨肉瘤细胞阻断于G1期 ,并诱导凋亡 ,其凋亡细胞具有典型凋亡细胞特征。用流式细胞仪测定细胞周期 ,可见明显的凋亡峰。电镜观察染色质沿皱缩的核膜下凝聚 ,细胞表面出现凋亡小体 ,基质呈絮状致密化 ,紫杉醇作用短时间去除后再培养比持续作用更易促使细胞凋亡。结论 :多西紫杉醇对骨肉瘤细胞的细胞毒作用是诱导其凋亡的结果 ,这种诱导凋亡的能力是紫杉醇疗效的基础 ,在对骨肉瘤的治疗中 。
- 彭磊王臻王庆良曹云新朱德生张志培吴银松施新猷
- 关键词：多西紫杉醇骨肉瘤抗癌药植物药
- 人骨肉瘤融合瘤的快速制备及其体外的免疫效应
- 2002年
- 目的 研究人骨肉瘤抗原进入提呈细胞的有效途径和方法,探索筛选制备人骨肉瘤与活化B淋巴细胞融合瘤的方法,并研究其体外免疫原性和作为人骨肉瘤免疫疫苗的可能性,为进一步临床应用做有意义的前期实验。方法抗人Ig M、金黄色葡萄球菌A蛋白及少量IL-2和PMA活化的人脾脏来源B淋巴细胞,以500mg/ml聚乙二醇为融合剂,使骨肉瘤细胞与活化B淋巴细胞进行化学融合,贴壁后去除未融合淋巴细胞,特异性抗B细胞抗体预包被平板捕捉与B细胞融合的骨肉瘤。条件培养基体外筛选扩增,检测融合效率。紫外线灭活,同时设单纯灭活的未融合骨肉瘤组作为对照,记数法测量各组刺激淋巴细胞增殖能力,各组培养所得淋巴细胞进行体外杀伤实验(效靶比50:1),改良MTT法测量淋巴细胞对亲源之骨肉瘤细胞的杀伤指数。结果 人B淋巴细胞体外激活后可以与人骨肉瘤细胞化学融合,可利用贴壁性质和特异性B淋巴细胞抗体等方法部分纯化融合细胞并适当扩增浓集。融合细胞于3周和4周表达B淋巴细胞的标志性抗原效率分别为60.6％和45.4％。紫外线灭活融合瘤明显提高其体外刺激淋巴细胞增殖能力(P<0.01),诱发淋巴细胞对亲源骨肉瘤细胞的杀伤作用(11.60％且P<0.01)。结论 利用人骨肉瘤细胞和活化B淋巴细胞可以制备融合瘤。
- 王臻吕昌伟李立文彭磊郭刚曹云新李雪松
- 关键词：骨肉瘤细胞融合淋巴细胞癌症疫苗
- 骨肉瘤细胞与活化B淋巴细胞融合疫苗的制备及其诱导的抗瘤活性被引量：4
- 2001年
- 目的骨肉瘤细胞与活化B淋巴细胞融合制备肿瘤疫苗,探讨其生物学特征及抗肿瘤特性。方法以体积分数50%的聚乙二醇(PEG)为融合剂,将C3h小鼠来源的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)基因缺陷型骨肉瘤细胞LM9与脂多糖(LPS)活化的C3h小鼠B淋巴细胞进行融合。经HAT(hypoxanthine-aminopyerin-thymidine)选择性培养基筛选后,流式细胞仪检测融合细胞表面H-2Kb表达情况,用有限稀释法进行克隆,H-2Kb高表达株FLM9用于体内抗瘤实验,观察该融合瘤株的体内外生长特性、对C3h小鼠的致瘤性以及抗肿瘤免疫活性。结果C3h小鼠骨肉瘤融合细胞在体外生长缓慢,对C3h小鼠无致瘤性,经有限稀释法克隆得到一个B7表达为75.11%的克隆,该克隆H-2Kb表达为15.6%;作用于荷瘤C3h小鼠,融合细胞治疗组小鼠(8只)2只分别于38d和45d死亡,其余6只存活期超过60d;对照组小鼠均在60d内全部死亡(P<0.01)。用肿瘤细胞攻击时,预先接种融合瘤苗组的存活率75%明显高于对照组。结论活化B淋巴细胞与骨肉瘤细胞融合后改变了肿瘤细胞的生物学特性,对小鼠有较好的预防和治疗肿瘤作用,说明用细胞融合方法构建的肿瘤疫苗具有潜在的应用价值。
- 王臻彭磊肖毅王庆良朱德生吴银松王鹏飞张志培
- 关键词：骨肉瘤细胞融合生物治疗B淋巴细胞
- 牛去抗原松质骨载体的生物相容性研究被引量：2
- 2002年
- 目的 :用胶原修饰松质骨载体表面 ,增加其生物相容性。方法 :新鲜牛松质骨经脱脂、H2 O2 浸渍及部分脱钙处理 ,制成去抗原牛松质骨载体 (MBC) ,载体表面经胶原处理后 ,将体外培养的兔骨膜成骨细胞复合在其表面 ,分别于 4d、10d和 2 1d取材 ,行扫描电镜观察 ,比较对照组。结果 :4d后 ,松质骨面及孔内即有了细胞粘附生长 ,2 1d全部长满 ,有胶原纤维形成 ;对照组细胞没有长满。结论 :以MBC作为载体 。
- 彭磊胡蕴玉王臻王庆良孟国林白建萍李丹张志培
- 关键词：成骨细胞胶原生物相容性
- 骨肉瘤与活化B淋巴细胞融合疫苗的抗肿瘤效应
- 2002年
- 目的 建立骨肉瘤与活化 B淋巴细胞融合的肿瘤疫苗 ,探讨其生物学与抗肿瘤特性 .方法 以 50 0 g· L-1 聚乙二醇为融合剂 ,将 C3 h小鼠来源的 HGRPT基因缺陷型 LM9骨肉瘤细胞与脂多糖活化的小鼠 B淋巴细胞进行融合 .经HAT选择性培养基筛选后 ,再观察该融合瘤株的体内外生长特性 ,对小鼠的致瘤性以及抗肿瘤活性 .结果 该融合瘤株体外生长缓慢 ,对 C3 h小鼠无致瘤性 ,杂交瘤细胞细胞表达B7(70 .6% ) H- 2 Kb (53.4% ) ,融合疫苗保护的小鼠可获 1 0 0 %无瘤生存 (8/ 8)而 LM9和射线照射后的 L M9对照组小鼠全部死亡 (0 / 8) ,皮下接种融合疫苗治疗的荷瘤小鼠可获得80 %无瘤生存 .结论 活化 B淋巴细胞融合骨肉瘤细胞可能改变其生物学特性 ,对小鼠有较好的预防和治疗作用 。
- 王臻彭磊肖毅王喆朱德生吴银松王鹏飞许诺
- 关键词：骨肉瘤细胞融合
- 体外诱导尤文肉瘤DC疫苗的特异性抗肿瘤免疫鉴定及初步临床应用报告被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC疫苗体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力及临床初步应用的效果。方法:分离尤文肉瘤患者外周血单核细胞体外诱导为DC细胞。Trizol法提取患者尤文肉瘤细胞总RNA,总RNA转染DC并于体外诱导特异性CTL克隆扩增。RT-PCR方法检测肿瘤总RNA加载的DC细胞内EWS-FLI1mRNA的表达。MTT法检测淋巴细胞的增殖和CTL的杀伤活性。在试验成功基础上,将成熟DC疫苗接种患者并测定免疫学OKT值。结果:RT-PCR测定显示尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC细胞可以提呈肿瘤特异性抗原,并特异性地表达其特有序列EWS-FLI1。经总RNA转染的DC特异性表面标志及功能相关分子表达均上调,转染后的DC可显著刺激自体T淋巴细胞增殖。诱导的特异性CTL对携带EWS-FLI1抗原的靶细胞的杀伤率显著高于LAK细胞和未经转染的DC。经疫苗免疫的患者血清CD8明显升高(P<0.05)。结论:尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC疫苗可在体外诱导出特异性抗肿瘤免疫,并在临床初步证实可提高尤文肉瘤患者的特异性抗肿瘤免疫力。
- 芦斌桑宏勋王臻陈国景马超袁伟
- 关键词：树突状细胞尤文肉瘤肿瘤免疫
- 尤文肉瘤细胞总RNA修饰的树突状细胞的体外培养及其鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨树突状细胞(DC)经尤文肉瘤细胞总RNA加载后的体外RNA表达情况.方法:采用分离尤文肉瘤患者外周血单核细胞体外诱导DC,用流式细胞仪检测DC成熟后的表面标志,Trizol法提取患者尤文肉瘤组织总RNA,用总RNA转染DC,用RT-PCR方法检测肿瘤总RNA加载的DC的表达.结果:经尤文肉瘤总RNA加载的DC表面标记发生明显变化,DC的特异性表面标志如CD40由32.24%增高至72.32%,CD83由17.39%增高至30.97%,而代表单核细胞的CD14则由26.37%下降至10.46%,标志其抗原呈递功能显著增强.RT-PCR测定显示尤文肉瘤中的特异性序列EWS-FLI1可以和引物特异性结合,并且最佳结合温度为54℃.结论:尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC可以呈递肿瘤特异性抗原,并特异性的表达其特有序列EWS-FLI1.
- 王剑桑宏勋王臻郭征
- 关键词：树突细胞肉瘤EWING总RNA逆转录聚合酶链反应癌症疫苗
- 尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC疫苗体外诱导尤文肉瘤患者特异性抗肿瘤免疫的实验研究被引量：1
- 2006年
- 为了探讨尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC疫苗体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力,采用分离尤文肉瘤患者外周血单核细胞体外诱导DC细胞,Trizol法提取患者尤文肉瘤细胞总RNA,用总RNA转染DC并诱导特异性CTL的扩增,用RTPCR方法检测肿瘤总RNA加载的DC细胞的表达,用MTT法检测淋巴细胞的增殖和CTL的杀伤活性。结果RTPCR测定显示尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC细胞可以呈递肿瘤特异性抗原,并特异性地表达其特有序列EWSFLI1。经尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC特异性表面标志及功能相关分子表达均上调,转染后的DC可显著刺激自体T淋巴细胞增殖。诱导的特异性CTL对携带EWSFLI1抗原的靶细胞的杀伤率显著高于LAK细胞和未经转染的DC。说明尤文肉瘤细胞总RNA转染的DC疫苗可在体外诱导出特异性抗肿瘤免疫。
- 王剑桑宏勋王臻郭征
- 关键词：尤文肉瘤肿瘤免疫
- 骨肉瘤特异杀伤性T淋巴细胞的体外扩增被引量：1
- 2002年
- 目的 研究骨肉瘤特异性细胞毒性 T淋巴细胞(CTL)体外扩增培养的方法 ,并进行细胞毒检测 .方法 抽取骨肉瘤患者自身的外周血 ,分离淋巴细胞 ,用 IL- 2体外短期刺激方法提高对骨肉瘤细胞的免疫性 ,再按一定比例体外与多西紫杉醇处理的骨肉瘤细胞及巨噬细胞混合培养(MTL C)可获得骨肉瘤的特异性 CTL 细胞 ,进行鉴定并观察其杀伤特性 .结果 混合培养 4 d后 ,即可扩增出大量淋巴细胞 ,流式细胞仪证实主要是 CD8+ 细胞 ,这些具有杀伤活性的CTL 细胞体外对自身肿瘤细胞有很强的细胞毒作用 .结论 在 IL - 2作用下 ,应用巨噬细胞、自体肿瘤细胞及淋巴细胞体外混合培养 ,是体外扩增特异性细胞毒性 T淋巴细胞的较好方法 ,CTL
- 彭磊王臻王庆良王鹏飞胡蕴玉吴银松
- 关键词：骨肉瘤T淋巴细胞细胞毒性体外扩增
- 胶原-松质骨载体与成骨细胞相容性实验研究被引量：2
- 2001年
- 目的 :用胶原修饰松质骨载体表面 ,增加其生物相容性。方法 ;新鲜牛松质骨经脱脂、H2 O2 浸渍及部分脱钙处理 ,制成去抗原牛松质骨载体 ,载体表面经胶原处理后 ,将体外培养的兔骨膜成骨细胞复合在其表面 ,分别于 4、10和 2 0d取材 ,行扫描电镜观察 ,比较对照组。结果 :4d后 ,松质骨面及孔内即有了细胞粘附生长 ,2 0d全部长满 ,有胶原纤维形成 ,对照组细胞没有长满。结论 :以MBC作为载体 。
- 彭磊王臻王庆良胡蕴玉孟国林许永华李丹张志培
- 关键词：成骨细胞胶原
